吳甦潛，張欣欣

1. 上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院瑞金臨床醫(yī)學(xué)院醫(yī)學(xué)系，上海 200025； 2. 上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬瑞金醫(yī)院感染科，上海 200025

自1989年發(fā)現(xiàn)丙型肝炎病毒(hepatitis C virus，HCV)以來(lái)，目前全球仍缺乏有效的治療性或預(yù)防性HCV疫苗。由于宿主免疫應(yīng)答極為復(fù)雜，HCV基因組高度變異，免疫逃避方式多樣；同時(shí)，理想的組織培養(yǎng)模型和動(dòng)物感染模型有限，疫苗研制障礙重重。近年來(lái)，假病毒顆粒模型、通過(guò)克隆感染者肝細(xì)胞內(nèi)HCV全基因組構(gòu)建的組織培養(yǎng)模型、HCV感染小鼠模型[1]的出現(xiàn)為研究提供了較理想的模型。

HCV為帶包膜的單股正鏈RNA病毒，其基因組在宿主信號(hào)肽酶和自身編碼蛋白酶的作用下生成3種結(jié)構(gòu)蛋白(核心蛋白、E1、E2)和7種非結(jié)構(gòu)蛋白(p7、NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A、NS5B)。其中E1和E2為包膜糖蛋白，是中和抗體的主要靶抗原。HCV侵入人體后能引發(fā)多種途徑的保護(hù)性免疫；與此同時(shí)，HCV也通過(guò)多種途徑實(shí)現(xiàn)免疫逃避。因此，清除HCV感染需大量強(qiáng)大的并能產(chǎn)生廣譜交叉反應(yīng)的T細(xì)胞和中和抗體。部分患者可通過(guò)天然免疫清除HCV急性感染[2]，但人類依靠自身防護(hù)無(wú)法建立針對(duì)HCV的長(zhǎng)久免疫。目前，一系列臨床和臨床前期試驗(yàn)提示，人類有望獲得有效的HCV疫苗[3]。

1 處于臨床前期試驗(yàn)階段的疫苗研究計(jì)劃

1.1 HCV類病毒顆粒疫苗

動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明，類病毒顆粒(virus-like particle, VLP)不僅能誘發(fā)針對(duì)HCV結(jié)構(gòu)蛋白的特異性細(xì)胞和體液免疫應(yīng)答[4]，聯(lián)合HCV中和抗體[5]，引發(fā)細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞(cytotoxic T lymphocyte，CTL)免疫應(yīng)答[4,6]，還促使人樹突細(xì)胞(dendritic cell，DC)成熟[7]。同時(shí)，能在其表面的AR3蛋白上形成特異性中和表位，這也是一大特征。小鼠實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，有一種HCV的VLP疫苗能同時(shí)誘發(fā)特異性細(xì)胞免疫和體液免疫應(yīng)答[5]，但其效力及相關(guān)免疫應(yīng)答的持久性仍需進(jìn)一步研究。

1.2 重組蛋白疫苗

有一種重組蛋白疫苗在小鼠實(shí)驗(yàn)獲得了理想的結(jié)果。此疫苗由重組的HCV 核心蛋白-NS3-NS4-NS5a-NS5B多聚蛋白配以MF59佐劑制成。小鼠實(shí)驗(yàn)表明，它可誘發(fā)針對(duì)核心蛋白和NS蛋白的廣泛CD4+T細(xì)胞及CD8+T細(xì)胞免疫應(yīng)答[8]。此外，研究人員設(shè)計(jì)了一種將重組蛋白疫苗與減毒病毒顆粒聯(lián)用的免疫計(jì)劃，小鼠實(shí)驗(yàn)表明其能誘導(dǎo)E1/E2/NS3～5相關(guān)的細(xì)胞免疫應(yīng)答及E1/E2相關(guān)的體液免疫應(yīng)答，且作用廣泛而強(qiáng)烈[9]。

