張文靜，王琳琳，宋樹英

（1.河北北方學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院組胚教研室，河北 張家口075000；2.河北北方學(xué)院附屬第一醫(yī)院腎內(nèi)科，河北 張家口075000；3.河北北方學(xué)院附屬第二醫(yī)院，河北 宣化075100）

動脈粥樣硬化 （ather oscler osis，AS）是嚴(yán)重威脅人類健康和生命的心血管疾病.血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷，導(dǎo)致脂質(zhì)沉著明顯增加，促進細(xì)胞黏附、遷移和平滑肌細(xì)胞增殖，伴隨血漿凝血、纖溶機制受損，生長因子、趨化因子增多等一系列反應(yīng).目前被普遍接受的Ross“損傷反應(yīng)”學(xué)說認(rèn)為血管內(nèi)皮功能障礙是動脈粥樣硬化形成的早期始動環(huán)節(jié)，并且貫穿動脈粥樣硬化發(fā)生發(fā)展的全過程［1］.心脈隆注射液的有效成分為多肽、核苷及復(fù)合氨基酸等.本實驗用心脈隆注射液干預(yù)大鼠動脈粥樣硬化的形成，觀察其對內(nèi)皮細(xì)胞功能的影響，為臨床治療動脈粥樣硬化提供實驗依據(jù).

1 材料與方法

1.1 實驗動物

清潔級Wistar大鼠40只，健康，成年，雄性，體質(zhì)量160～190 g，購于北京軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實驗動物中心.

1.2 動物飼料

參照文獻［2］的方法配制大鼠高脂飼料，在普通飼料中添加3.5%膽固醇，10%豬油，0.2%丙基硫氧嘧啶、0.5%膽酸鈉，5%白糖.

1.3 藥品與試劑

膽固醇、膽酸鈉購于北京奧博星生物技術(shù)責(zé)任有限公司；丙硫氧嘧啶片購于上海信誼藥廠有限公司；維生素D3購于上海通用藥業(yè)股份有限公司；心脈隆注射液購于云南騰沖制藥廠 （批號：國藥準(zhǔn)字Z20060443）；辛伐他汀滴丸購興安藥業(yè)有限公司；一氧化氮 （NO）試劑盒購于南京建成生物工程研究所；內(nèi)皮素 （ET）、血栓素 （TXB2）、6－酮－前列素F1a（6－Keto－PGF1a）放免試劑盒購于解放軍總醫(yī)院科技開發(fā)中心放免所.

1.4 實驗方法

1.4.1 動脈粥樣硬化模型的建立 所有40只大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)一周，隨機取其中30只參照文獻 ［2］的方法復(fù)制動脈粥樣硬化大鼠模型，大鼠自由進食進水，進食為高脂飼料，并一次性腹腔注射維生素D365萬單位／kg體質(zhì)量，由于丙基硫氧嘧啶味苦，故在制備高脂飼料時未與普通飼料混合，而是每天灌胃給予以免影響大鼠的進食量，劑量按照大鼠每天喂食飼料量的0.2%灌胃給予，持續(xù)喂養(yǎng)8周.

1.4.2 給藥方法及分組 造模的30只大鼠再隨機分為3組分別為：模型組、辛伐他汀組及心脈隆治療組，每組各10只.其余10只為正常組.辛伐他汀組大鼠按5 mg／kg體質(zhì)量每天灌胃給予辛伐他汀一次，心脈隆治療組大鼠按5 mg／kg體質(zhì)量每天腹腔注射心脈隆一次，正常組和模型組大鼠給予同體質(zhì)量比例的生理鹽水每天一次腹腔注射.共8周.正常組普通飼料自由進食進水.

1.4.3 標(biāo)本的采集與測定 實驗在第8周最后一次給藥后，所有實驗大鼠禁食12 h，不禁水，斷尾取血約6 mL，3 mL室溫靜置30 min，3 000 r／min離心15 min，取上清液置－20℃待測血清NO的含量.另3 mL，4℃，4 000 r／min離心20 min，留取上清－20℃保存待測血漿ET、TXB2（TXA2在體內(nèi)極不穩(wěn)定，在短時間內(nèi)可水解成無活性的血栓素B2，故測定TXB2來反映TXA2的含量）、6－Keto－PGF1a（PGI2前列環(huán)素）不穩(wěn)定，國內(nèi)外一般以其穩(wěn)定產(chǎn)物6－Keto－PGF1a做為判斷其濃度的指標(biāo)）的含量.各數(shù)值的測定操作步驟嚴(yán)格按照試劑盒上的操作規(guī)程執(zhí)行.

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法

2 結(jié) 果

模型組大鼠血清NO和血漿6－Keto－PGF1a的含量較正常組相比有明顯的降低（P＜0.01），血漿ET含量比正常組有明顯的升高（P＜0.01），血漿TXB2的含量有所升高但差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義.心脈隆治療組和辛伐他汀組大鼠與模型組大鼠相比較血清NO和血漿6－Keto－PGF1a的含量顯著升高（P＜0.05），血漿ET含量明顯降低（P＜0.05），血漿TXB2的含量有降低但差異無統(tǒng)計學(xué)意義.心脈隆治療組與辛伐他汀組之間各指標(biāo)含量沒有明顯的差異，見表1.

