石 良， 王錫昌， 劉 源， 盧 瑛

（上海海洋大學(xué) 食品學(xué)院，上海 201306）

羧基化磁性納米微球的表面生物修飾方法

石 良， 王錫昌， 劉 源， 盧 瑛＊

（上海海洋大學(xué) 食品學(xué)院，上海 201306）

采用A和B兩種羧基化磁珠，以山羊抗小鼠IgG為模式蛋白，優(yōu)化了EDC／sulfo－NHS法的羧基磁珠表面抗體的修飾條件，對(duì)比分析了抗體修飾前后磁珠粒徑和多分散系數(shù)（PDI）的變化，并利用競(jìng)爭性免疫層析法評(píng)價(jià)了磁珠表面修飾抗體的生物學(xué)活性。優(yōu)化結(jié)果顯示，不同粒徑和廠家的羧基磁珠，其表面的最佳抗體修飾條件是不同的。磁珠A抗體修飾前后的平均水力學(xué)粒徑變化率為6.55%，PDI分別為0.011和0.046，變化微小，而磁珠B在抗體修飾前后的平均水力學(xué)粒徑變化率為135.55%，分散性能變差。生物學(xué)活性評(píng)價(jià)結(jié)果顯示優(yōu)化條件下制備的磁珠A和B表面的抗體均具有較好的抗原結(jié)合活性，磁珠B的磁信號(hào)強(qiáng)于磁珠A。綜上所述，抗體修飾磁珠用于免疫層析檢測(cè)時(shí)，抗體修飾前后磁珠粒徑和分散性能的變化、材料的磁響應(yīng)性能對(duì)于檢測(cè)靈敏度和層析速度具有重要意義。

磁珠；生物修飾 ；EDC；免疫層析

超順磁性納米微球（Superparamagnetic nanoparticles，SMNs，簡稱磁珠）的主要特點(diǎn)是在外加磁場(chǎng)的作用下可以被磁化而顯示出磁性，能夠被迅速分離出來。當(dāng)外加磁場(chǎng)撤離后它沒有剩磁因而又可重新分散到液體中，其生物相溶性和懸浮穩(wěn)定性較好［1－2］。生物活性分子可通過磁珠表面的官能基團(tuán)結(jié)合到SMNs上，應(yīng)用于分離、檢測(cè)和臨床診斷等領(lǐng)域中［1，3－6］，是醫(yī)學(xué)、分子生物學(xué)、免疫學(xué)等研究中的重要載體工具。另外，研究顯示SMNs結(jié)合免疫層析技術(shù)和磁性分析系統(tǒng)可以實(shí)現(xiàn)定量的快速檢測(cè)，目前在人促絨毛性腺激素、心肌肌鈣蛋白及HIV病毒等的快速檢測(cè)中已有相應(yīng)報(bào)道［7－9］。

根據(jù)表面化學(xué)基團(tuán)的不同，磁珠可采用不同的化學(xué)交聯(lián)劑，如醛類（甲醛、戊二醛等）、碳化二亞胺類、雙環(huán)氧類物質(zhì)以及氰異酸鹽等［10］進(jìn)行生物分子的修飾。羧基化磁珠表面生物分子的修飾以碳二亞胺類中的1－乙基－（3－二甲基氨基丙基（EDC）縮合法最為常用。Gélinas等［11］成功地將 Diethylenetriamine（DETA）配體固定到羧基化磁珠的表面，并發(fā)現(xiàn)蛋白質(zhì)在功能化磁珠表面的偶聯(lián)率、生物學(xué)活性及磁珠粒徑的變化均會(huì)直接影響到其應(yīng)用效果［11－12］。作 者 以 山 羊 抗 小 鼠 （Goat anti－mouse，GAM）IgG為模式蛋白，以EDC與磺酸基琥珀酰亞胺 （sulfo－NHS）為交聯(lián)劑，對(duì)羧基化磁珠表面抗體的修飾條件進(jìn)行了優(yōu)化。此外，通過比較不同種類磁珠在修飾甲殼類主要過敏原原肌球蛋白（Tropomyosin，Tm）特異性抗體后的生物學(xué)活性，探討了適用于免疫層析檢測(cè)的羧基化磁珠的表面生物修飾方法。