1.3 合成肽疫苗

動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明，合成肽若同時(shí)表達(dá)特異性主要組織相容性復(fù)合體(major histocompatibility complex，MHC)Ⅰ類表位及T輔助細(xì)胞(T helper cell, Th細(xì)胞)表位，可誘發(fā)CD8+T細(xì)胞產(chǎn)生免疫應(yīng)答[10]。表達(dá)Th細(xì)胞及CD8+T細(xì)胞表位的高免疫原性合成肽還可促進(jìn)DC成熟[11]。但由于合成肽疫苗只能表達(dá)有限的線性表位，因此未能誘發(fā)廣泛的免疫應(yīng)答[12]。有一種免疫原同時(shí)包含了表達(dá)數(shù)個(gè)潛在交叉中和表位、Th細(xì)胞表位的合成肽以及作為佐劑的脂質(zhì)啉(lipid moiety)[13]，小鼠實(shí)驗(yàn)顯示其能誘導(dǎo)出一種針對(duì)HCV的廣泛交叉中和抗體，但該抗體效價(jià)相對(duì)偏低。

2 處于臨床試驗(yàn)階段的HCV疫苗

目前已進(jìn)入臨床試驗(yàn)階段的HCV候選疫苗共有12種(表1)，其中1種疫苗因Ⅱ期臨床試驗(yàn)結(jié)果不理想而停止了研制。

2.1 預(yù)防性疫苗

理想的預(yù)防性HCV疫苗應(yīng)能使機(jī)體對(duì)HCV及其所有準(zhǔn)種產(chǎn)生強(qiáng)烈的細(xì)胞和體液免疫應(yīng)答，以達(dá)到抵制變異HCV侵襲的目的。但是，研究人員面臨三大難題：①人類白細(xì)胞抗原(human leukocyte antigen，HLA)Ⅰ的限制；②每個(gè)機(jī)體的T細(xì)胞應(yīng)答層次各異；③研制出的疫苗帶有的E1/E2蛋白表位須與HCV內(nèi)相應(yīng)表位構(gòu)象一致。目前進(jìn)入臨床試驗(yàn)階段的預(yù)防性疫苗共有2種，皆為重組蛋白疫苗，但無(wú)一能完全克服以上3個(gè)障礙[12]。

2.1.1 HCV E1E2 疫苗

該疫苗含有HCV的E1、E2蛋白，并配以MF59(水包油乳劑)。針對(duì)HCV陰性受試者的Ⅰ期臨床試驗(yàn)(隨機(jī)、安慰劑對(duì)照)結(jié)果顯示，實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組在不良反應(yīng)方面無(wú)明顯差異，實(shí)驗(yàn)組能測(cè)到針對(duì)E1、E2的抗體存在。證明此疫苗總體耐受性良好且安全，并可產(chǎn)生一定程度的體液免疫應(yīng)答[14]。

2.1.2 HCV核心蛋白 ISCOMATRIX 疫苗

此疫苗由HCV核心蛋白配以ISCOMATRIX佐劑制成。30名健康受試者的Ⅰ期臨床試驗(yàn)結(jié)果顯示，其中29人能測(cè)得相關(guān)抗體的存在，但只有2人體內(nèi)發(fā)現(xiàn)有CD8+T細(xì)胞應(yīng)答。此外，部分受試者出現(xiàn)了局部紅腫、疼痛等反應(yīng)[15]。

2.2 治療性疫苗

相關(guān)研究顯示，治療性疫苗將會(huì)成為繼2011年2種新型抗HCV藥物之后丙型肝炎標(biāo)準(zhǔn)治療的又一輔助方法，為對(duì)標(biāo)準(zhǔn)療法無(wú)效的患者帶來(lái)福音。

2.2.1合成肽疫苗目前處于臨床試驗(yàn)階段的針對(duì)HCV的合成肽疫苗共有3種，迄今為止就結(jié)果而言，這些藥物耐受性良好，但總體效力不容樂(lè)觀。