表1 治療前后各組大鼠 ET、TXB2、6－Keto－PGF1a、NO含量的變化s）

表1 治療前后各組大鼠 ET、TXB2、6－Keto－PGF1a、NO含量的變化s）

注：與正常組比 較＊P＜0.01，與模型組比較＃P＜0.05

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3 討 論

血管內(nèi)皮功能障礙是動脈粥樣硬化形成的早期始動環(huán)節(jié)，并且貫穿動脈粥樣硬化發(fā)生發(fā)展的全過程.內(nèi)皮細(xì)胞是全身血管內(nèi)膜的屏障結(jié)構(gòu)，具有多方面的生理功能，主要為調(diào)節(jié)血管張力、維持凝血和纖溶系統(tǒng)之間的平衡、抑制血小板的聚集和活性等，同時也是一個重要的內(nèi)分泌器官，血管內(nèi)皮細(xì)胞分泌的內(nèi)皮源性收縮因子有血栓素A2和ET等［3］，內(nèi)皮源性舒張因子有前列環(huán)素、NO等，收縮因子和舒張因子是否平衡直接影響了血管張力.

PGI2和TXA2是花生四烯酸 （AA）的代謝產(chǎn)物，二者一起參與調(diào)節(jié)血小板活性和血管張力.TXA2是強烈的血管收縮劑和血小板聚集促進劑，PGI2是血管內(nèi)皮細(xì)胞分泌的重要舒血管物質(zhì)，具有阻止血小板黏附聚集、抑制血栓形成、保護血管內(nèi)皮的生物活性作用.TXA2的半衰期只有30s，很快就轉(zhuǎn)化為無生物活性的TX B2，PGI2的半衰期也很短，僅為10s，很快就代謝為6－酮－前列素Fla（6－Keto－PGF1a）.故一般通過測定血漿中TXB2和6－Keto－PGF1a的含量反應(yīng)TXA2和PGI2的水平.血液中脂質(zhì)質(zhì)量和數(shù)量的異常，引起血管內(nèi)皮細(xì)胞的損傷，使之產(chǎn)生PGI2的功能下降，在受損內(nèi)皮黏附血小板及脂質(zhì)過氧化的參與下，進一步刺激血小板合成并釋放大量的TXA2入血，黏附更多的血小板形成血栓；從而誘發(fā)白細(xì)胞附壁、炎性浸潤、纖溶活性降低，并能促進內(nèi)皮細(xì)胞釋放生長因子，刺激成纖維細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞的增生和遷移，形成動脈粥樣硬化［4］.

NO、ET是一對重要的內(nèi)皮依賴性舒張血管和收縮血管的因子［5］，內(nèi)皮源性NO與ET的平衡失調(diào)，也就是NO合成與釋放減少和ET合成與釋放的異常增加，與AS的形成有密切的關(guān)系.NO是由一氧化氮合酶 （NOS）催化L－精氨酸而產(chǎn)生的，具有擴張血管、抑制多種血細(xì)胞對內(nèi)皮的黏附和損傷，抑制血小板活化聚集，抗血管平滑肌細(xì)胞增生等作用，可以抑制或延緩AS的發(fā)生和發(fā)展.ET具有收縮血管，促使血小板黏附聚集等作用，是目前所知的作用最強、最持久的縮血管肽，對AS的發(fā)展具有促進作用.ET還可通過ET（B）受體發(fā)揮刺激NO合成和釋放的作用.當(dāng)發(fā)生動脈粥樣硬化時內(nèi)皮細(xì)胞受損，ET合成和釋放增多，NO分泌減少［6］.

心脈隆注射液是由美洲大蠊干品經(jīng)過浸漬、減壓濃縮、分離得到心脈隆浸膏再溶解后制得，有效成分為多肽、核苷及復(fù)合氨基酸等.心脈隆注射液對心血管系統(tǒng)具有多方面作用，可以增加心肌收縮力、擴張血管、利尿、降低肺動脈壓、抑制ET分泌等［7］.本實驗研究顯示，心脈隆注射液能夠有效的降低動脈粥樣硬化大鼠血漿ET的含量，顯著提高血清NO和血漿6－Keto－PGF1a的含量，從而有效地保護了內(nèi)皮細(xì)胞的功能，對動脈粥樣硬化的治療起到了良好作用，在療效上與臨床上常用的辛伐他汀幾乎相同，但其卻具有中藥作用持久，副作用小的特點.

［1］ 白霞，牛麗穎，劉嬌，等.淡豆豉防治早期動脈粥樣硬化大鼠血管損傷的機制研究 ［J］.時珍國醫(yī)國藥，2008，19（1）：170－171

［2］ 趙娟，李相軍，孫波.維生素D3聯(lián)合高脂飼料建立大鼠動脈粥樣硬化模型 ［J］.實用醫(yī)學(xué)雜志，2009，25（21）：3569－3571

［3］ Scotland RS，Madhani M，Chauhan S，et al.Investigation of vascular responses in endothelial nitric oxide synthase／yclooxygenase－1 double－knockout mice：key role for endotheliu m－derived hyper polarizing factor in the regulation of blood pressure in vivo ［J］.Circulation，2005，111 （6）：796

［4］ 孫玉鳳，陳志強，丁奇峰，等.姜黃素對高脂血癥大鼠TXB2、6－Keto－PGF1α的影響 ［J］.河北中醫(yī)，2008，30（5）：533－534

［5］ Taddei S，Ghiadoni L，Virdis A，et al.Clinical significance of the assess ment of endothelial f unction ［J］.Ital Heart J Suppl，2004，5 （5）：357

［6］ 王瑞鑫，王春波，羅世濱，等.SS－GAG對高糖狀態(tài)下血管內(nèi)皮細(xì)胞NO釋放及ET－1分泌的影響 ［J］.山東大學(xué)學(xué)報：醫(yī)學(xué)版，2008，46 （4）：358－361

［7］ 唐曉鴻.心脈隆注射液藥理作用和治療心理衰竭臨床研究進展 ［J］.中國新藥雜志，2008，17（6）：461－464