1 材料與方法

1.1 材料

刀額新對(duì)蝦（Metapenaeus ensis）：購自上海泥城集貿(mào)市場(chǎng)。EDC、sulfo－NHS：上海延長生化公司產(chǎn)品；BSA：上海生工產(chǎn)品、無水嗎啉乙磺酸：MES，Shanghai Mdmy Science＆Technology公司產(chǎn)品；山羊抗鼠IgG：杭州隆基生物公司產(chǎn)品；其它均為國產(chǎn)分析純?cè)噭辉∏虻鞍准翱乖∏虻鞍讍慰篂閷?shí)驗(yàn)室自行制備純化；Protein G親和層析柱：GE公司產(chǎn)品；羧基化磁珠A、樣品墊、結(jié)合墊、硝化纖維膜、吸水紙、PVC底板：美國Magna Biosciences公司產(chǎn)品；羧基化磁珠B：上海奧潤微納公司產(chǎn)品。

磁信號(hào)檢測(cè)儀（Magnetic assay reader，MAR）：美國Magna Biosciences公司產(chǎn)品；HPPS5001高性能納米粒度分析儀：英國Malvern公司產(chǎn)品。

1.2 方法

1.2.1 原肌球蛋白及其特異性單克隆抗體的分離純化蝦類主要過敏原Tm的純化參照蔡秋鳳等［13］的方法并稍作修改?？筎m的單抗［14］為實(shí)驗(yàn)室前期研究成果，采用Protein G親和層析柱，按照產(chǎn)品所附操作說明進(jìn)行純化。

1.2.2 磁珠的表面生物修飾羧基化磁珠的表面GAM Ig G生物修飾采用EDC和NHS的化學(xué)交聯(lián)方法，其反應(yīng)原理如圖1所示。EDC與磁珠表面的羧基反應(yīng)，形成氨基反應(yīng)活性的O－?；逯虚g體，抗體的伯胺可與磁珠的該中間體反應(yīng)而修飾磁珠（途徑1）；另外該中間體在水溶液中不穩(wěn)定，易于水解，可重新生成羧基磁珠（途徑2），可通過加入sulfo－NHS可以將該中間體轉(zhuǎn)化為氨基反應(yīng)活性的NHS酯，加快與伯胺結(jié)合（途徑3）。具體操作流程如下：（1）活化反應(yīng)：取1 mg羧基磁珠于2 m L離心管中，用250μL 5 mmol／L MES 溶液含0.05 g／d LTween－20（簡稱MEST）作為活化緩沖溶液洗滌2次后，加入EDC與sulfo－NHS，其最終反應(yīng)體積為250μL，混合均勻后室溫旋轉(zhuǎn)反應(yīng)30 min。（2）偶聯(lián)反應(yīng)：以1 mmol／L的硼酸鹽溶液含0.05 g／d L Tween－20（簡稱BST）作為偶聯(lián)緩沖液，先用BST溶液洗滌磁珠2次，然后用適量BST溶液重懸磁珠，加入100μg GAM IgG抗體，最終反應(yīng)體積為250μL，室溫旋轉(zhuǎn)反應(yīng)4 h后回收反應(yīng)上清用于蛋白定量。（3）封閉處理：偶聯(lián)結(jié)束后加入250μL含有1 g／d L BSA的BST溶液（簡稱BST－BSA）室溫反應(yīng)30 min，以封閉殘留的活化基團(tuán)。最后用250 μL含0.02 g／d L Na3N 的 BST－BSA 重懸磁珠，4℃冷藏備用。

圖1 羧基磁珠的EDC／sulfo－NHS法表面抗體修飾原理圖Fig.1 Scheme of antibody modification on the surface of SMNs by EDC and sulfo－NHS method

1.2.3 磁性納米微球表面抗體修飾的條件優(yōu)化為探討最佳的抗體修飾條件，作者分別對(duì)不同p H值 （3.0～7.0）的 MEST活化緩沖液，不同活化反應(yīng)時(shí)間（10～50 min），不同交聯(lián)劑EDC的質(zhì)量分?jǐn)?shù)（0.125～2%），不同EDC／sulfo－NHS質(zhì)量比（4∶1～1∶4），不同p H 值（7.0～9.5）的BST偶聯(lián)緩沖液，不同偶聯(lián)反應(yīng)時(shí)間（1～6 h）及不同抗體加入量（25～150μg）均做了3次平行優(yōu)化實(shí)驗(yàn)，并通過檢測(cè)抗體修飾后羧基表面的抗體量即偶聯(lián)量進(jìn)行修飾效果的評(píng)價(jià)，具體實(shí)驗(yàn)操作同1.2.2所述。