2.2.1.1IC41這種疫苗含有5種合成肽(來(lái)自1型和2型HCV核心抗原及NS3和NS4蛋白上的4個(gè)保守序列)，另外還帶有4個(gè)已知的HLA-2A抗原表位及3個(gè)雜合CD4+T細(xì)胞表位，再配以多聚左旋精氨酸(poly-L-arginine, PLA)。隨機(jī)、對(duì)照的Ⅰ期臨床試驗(yàn)針對(duì)128例HLA-2A陽(yáng)性受試者開展，受試者每4周接受皮下注射該疫苗1次，共4次。結(jié)果顯示，耐受性良好且安全，并可誘導(dǎo)CD4+和CD8+T細(xì)胞增殖[16]。此后，針對(duì)60例同樣HLA-2A陽(yáng)性且標(biāo)準(zhǔn)治療無(wú)效或治療后復(fù)發(fā)的慢性丙型肝炎患者的Ⅱ期臨床試驗(yàn)(隨機(jī)、雙盲)結(jié)果顯示，IC41可誘導(dǎo)受試者的CTL和Th細(xì)胞免疫應(yīng)答，但十分微弱；同時(shí)，受試者均有持續(xù)毒血癥[17]。

表1已進(jìn)入臨床試驗(yàn)階段的HCV候選疫苗

Tab.1HCVvaccinecandidatesinclinicaltrials

*Trials registered with clinicalTrials.gov; # Barnes E, Folgori A, Capone S, Aston S, Meyer J, Gantlett K, Smith KE, Huddart R, Brown AC, Kurioka A, Humphreys I, Harrison GLA, Kelly C, Ammendola V, Colloca S, Naddeo M, Siani L, Traboni C, Cortese R, Nicosia A, Klenerman P. Phase I trials of a highly immunogenic and durable T-cell vaccine for hepatitis C virus based on novel, rare, adenoviral vectors. The International Liver CongressTM, 2011, 2104.

此后，研究人員完成了針對(duì)35例HLA-2A陽(yáng)性的1型丙型肝炎患者以IC41與丙型肝炎標(biāo)準(zhǔn)治療聯(lián)用的Ⅱ期臨床試驗(yàn)。受試者在接受標(biāo)準(zhǔn)治療的24～28周內(nèi)接受了6次IC41注射，此后又重復(fù)了1個(gè)完整的標(biāo)準(zhǔn)治療療程。這種三聯(lián)療法似乎無(wú)法降低丙型肝炎復(fù)發(fā)率，但可在持續(xù)產(chǎn)生病毒反應(yīng)的受試者體內(nèi)誘導(dǎo)出強(qiáng)大的HCV相關(guān)免疫應(yīng)答[18]。

2.2.1.2HCV核心區(qū)多肽疫苗日本研究者設(shè)計(jì)了一種源自HCV核心蛋白中一段序列(35～44)的疫苗，該序列在HCV多種亞型的核蛋白中均高度保守。Ⅰ期臨床試驗(yàn)結(jié)果顯示，此疫苗耐受性良好。25例慢性丙型肝炎受試者中，有15例外周血中發(fā)現(xiàn)CTL應(yīng)答[19]。要檢驗(yàn)此疫苗的有效性仍需進(jìn)一步研究和試驗(yàn)。

2.2.1.3病毒顆粒疫苗一種構(gòu)建于病毒顆粒上的合成肽疫苗(virosome-formulated vaccine)已完成Ⅰ期臨床試驗(yàn)(clinicalTrials.gov注冊(cè)碼為NCT00445419)。目前未公布相關(guān)資料。

2.2.2 重組蛋白疫苗

2.2.2.1GI-5005GI-5005由加熱滅活的釀酒酵母細(xì)胞(Saccharomycescerevisiae)改造而成，混合了NS3和核心蛋白。這樣的設(shè)計(jì)使其能誘導(dǎo)強(qiáng)烈的CD4+T細(xì)胞及細(xì)胞毒性CD8+T細(xì)胞應(yīng)答。Ⅰb期臨床試驗(yàn)(隨機(jī)、雙盲)針對(duì)15例慢性丙型肝炎受試者開展，結(jié)果顯示，試驗(yàn)組外周血內(nèi)病毒載量減少約1.4 lg，而對(duì)照組減少量<0.75 lg；同時(shí)，兩組皆未發(fā)現(xiàn)明顯不良反應(yīng)。這表明受試者對(duì)GI-5005有良好耐受性，且能誘發(fā)明顯的特異性T細(xì)胞免疫應(yīng)答[12]。

