薛毅博 郭曉煥

河南省駐馬店市食品藥品檢驗所，河南駐馬店 463000

高效液相色譜法測定人參補氣膠囊中人參皂苷的含量

薛毅博 郭曉煥

河南省駐馬店市食品藥品檢驗所，河南駐馬店 463000

目的建立人參補氣膠囊中人參皂苷Rg1的高效液相色譜檢測方法。方法高效液相色譜條件為：色譜柱：Diamonsil C18（150 nm×4.6 nm，5μm），流動相：乙腈-水（25︰75），紫外檢測波長：204 nm，流速為 1.0 mL/min，柱溫為30℃, 進樣量為10μL。結(jié)果以峰面積A為縱坐標(biāo)，濃度C為橫坐標(biāo)，計算得到回歸方程Y=793 513X-7 482，R2=0.999 7，結(jié)果顯示人參皂苷Rg1在0.100～0.902 mg/mL濃度范圍內(nèi)，其濃度與峰面積具有良好的線性關(guān)系，另外本法測定的精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性及加樣回收率考察均具有較好結(jié)果。結(jié)論本研究建立的人參補氣膠囊中人參皂苷含量的高效液相色譜法具有快速、穩(wěn)定性，可以用于本藥物中人參皂苷Rg1的含量測定。

人參補氣膠囊；高效液相色譜法；人參皂苷；含量檢測

人參補氣膠囊是由人參，紅參須，生曬參3味中藥材制成的中藥膠囊制劑[1]，具有大補元氣、補益脾肺、生津安神的功效，臨床主要用于肺虛咳喘、津傷口渴、久病體虛、失眠驚悸等癥[2]。隨著本制劑在臨床的應(yīng)用不斷增加，對本藥物的質(zhì)量控制也成為了一項值得關(guān)注的問題。本研究采用高效液相色譜法進行了人參補氣膠囊中人參皂苷Rg1的含量測定，確立了對于Rg1在本制劑中含量的測定方法，其結(jié)果快速、準(zhǔn)確、重復(fù)性較好，現(xiàn)報道如下。

1 儀器與試劑

Agilent 1200高效液相色譜儀；乙腈（上海國藥集團，色譜純）；去離子水（自制）；其他試劑均為分析純；人參皂苷Rg1對照品（中國藥品生物制品檢定所）；人參補氣膠囊（廣東宏興集團股份有限公司宏興制藥廠，批號：120204）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性

色譜柱：Diamonsil C18（150 nm×4.6 nm，5μm），流動相：乙腈-水（25∶75），紫外檢測波長：204 nm，流速為1.0 mL/min，柱溫為30℃，進樣量為10μL。按Rg1峰計算理論塔板數(shù)應(yīng)＞3 000，與相鄰雜質(zhì)峰分離度應(yīng)＞1.5。

2.2 對照品與供試品溶液的制備

對照品：將12.5 mg人參皂苷Rg1對照品用甲醇溶液，定量至25 mL混勻即得。供試品：取藥物1 g于40 mL甲醇中超聲提取30 min，并用甲醇定量至50 mL，過濾，取25 mL濾液蒸干后，加入30 mL去離子水溶液，再加入30 mL乙醚振蕩提取，分離水液后用30 mL正丁醇提取， 分離正丁醇部位減壓干燥，再用20 mL甲醇溶液后過濾即得。

2.3 線性關(guān)系考察

精密稱取50 mg Rg1對照品，加甲醇溶解并定量至50 mL，分別稱取 Rg1 對照品溶液 0.1、0.3、0.5、0.7、0.9 mL，并加甲醇溶解并定量至10 mL，按上述測定條件測定，以峰面積A為縱坐標(biāo)，濃度C為橫坐標(biāo)，計算得到回歸方程Y=793 513X-7 482，R2=0.999 7。結(jié)果顯示人參皂苷Rg1在0.100～0.902 mg/mL濃度范圍內(nèi)，其濃度與峰面積具有良好的線性關(guān)系。

2.4 精密度、穩(wěn)定性及重復(fù)性考察

精密稱取對照品溶液7次，按上述方法測定峰面積，結(jié)果顯示人參皂苷Rg1的峰面積RSD為1.18%，表明儀器精密度良好。取供試品溶液，分別在 0、2、4、6、8、10、12 h 進樣，按上述方法測定，結(jié)果顯示RSD為0.85%，表明測定方法的穩(wěn)定性良好。取同一批次樣品，按供試品方法制備樣品并進樣測定，結(jié)果顯示Rg1的平均含量為20.99 mg/g，RSD為1.19%，表明方法重復(fù)性良好。