1.2.4 磁珠粒徑分布檢測(cè)生物修飾前后羧基磁珠的水力學(xué)粒徑分布狀況和描述聚合物試樣相對(duì)摩爾質(zhì)量多分散程度的多分散系數(shù)（Polydispersity index，PDI）采用HPPS5001型高性能納米粒度分析儀進(jìn)行檢測(cè)，它基于懸浮液中顆粒的無規(guī)則運(yùn)動(dòng)（布朗運(yùn)動(dòng)）和對(duì)激光束的光散射原理，水力學(xué)尺寸是包括顆粒表面水化層在內(nèi)的粒徑分布，其中PDI值 越小，顆粒分散性越好。測(cè)量條件為：λ＝632.8 nm，T＝25℃。

1.2.5 抗體偶聯(lián)量的測(cè)定羧基磁珠表面抗體修飾后的蛋白質(zhì)含量以偶聯(lián)反應(yīng)后的回收上清液為樣本，采用經(jīng)典的Bradford法［15］檢測(cè)蛋白質(zhì)含量?？贵w偶聯(lián)量按下述公式進(jìn)行計(jì)算：

1.2.6 抗體修飾磁珠的生物學(xué)活性評(píng)價(jià)為評(píng)價(jià)磁珠表面所修飾抗體的生物學(xué)活性，利用優(yōu)化后的反應(yīng)條件制備過敏原Tm的特異性單抗修飾磁珠，并以此作為標(biāo)記載體構(gòu)建了競(jìng)爭性免疫層析試紙條。實(shí)驗(yàn)所用的免疫層析試紙條由PVC底板、樣品墊、結(jié)合墊、硝化纖維膜和吸水紙構(gòu)建而成；分別以PBS溶液（A1和 B1）、含0.05 mg／m L BSA 的PBS溶液（A2和B2）、含0.05 mg／m L過敏原 Tm的PBS溶液（A3～A4、B3～B4）（圖5）噴點(diǎn)在硝化纖維膜上作為檢測(cè)線T線，2 mg／m L羊抗鼠IgG噴點(diǎn)在硝化纖維膜形成控制線C線對(duì)磁珠表面修飾的抗體活性進(jìn)行了評(píng)價(jià)。T線和C線的噴點(diǎn)量均為1.0μL／cm。檢測(cè)時(shí)先取5μL單抗修飾磁珠（2 mg／m L）點(diǎn)于試紙條的結(jié)合墊處，然后在樣品墊處加入100μL PBS溶液或者含純化后的過敏原Tm的PBS待測(cè)溶液，室溫層析20 min后用MAR儀定量檢測(cè)C線和T線的磁信號(hào)。

2 結(jié)果與分析

2.1 活化反應(yīng)條件對(duì)抗體偶聯(lián)量的影響

不同活化反應(yīng)條件對(duì)羧基磁珠A和B表面抗體偶聯(lián)量的影響如圖2所示。由圖2（a）可知，磁珠A和B表面的抗體偶聯(lián)量隨p H值的升高均呈現(xiàn)下降趨勢(shì)；在相同p H值時(shí)，磁珠A的抗體偶聯(lián)量高于磁珠B，說明磁珠A的抗體修飾效果好于磁珠B。隨著活化反應(yīng)時(shí)間的增加，磁珠A和B表面的偶聯(lián)量均顯示出先顯著增加后逐漸下降趨勢(shì)，但是在相同的活化時(shí)間，磁珠A表面抗體偶聯(lián)量高于磁珠B，且兩種磁珠表面的最高抗體偶聯(lián)量所需要的活化反應(yīng)時(shí)間也是不同的。磁珠A在活化反應(yīng)20 min時(shí)其抗體偶聯(lián)量最高，而磁珠B則在活化反應(yīng)30 min時(shí)抗體偶聯(lián)量最高（圖2b）。相同偶聯(lián)條件下，磁珠A表面抗體偶聯(lián)量大于磁珠B，這是因?yàn)榇胖楸砻骠然颗c抗體偶聯(lián)量直接相關(guān)。磁珠A表面羧基含量為350μmol／g大于磁珠B的200 μmol／g。由圖1反應(yīng)原理圖可知羧基含量高使較多的活性集團(tuán)能與抗體伯胺進(jìn)行交聯(lián)。