目前正在開展的Ⅱ期臨床試驗(yàn)將GI-5005與標(biāo)準(zhǔn)療法聯(lián)用的患者與單用標(biāo)準(zhǔn)療法的患者作對(duì)比，就治療48周后的報(bào)道來(lái)看，采用三聯(lián)療法的受試者產(chǎn)生了更好的應(yīng)答。此外，研究人員還發(fā)現(xiàn)，采用三聯(lián)療法的患者體內(nèi)丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(alanine aminotransferase，ALT)趨于正常，肝功能好轉(zhuǎn)[20]；同時(shí)，此三聯(lián)療法在白細(xì)胞介素28(interleukin 28，IL-28)基因位點(diǎn)為TT的受試者中也有明顯應(yīng)答[21]，而通常此類患者對(duì)標(biāo)準(zhǔn)療法的敏感度較低[22]。

2.2.2.2HCVE1E2/MF59疫苗此疫苗含有HCV的E1、E2蛋白，配以MF59。目前已完成Ⅰb期臨床試驗(yàn)，針對(duì)群體為78例1a/1b型丙型肝炎患者，其中32例標(biāo)準(zhǔn)治療無(wú)效，16例標(biāo)準(zhǔn)治療有部分反應(yīng)，30例治療后復(fù)發(fā)。所有受試者在第4、8、12、24、28、32、36周接受肌內(nèi)注射，結(jié)果表明安全性良好，能引起中等程度免疫應(yīng)答。對(duì)那些以前通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)治療方案已出現(xiàn)抗病毒反應(yīng)的患者，它能增加病毒清除率[23]。

2.2.2.3HCVE1蛋白疫苗此疫苗在Ⅱ期臨床試驗(yàn)中能引起針對(duì)E1蛋白的細(xì)胞免疫應(yīng)答，但由于在纖維化相關(guān)評(píng)分上較Ⅰ期結(jié)果未有改善而于2007年停止研究[12]。

2.2.3 病毒載體疫苗

2.2.3.1TG4040TG4040由改造過(guò)的安卡拉牛痘病毒(modified vaccinia Ankara, MVA)的減毒載體再次改造而成，能表達(dá)NS3、NS4、NS5B等多種抗原。臨床前期試驗(yàn)顯示，它能誘導(dǎo)小鼠機(jī)體產(chǎn)生分泌γ干擾素(interferon γ，IFN-γ)的T細(xì)胞及CTL[24]。在針對(duì)15例初治慢性丙型肝炎患者的Ⅰ期臨床試驗(yàn)(開放標(biāo)簽、多中心)中，給予其中6例每周1次的TG4040注射，連續(xù)3周，余下9例除3周外在第6個(gè)月給予第4次注射。結(jié)果顯示，TG4040有良好的耐受性且安全，在人體內(nèi)早期誘導(dǎo)產(chǎn)生能分泌IFN-γ的T細(xì)胞且持續(xù)至第6個(gè)月。15例受試者中，8例病毒載量減少(-0.52 lg～-1.24 lg)[25]。目前，研究人員已完成與標(biāo)準(zhǔn)療法聯(lián)用的Ⅱ期臨床試驗(yàn)，相關(guān)資料尚未公布。

2.2.3.2重組腺病毒HCV載體疫苗重組腺病毒HCV載體的優(yōu)勢(shì)是其可包含全套HCV基因，從而表達(dá)HCV所有蛋白；同時(shí)，它可誘導(dǎo)CD8+T細(xì)胞的強(qiáng)烈應(yīng)答[26]。這些特點(diǎn)使其有了疫苗研制前景。目前，有一種疫苗進(jìn)入Ⅰ期臨床試驗(yàn)。臨床前期試驗(yàn)表明其能誘發(fā)黑猩猩廣泛而強(qiáng)烈的T細(xì)胞免疫，且能排除腺病毒本身引起的免疫應(yīng)答所帶來(lái)的干擾[26]。臨床Ⅰ期試驗(yàn)結(jié)果表明，這種疫苗安全、耐受，且能誘發(fā)強(qiáng)烈而廣泛的T細(xì)胞應(yīng)答。