2.5 加樣回收率試驗及樣品含量測定

精密稱取6份供試品各0.5 g于50 mL容量瓶中，分別加入1.0 mL對照品溶液，加入甲醇39 mL, 超聲提取30 min，并用甲醇定量至50 mL，過濾，取25 mL濾液蒸干后，加入30 mL去離子水溶液，再加入30 mL乙醚振蕩提取，分離水液后用30 mL正丁醇提取，分離正丁醇部位減壓干燥，再用20 mL甲醇溶液后過濾得供試品溶液，按上述方法測定結(jié)果顯示平均回收率為97.84%，RSD為0.71，表明回收率較好。取3批樣品，按上述方法測定得3批樣品中人參皂苷Rg1的含量分別為6.54 mg/粒、6.57 mg/粒、6.59 mg/粒。

3 討論

本研究中建立的人參補氣膠囊中人參皂苷Rg1含量的高效液相色譜測定法具有準(zhǔn)確性高、穩(wěn)定性強等特點，這與實驗中進行的各項測定條件的細(xì)致考察密切相關(guān)。對于提取溶劑的考察，筆者分別選用了甲醇、30%甲醇、50%甲醇、70%甲醇、95%乙醇為供試品提取試劑進行了提取，結(jié)果顯示甲醇提取率要高于其它溶劑，因此選用甲醇作為提取試劑。超聲提取時間作了 10、20、30、40、50、60 min 的考察，結(jié)果顯示 30 min 后提取量基本一致，因此選擇最短時間30 min作為提取時間。另外，流動相的選擇則參考文獻(xiàn)進行了預(yù)試[3-4]，采用乙腈-水（25∶75）為流動相，實驗最終結(jié)果顯示基線及分離效果都較好，與文獻(xiàn)報道基本一致。對于檢測波長的選擇，本研究也做了相關(guān)考察，用對照品溶液進行了紫外分光光度法檢測，200～800 nm波長掃描結(jié)果顯示人參皂苷Rg1在204 nm波長時具有最大吸收度，因此本研究確定了204 nm的紫外檢測波長。從本研究結(jié)果可以看到，無論是線性關(guān)系考察，還是精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性和加樣回收率試驗均顯示本方法具有良好的特性。

因此，本研究建立的人參補氣膠囊中人參皂苷含量的高效液相色譜法具有快速、穩(wěn)定及可靠性，可以用于本藥物中人參皂苷Rg1的含量測定，對于實際藥品的檢驗工作具有一定的指導(dǎo)意義。

[1]史紅英，章小敏，王宇，等.人參補氣膠囊的藥物制劑工藝與質(zhì)量控制研究[J].中國藥劑學(xué)雜志，2010，4（12）：210-213.

[2]張欣，唐會美，張科.人參的現(xiàn)代復(fù)方制劑藥效學(xué)與毒理學(xué)研究進展[J].藥物與臨床，2011，21（24）：328-332.

[3]李虎，沈曉明，王敏，等.人參皂苷類成分的高效液相色譜法分析條件控制與應(yīng)用[J].中藥成分分析學(xué)報，2009，12（24）：194-198.

[4]孟理分，李志，鐘小琴，等.人參中有效成分的分離與檢測手段方法分析探討[J].臨床中藥與分析學(xué)雜志，2010，10（21）：231-233.

The HPLC method of ginsenoside content detection for the Qinseng-Tonifying-Qi capsule

XUE Yibo GUO Xiaohuan
Institute for Food and Drug Control of Zhumadian City, Zhumadian 463000, China

ObjectiveTo establish the high performance liquid chromatography method of ginsenoside content detection for the Ginseng-Tonifying-Qi capsule.MethodsThe detection condition as follows: the chromatographic column was Diamonsil C18(150 nm×4.6 nm,5μm), the mobile phases was acetonitrile-water(25︰ 75), the ultraviolet detection wavelength was 204 nm, the flow rate was 1.0 mL/min, the column temperature was 30℃ , the simple amount was 10μL.Results The regression equation(Y=793 513X-7 482，R2=0.999 7) was established based on the peak area A as Y-axis and concentration C as X-axis, the peak area has a good linear relation with concentration when the Ginsenoside concentration in the range of 0.100-0.902 mg/mL. In addition, the accuracy, stability, repeatability and recovery rate of this method was good.Conclusion The HPLC method this study established for the detection of ginsenoside in Ginseng-Tonifying-Qi capsule has a rapid, stable characteristic, and could be used in the ginsenoside Rg1 content detection.

Ginseng-Tonifying-Qi capsule; HPLC method; Ginsenoside; Content detection

R445

B

2095-0616（2012）18-105-02

2012-06-15）