在低p H時(shí)交聯(lián)劑EDC與羧酸形成的中間體不穩(wěn)定，容易分解［16］，但p H值過高時(shí)，部分不穩(wěn)定中間物水解可能會(huì)釋放出EDC或者使半穩(wěn)定的氨基反應(yīng)活性中間物的產(chǎn)量減少從而造成蛋白質(zhì)與中間物的取代反應(yīng)速度下降，使蛋白質(zhì)偶聯(lián)量下降［17］。因此在后續(xù)優(yōu)化實(shí)驗(yàn)中，磁珠A的活化反應(yīng)條件為：p H 5.0 MEST活化反應(yīng)20 min；磁珠B的活化反應(yīng)條件為：p H 5.0 MEST活化反應(yīng)30 min。

圖2 活化緩沖液pH（a）和活化時(shí)間（b）對(duì)抗體偶聯(lián)量的影響Fig.2 Effect of activation solution pH （a），activation time（b）on antibody coupling amount

2.2 交聯(lián)劑對(duì)抗體偶聯(lián)量的影響

交聯(lián)劑對(duì)磁珠表面抗體偶聯(lián)量的影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖3所示。由圖3（a）可知，不論是磁珠A還是磁珠B，當(dāng)交聯(lián)劑EDC質(zhì)量濃度小于0.5 g／d L時(shí)，抗體偶聯(lián)量呈現(xiàn)上升趨勢(shì)，在0.5 g／d L時(shí)達(dá)到最高值，其后隨著EDC質(zhì)量濃度的增加抗體偶聯(lián)量呈現(xiàn)下降趨勢(shì)。對(duì)于相同質(zhì)量濃度的EDC，磁珠A的抗體偶聯(lián)量高于磁珠B。對(duì)于EDC和NHS的不同質(zhì)量比，磁珠A和B均呈現(xiàn)出隨著質(zhì)量比的增加其抗體偶聯(lián)量也增加，并在1∶1后呈現(xiàn)飽和趨勢(shì)（圖3b）。根據(jù)上述結(jié)果，在后續(xù)優(yōu)化實(shí)驗(yàn)中EDC濃度選擇為0.5 g／d L，交聯(lián)劑 EDC和sulfo－NHS質(zhì)量比則為1∶1。

圖3 EDC質(zhì)量濃度（a）和EDC／sulfo－NHS質(zhì)量比（b）對(duì)抗體偶聯(lián)量的影響Fig.3 Effect of EDC concentration（a），EDC and sulfo－NHS mass ratio（b）on antibody coupling amount

2.3 偶聯(lián)反應(yīng)條件對(duì)抗體偶聯(lián)量的影響

偶聯(lián)反應(yīng)條件對(duì)磁珠表面抗體偶聯(lián)量的影響結(jié)果如圖4所示。由圖可見，磁珠A和B的表面抗體偶聯(lián)量均隨著偶聯(lián)緩沖液p H值的增加而增加，達(dá)到最大值后又降低，磁珠A和磁珠B分別在p H8.5和p H9.0時(shí)達(dá)最大抗體偶聯(lián)量。另外，磁珠A和磁珠B隨著抗體加入量和偶聯(lián)反應(yīng)時(shí)間的增加而增加，并逐漸趨向飽和。磁珠A在抗體加入125μg、偶聯(lián)反應(yīng)4 h時(shí)其抗體偶聯(lián)量最高，而磁珠B則在100μg抗體、偶聯(lián)反應(yīng)5h時(shí)出現(xiàn)最高偶聯(lián)量。在任一偶聯(lián)反應(yīng)點(diǎn)，磁珠A的抗體偶聯(lián)量均高于磁珠B。根據(jù)上述結(jié)果，后續(xù)的優(yōu)化實(shí)驗(yàn)中磁珠A和B的偶聯(lián)緩沖液p H值分別選擇8.5和9.0，磁珠A的最適偶聯(lián)反應(yīng)時(shí)間選擇了4 h，而磁珠B則為5 h?？紤]到單抗較難制備且價(jià)格較貴，因此作者認(rèn)為抗體加入量在75～100μg范圍內(nèi)進(jìn)行選擇較為經(jīng)濟(jì)，磁珠A和磁珠B在這個(gè)范圍的表面抗體密度為（33.05±1.11）～（44.36±1.35）μg。