2.2.4 核酸疫苗

2.2.4.1ChronVac-C?此種疫苗由HCV NS3和NS4A基因在巨細(xì)胞病毒啟動(dòng)子的控制下轉(zhuǎn)錄，然后合成細(xì)胞毒性CD8+T細(xì)胞。臨床前期小鼠實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，這些T細(xì)胞能在小鼠體內(nèi)有效清除表達(dá)NS3和NS4A的肝細(xì)胞[27]。目前正在進(jìn)行針對(duì)病毒載量< 800 000 IU/ml的1型丙型肝炎患者的Ⅰ/Ⅱa期臨床試驗(yàn)，結(jié)果顯示，此疫苗安全性尚可，無(wú)明顯不良反應(yīng)。在肌內(nèi)注射完畢后，使用配有4個(gè)電極的設(shè)備(Medpulser DDS; Inovio, CA, US)給予受試者60 ms脈沖的活體電穿孔。此后該疫苗能使相當(dāng)一部分患者體內(nèi)病毒載量減少[28]。同時(shí)，研究人員正在進(jìn)行ChronVac-C?與標(biāo)準(zhǔn)療法聯(lián)用的Ⅱ期臨床試驗(yàn)，相關(guān)資料尚未公布。

2.2.4.2CIGB-230CIGB-230融合了HCV核心蛋白及能表達(dá)HCV結(jié)構(gòu)蛋白的質(zhì)粒。臨床前期小鼠實(shí)驗(yàn)表明此疫苗不會(huì)引起中毒反應(yīng)[29]，此后針對(duì)標(biāo)準(zhǔn)治療無(wú)效患者進(jìn)行的Ⅰ期臨床試驗(yàn)在4周內(nèi)給予受試者6次疫苗注射。結(jié)果顯示，CIGB-230安全且有較好的耐受性，絕大部分受試者體內(nèi)能測(cè)出相關(guān)中和抗體及HCV核心蛋白特異性T細(xì)胞應(yīng)答。同時(shí)，此疫苗不影響HCV疫苗的免疫應(yīng)答[30]，能保護(hù)肝組織，但受試者自接種后體內(nèi)長(zhǎng)期存在HCV RNA[31]。

3 展望

雖然HCV有多種途徑逃避宿主免疫應(yīng)答，長(zhǎng)期存在于患者體內(nèi)，且以極快的速度產(chǎn)生大量準(zhǔn)種，使得免疫清除困難，但人類仍有可能建立一套強(qiáng)大、健全的細(xì)胞和體液免疫應(yīng)答機(jī)制來(lái)消除、預(yù)防感染。理想的HCV疫苗應(yīng)誘導(dǎo)人體產(chǎn)生極其廣泛的免疫應(yīng)答來(lái)達(dá)到清除HCV的目的。隨著對(duì)HCV相關(guān)免疫應(yīng)答機(jī)制的深入了解，有望研制出相應(yīng)的治療性和預(yù)防性疫苗。

目前進(jìn)入臨床試驗(yàn)階段的HCV疫苗數(shù)量不多，還沒有一種疫苗成功進(jìn)入Ⅲ期或以上臨床試驗(yàn)階段；相關(guān)資料也顯示這些疫苗的有效性相當(dāng)有限。但隨著針對(duì)不同水平而出現(xiàn)的各類疫苗研制計(jì)劃，越來(lái)越多研制中的疫苗將會(huì)進(jìn)入臨床試驗(yàn)階段。此外，治療性疫苗與標(biāo)準(zhǔn)療法聯(lián)用的治療方式極有可能提高療效。

[1] Dorner M, Horwitz JA, Robbins JB, Barry WT, Feng Q, Mu K, Jones CT, Schoggins JW, Catanese MT, Burton DR, Law M, Rice CM, Ploss A. A genetically humanized mouse model for hepatitis C virus infection [J] . Nature, 2011, 474(7350): 208-211.

[2] Pestka JM, Zeisel MB, Blāser E, Schürmann P, Bartosch B, Cosset FL, Patel AH, Meisel H, Baumert J, Viazov S, Rispeter K, Blum HE, Roggendorf M, Baumert TF. Rapid induction of virus-neutralizing antibodies and viral clearance in a single-source outbreak of hepatitis C [J] . Proc Natl Acad Sci USA, 2007, 104(14): 6025-6030.

[3] Houghton M. Prospects for prophylactic and therapeutic vaccines against the hepatitis C viruses [J] . Immunol Rev, 2011, 239(1): 99-108.

[4] Thammanichanond D, Moneer S, Yotnda P, Aitken C, Earnest-Silveira L, Jackson D, Hellard M, McCluskey J, Torresi J, Bharadwaj M. Fiber-modified recombinant adenoviral constructs encoding hepatitis C virus proteins induce potent HCV-specific T cell response [J] . Clin Immunol, 2008, 128(3): 329-339.

[5] Murata K, Lechmann M, Qiao M, Gunji T, Alter HJ, Liang TJ. Immunization with hepatitis C virus-like particles protects mice from recombinant hepatitis C virus-vaccinia infection [J] . Proc Natl Acad Sci USA, 2003, 100(11): 6753-6758.

[6] Elmowalid GA, Qiao M, Jeong SH, Borg BB, Baumert TF, Sapp RK, Hu Z, Murthy K, Liang TJ. Immunization with hepatitis C virus-like particles results in control of hepatitis C virus infection in chimpanzees [J] . Proc Natl Acad Sci USA, 2007, 104(20): 8427-8432.

[7] Barth H, Ulsenheimer A, Pape GR, Diepolder HM, Hoffmann M, Neumann-Haefelin C, Thimme R, Henneke P, Klein R, Paranhos-Baccalà G, Depla E, Liang TJ, Blum HE, Baumert TF. Uptake and presentation of hepatitis C virus-like particles by human dendritic cells [J] . Blood, 2005, 105(9): 3605-3614.

[8] Vajdy M, Selby M, Medina-Selby A, Coit D, Hall J, Tandeske L, Chien D, Hu C, Rosa D, Singh M, Kazzaz J, Nguyen S, Coates S, Ng P, Abrignani S, Lin YL, Houghton M, O’Hagan DT. Hepatitis C virus polyprotein vaccine formulations capable of inducing broad antibody and cellular immune responses [J] . J Gen Virol, 2006, 87(Pt 8): 2253-2262.

[9] Lin Y, Kwon T, Polo J, Zhu YF, Coates S, Crawford K, Dong C, Wininger M, Hall J, Selby M, Coit D, Medina-Selby A, McCoin C, Ng P, Drane D, Chien D, Han J, Vajdy M, Houghton M. Induction of broad CD4+and CD8+T-cell responses and cross-neutralizing antibodies against hepatitis C virus by vaccination with Th1-adjuvanted polypeptides followed by defective alpha viral particles expressing envelope glycoproteins gpE1 and gpE2 and nonstructural proteins 3, 4, and 5 [J]. J Virol, 2008, 82(15): 7492-7503.

[10] Oseroff C, Sette A, Wentworth P, Celis E, Maewal A, Dahlberg C, Fikes J, Kubo RT, Chesnut RW, Grey HM, Alexander J. Pools of lipidated HTL-CTL constructs prime for multiple HBV and HCV CTL epitope responses [J] . Vaccine, 1998, 16(8): 823-833.

[11] Zeng W, Ghosh S, Lau YF, Brown LE, Jackson DC. Highly immunogenic and totally synthetic lipopeptides as self-adjuvanting immunocontraceptive vaccines [J]. J Immunol, 2002, 169(9): 4905-4912.

[12] Torresi J, Johnson D, Wedemeyer H. Progress in the development of preventive and therapeutic vaccines for hepatitis C virus [J] . J Hepatol, 2011, 54(6): 1273-1285.

[13] Torresi J, Stock OM, Fischer AE, Grollo L, Drummer H, Boo I, Zeng W, Earnest-Silveira L, Jackson DC. A self-adjuvanting multiepitope immunogen that induces a broadly cross-reactive antibody to hepatitis C virus [J]. Hepatology， 2007, 45(4): 911-920.