圖4 偶聯(lián)緩沖液p H（a），偶聯(lián)時(shí)間（b）對(duì)抗體偶聯(lián)量的影響Fig.4 Effect of coupling buffer pH （a），coupling time（b）on antibody coupling amount

2.4 抗體修飾磁珠的粒徑分布檢測(cè)

磁珠經(jīng)抗體修飾后的粒徑變化用納米粒度分析儀進(jìn)行檢測(cè)，其結(jié)果如表1所示。由表可知，磁珠A在抗體修飾前后的平均水力學(xué)粒徑分別為248.6和264.9 nm，其粒徑變化率為6.55%，PDI分別為0.011和0.046，變化微小，說明磁珠的單分散性能較好；磁珠B在抗體修飾前后的平均水力學(xué)粒徑分別為104.9和247.1 nm，其粒徑變化率為135.55%，PDI由0.170變?yōu)?.451，說明磁珠B表面修飾抗體后，其單分散性能變差了。IgG型抗體在溶液中的最大長度為24 nm［18］，封閉液中的BSA尺寸較小，為9.5 nm［19］，以物理吸附方式結(jié)合在磁珠表面；因此抗體的修飾對(duì)磁珠的粒徑變化會(huì)有些許作用，但是磁珠B在修飾抗體后其粒徑出現(xiàn)了顯著性增加，其原因很可能是生物分子的修飾過程使磁珠粒子間的團(tuán)聚從而造成其水力學(xué)尺寸的變化，XU等［20］報(bào)道了磁珠洗滌重懸的過程可能使其粒徑和多分散系數(shù)變大。

表1 修飾抗體前后磁珠的特征Tab.1 Characteristics of SMN－A and B before and after antibody modification

2.5 抗體修飾磁珠的生物學(xué)活性評(píng)價(jià)

Tm特異性單抗修飾磁珠的生物性活性評(píng)價(jià)結(jié)果見圖5（定性）和表2（定量）。由圖5可見，A1～A2和B1～B2試紙條在檢測(cè)線（T線）處無條帶，其T線的磁信號(hào)也非常弱（表2），與定性結(jié)果相一致，說明抗體修飾磁珠在T線未被捕獲；A3和B3試紙條在T線處有明顯的條帶，而A4和B4試紙條則顯示出微弱條帶，由表2可知A3和B3在T線處的磁信號(hào)為3 381.2和8 039.5 MAR，A4和B4分別為217.8和431.8 MAR，定量檢測(cè)結(jié)果與肉眼觀察的定性結(jié)果相吻合。

作者對(duì)單抗修飾磁珠的生物學(xué)評(píng)價(jià)采用的是競(jìng)爭性抗原抗體反應(yīng)原理，即T線上不噴點(diǎn)抗原時(shí)，試紙條上的抗體修飾磁珠因?yàn)闆]有抗原抗體的結(jié)合反應(yīng)而不能停留在T線上，若T線上噴點(diǎn)有抗原時(shí)，T線處就會(huì)有抗體修飾磁珠因特異性反應(yīng)而被捕獲從而停留在此處，此時(shí)T線就會(huì)顯示出磁珠所帶的顏色，停留量與顏色強(qiáng)弱成正比。A1和B1檢測(cè)線處噴點(diǎn)的是PBS溶液，T線無條帶而C線有條帶說明試紙條體系是有效的；A2和B2檢測(cè)T線處噴點(diǎn)有含0.05 mg／m L BSA的PBS溶液，檢測(cè)后T線未出現(xiàn)條帶說明抗體修飾磁珠A和B均無假陽性反應(yīng)。A3～A4、B3～B4試紙條在T線噴點(diǎn)的是過敏原Tm溶液，因A3和B3樣本是PBS溶液無競(jìng)爭性反應(yīng)，而A4和B4樣本中含有過敏原Tm，有競(jìng)爭性反應(yīng)因而T線條帶的顏色弱于A3和B3，上述樣本的定量檢測(cè)結(jié)果與肉眼觀察結(jié)果相一致，說明優(yōu)化后的修飾方法制備所得抗體修飾磁珠A和B均具有較好的抗原結(jié)合活性，可應(yīng)用于后續(xù)的免疫學(xué)檢測(cè)中。

表2 抗體修飾磁珠A和B的磁信號(hào)比較Tab.2 Comparison of magnetic signal between antibody modifying SMN－A and B