[14] Frey SE, Houghton M, Coates S, Abrignani S, Chien D, Rosa D, Pileri P, Ray R, Di Bisceglie AM, Rinella P, Hill H, Wolff MC, Schultze V, Han JH, Scharschmidt B, Belshe RB. Safety and immunogenicity of HCV E1E2 vaccine adjuvanted with MF59 administered to healthy adults [J]. Vaccine, 2010, 28(38): 6367-6373.

[15] Drane D, Maraskovsky E, Gibson R, Mitchell S, Barnden M, Moskwa A, Shaw D, Gervase B, Coates S, Houghton M, Basser R. Priming of CD4+and CD8+T cell responses using a HCV core ISCOMATRIX vaccine: a phase I study in healthy volunteers [J]. Hum Vaccin, 2009, 5(3): 151-157.

[16] Firbas C, Jilma B, Tauber E, Buerger V, Jelovcan S, Lingnau K, Buschle M, Frisch J, Klade CS. Immunogenicity and safety of a novel therapeutic hepatitis C virus (HCV) peptide vaccine: a randomized, placebo controlled trial for dose optimization in 128 healthy subjects [J]. Vaccine, 2006, 24(20): 4343-4353.

[17] Klade CS, Wedemeyer H, Berg T, Hinrichsen H, Cholewinska G, Zeuzem S, Blum H, Buschle M, Jelovcan S, Buerger V, Tauber E, Frisch J, Manns MP. Therapeutic vaccination of chronic hepatitis C nonresponder patients with the peptide vaccine IC41 [J]. Gastroenterology, 2008, 134(5): 1385-1395.

[18] Wedemeyer H, Schuller E, Schlaphoff V, Stauber RE, Wiegand J, Schiefke I, Firbas C, Jilma B, Thursz M, Zeuzem S, Hofmann WP, Hinrichsen H, Tauber E, Manns MP, Klade CS. Therapeutic vaccine IC41 as late add-on to standard treatment in patients with chronic hepatitis C [J] . Vaccine, 2009, 27(37): 5142-5151.

[19] Yutani S, Komatsu N, Shichijo S, Yoshida K, Takedatsu H, Itou M, Kuromatu R, Ide T, Tanaka M, Sata M, Yamada A, Itoh K. Phase I clinical study of a peptide vaccination for hepatitis C virus-infected patients with different human leukocyte antigen-class I-A alleles [J] . Cancer Sci, 2009, 100(10): 1935-1942.

[20] Jacobson IM, McHutchison JG, Boyer TD, Schiff ER, Everson GT, Pockros PJ, Chasen RM, Vierling JM, Lawitz EJ, Kugelmas M, Tsai NC, Shiffman ML, Buynak RJ, Sheikh AM, Armstrong B, Rodell TC, Apelian D. GI-5005 therapeutic vaccine plus PEG-IFN/ribavirin significantly improves virologic response and ALT normalization at end-of-treatment and improves SVR24 compared to PEG-IFN/ribavirin in genotype-1 chronic HCV patients [J] . J Hepatol, 2010, 52: S465-S466

[21] McHutchison JG, Thompson AJ, Jacobson IM, Boyer TD, Schiff ER, Everson GT, Vierling JM, Shiffman ML, Brown RS, Di Bisceglie AM, Gordon SC, Lee WM, Guo Z, King TH, Armstrong B, Rodell TC, Apelian D. Pharmacogenomic analysis reveals improved virologic response in all IL-28B genotypes in naive genotype 1 chronic HCV patients treated with GI-5005 therapeutic vaccine plus PEG-IFN/ribavirin [J] . J Hepatol, 2010, 52: S457.

[22] Sugiyama M, Tanaka Y, Nakanishi M, Mizokami M. Novel findings for the development of drug therapy for various liver diseases: Genetic variation in IL-28B is associated with response to the therapy for chronic hepatitis C [J] . J Pharmacol Sci, 2011, 115(3): 263-269.