圖5 抗體修飾磁珠A（a）和B（b）免疫層析效果比較Fig.5 Comparison of LFIA between antibody modifying SMN－A（a）and B（b）

3 結(jié)語

作者以GAM IgG為模式蛋白對(duì)羧基化磁珠的表面生物修飾方法進(jìn)行了研究，修飾反應(yīng)的優(yōu)化實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示不同來源的磁珠，其表面的最佳抗體偶聯(lián)條件是不同的；此外，發(fā)現(xiàn)在相同的條件下，磁珠A表面抗體偶聯(lián)量均大于B。分析其原因，除于磁珠表面的羧基含量直接相關(guān)外，還可能與磁珠的單分散性能相關(guān)，磁珠的團(tuán)聚會(huì)使其表面暴露的活性集團(tuán)減少從而造成生物分子偶聯(lián)量的降低。免疫層析檢測(cè)結(jié)果表明這兩種磁珠在生物修飾后其表面的抗體均具有較好的抗原結(jié)合活性。但是B3的T線磁信號(hào)（8 039.5 MAR）大大高于 A3（3 381.2 MAR），而C線磁性號(hào)大大低于磁珠A3。其原因很可能是因?yàn)榇胖锽經(jīng)抗體修飾后其多分散性能下降，磁珠間發(fā)生了一定的團(tuán)聚，從而對(duì)層析造成了物理屏障而使磁珠被截留引起的。雖然磁珠B的分散性較磁珠A差，但是其磁響應(yīng)性強(qiáng)（B3和A3），這有助于提高定量檢測(cè)靈敏度。但是在實(shí)際應(yīng)用時(shí)往往以C線的強(qiáng)弱來判斷試紙條的有效性，因此C線信號(hào)過弱易造成結(jié)果誤判。

綜上所述，對(duì)于不同廠家的同類型磁珠，即便是修飾同一生物分子，其生物分子所需的最佳修飾條件是不同的，會(huì)受到粒徑、官能基團(tuán)含量等因素的影響。因此在應(yīng)用此類磁珠進(jìn)行免疫層析檢測(cè)時(shí)，尚需要考慮材料的磁性成分含量、多分散性能等因素，研究結(jié)果顯示抗體修飾前后磁珠粒徑和分散性能的變化、材料的磁相應(yīng)性能對(duì)于檢測(cè)靈敏度和層析速度具有重要意義。

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Surface Biological Modification Research on Carboxylated Magnetic Nanoparticles

SHILiang，WANGXi－chang，LIUYuan，LUYing＊

（College of Food Science and Technology，Shanghai Ocean University，Shanghai 201306，China）

Using goat anti－mouse IgG monoclonal antibody as model protein，antibody modification conditions on the surface of carboxylated superparamagnetic nanoparticles（SMN）A and B were optimized，then hydrodynamic sizes and polydispersity index（PDI）of SMN－A and B before and after antibody modification were compared.Additionally，the biological activity of modifying antibodies was assessed by a competitive format lateral flow immunoassay（LFIA）.Optimization results indicated that the best modification conditions were different for SMNs of different sizes and manufactures.Before and after modification，the hydrodynamic size change rate of SMN－A was 6.55%，PDI were 0.011 and 0.046，respectively，the change was minor，while hydrodynamic size change rate of SMN－B was 135.5%，and the dispersivity became worse.Furthermore，the antibody modifying on SMN－A and B both showed good biological activities by LFIA test，and SMN－A indicated better lateral flow performance.Briefly，if antibody modifying SMNs were chosen as labels in LFIA test，size and dispersivity change before and after modification，magnetic signal intensity of the material had great mean in improving detection sensitivity and assay rate.

magnetic nanoparticles，biological modification，EDC，lateral flow immunoassay

Q 819

A

1673－1689（2012）01－071－07

2011－03－31

“十一五”國家科技支撐計(jì)劃項(xiàng)目（2008BAD94B09）；上海市教育委員會(huì)優(yōu)秀青年教師基金項(xiàng)目（B－8101－09－0036）；上海市科技興農(nóng)重點(diǎn)攻關(guān)項(xiàng)目（滬農(nóng)科攻字（2009）第6－1號(hào)）；上海市教育委員會(huì)重點(diǎn)學(xué)科建設(shè)項(xiàng)目（J50704）。

＊

盧瑛（1971－），女，上海人，副教授，主要從事納米生物學(xué)與食品安全風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估研究。Email：y－lu＠shou.edu.cn.