[23] Colombatto P, Brunetto MR, Maina AM, Romagnoli V, CraxìA, Almasio P, Madonia S, Rumi MG, Colombo M, Fargion S, Ascione A, Pinzello G, Mondelli M, Muzzi A, Bianchi F, Barnaba V, Sarracino M, Rappuoli R, Rosa D, Montigiani S, Abrignani S, Houghton M, Bonino F. The candidate HCV E1E2MF59 vaccine is safe in chronic hepatitis C patients and accelerates the second phase viral decline upon primary response to pegylated interferon-2A/ribavirin therapy [J] . J Hepatol, 2009, 50: S22.

[24] Fournillier A, Gerossier E, Evlashev A, Schmitt D, Simon B, Chatel L, Martin P, Silvestre N, Balloul JM, Barry R, Inchauspé G. An accelerated vaccine schedule with a poly-antigenic hepatitis C virus MVA-based candidate vaccine induces potent, long lasting and in vivo cross-reactive T cell responses [J] . Vaccine, 2007, 25(42): 7339-7353.

[25] Habersetzer F, Honnet G, Bain C, Maynard-Muet M, Leroy V, Zarski JP, Feray C, Baumert TF, Bronowicki JP, Doffoēl M, Trépo C, Agathon D, Toh ML, Baudin M, Bonnefoy JY, Limacher JM, Inchauspé G. A poxvirus vaccine is safe, induces T-Cell responses, and decreases viral load in patients with chronic hepatitis C [J] . Gastroenterology, 2011, 141(3): 890-899.

[26] Steinmann D, Barth H, Gissler B, Schürmann P, Adah MI, Gerlach JT, Pape GR, Depla E, Jacobs D, Maertens G, Patel AH, Inchauspé G, Liang TJ, Blum HE, Baumert TF. Inhibition of hepatitis C virus-like particle binding to target cells by antiviral antibodies in acute and chronic hepatitis C [J] . J Virol, 2004, 78(17): 9030-9040.

[27] Ahlen G, Nystrom J, Pult I, Frelin L, Hultgren C, Sallberg M. In vivo clearance of hepatitis C virus nonstructural 3/4A-expressing hepatocytes by DNA vaccine-primed cytotoxic T lymphocytes [J] . J Infect Dis, 2005, 192(12): 2112-2116.

[28] Sallberg M, Frelin L, Diepolder H, Jung MC, Mathiesen I, Fons M, Hultcrantz R, Carlsson T, Weiland O. A first clinical trial of therapeutic vaccination using naked DNA delivered by in vivo electroportation shows antiviral effects in patients with chronic hepatitis C [J] . J Hepatol, 2009, 50: S18.

[29] Bacardí D, Amador-Caizares Y, Cosme K, Urquiza D, Suárez J, Marante J, Via A, Vázquez A, Concepción J, Pupo M, Aldana L, Soria Y, Romero J, Madrigal R, Martínez L, Hernández L, González I, Dueas-Carrera S. Toxicology and biodistribution study of CIGB-230, a DNA vaccine against hepatitis C virus [J]. Hum Exp Toxicol, 2009, 28(8): 479-491.

[30] Castellanos M, Cinza Z, Dorta Z, Veliz G, Vega H, Lorenzo I, Ojeda S, Dueas-Carrera S, Alvarez-Lajonchere L, Martínez G, Ferrer E, Limonta M, Linares M, Ruiz O, Acevedo B, Torres D, Márquez G, Herrera L, Arús E. Immunization with a DNA vaccine candidate in chronic hepatitis C patients is safe, well tolerated and does not impair immune response induction after anti-hepatitis B vaccination [J]. J Gene Med, 2010, 12(1): 107-116.

[31] Alvarez-Lajonchere L, Shoukry NH, Grá B, Amador-Caizares Y, Helle F, Bédard N, Guerra I, Drouin C, Dubuisson J, González-Horta EE, Martínez G, Marante J, Cinza Z, Castellanos M, Dueas-Carrera S. Immunogenicity of CIGB-230, a therapeutic DNA vaccine preparation, in HCV-chronically infected individuals in a phase I clinical trial [J]. J Viral Hepat, 2009, 16(3): 156-167.