范齊文，吳文娟

同濟(jì)大學(xué)附屬東方醫(yī)院醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)科，上海 200120

被稱為白色瘟疫的結(jié)核病(tuberculosis)是伴隨人類歷史最長(zhǎng)的疾病之一，也是由單一致病菌引起死亡最多的疾病。據(jù)世界衛(wèi)生組織(World Health Organization，WHO)最新報(bào)告[1]，2010年有大約880萬(wàn)例新發(fā)結(jié)核病，145萬(wàn)例死于該病。加快結(jié)核病診斷速度、提高檢測(cè)的敏感度和特異度，是控制結(jié)核病疫情的關(guān)鍵。結(jié)核病診斷的理想方法應(yīng)是快速、特異、敏感，廣大地區(qū)和人群可以接受，能區(qū)別活動(dòng)性與潛伏性結(jié)核病，能辨別結(jié)核分枝桿菌(Mycobacteriumtuberculosis)和環(huán)境中的非結(jié)核分枝桿菌及卡介苗(bacillus Calmette-Guerin, BCG)，且不需昂貴儀器和專業(yè)培訓(xùn)[2]的方法。WHO[3]提出了結(jié)核病診斷研究努力的方向：通過(guò)提高檢測(cè)的敏感度和特異度達(dá)到簡(jiǎn)化和改進(jìn)結(jié)核病(包括痰涂片陰性結(jié)核病、肺外結(jié)核病及小兒結(jié)核病)的診斷；建立并推廣簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確、安全、廉價(jià)并能快速得到結(jié)果的即時(shí)檢驗(yàn)；能更有效地監(jiān)測(cè)結(jié)核病的治療；能快速檢測(cè)出是否對(duì)一線和二線抗結(jié)核藥物耐藥；能可靠鑒別潛伏感染并能評(píng)估發(fā)展為活動(dòng)性結(jié)核病的風(fēng)險(xiǎn)，以實(shí)施合理的預(yù)防性治療?，F(xiàn)就近年來(lái)WHO和美國(guó)食品藥物管理局(Food and Drug Administration，F(xiàn)DA)認(rèn)可的幾種診斷試劑及新近發(fā)展的有應(yīng)用前景的診斷方法作一綜述。

1 WHO認(rèn)可的3種檢測(cè)技術(shù)

1.1 液體培養(yǎng)

1993年，美國(guó)疾病預(yù)防控制中心(Centers for Disease Control and Prevention，CDC)提出結(jié)核病診斷標(biāo)準(zhǔn)，推動(dòng)了結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)自動(dòng)化技術(shù)的發(fā)展，第1個(gè)自動(dòng)化診斷結(jié)核分枝桿菌感染的是半自動(dòng)BACTEC 460系統(tǒng)。但由于該系統(tǒng)是通過(guò)檢測(cè)輻射信號(hào)實(shí)現(xiàn)結(jié)核病診斷，故存在一定的輻射污染；并且由于有手工操作，因此增加了操作人員感染及標(biāo)本交叉污染的風(fēng)險(xiǎn)。隨后，一些非輻射結(jié)核分枝桿菌檢測(cè)系統(tǒng)相繼面世，如BacT/Alert 3D、ESP Trek、MGIT 960系統(tǒng)等[4]，其中BacT/Alert 3D、MGIT 960系統(tǒng)獲得WHO認(rèn)可[3]。

1.1.1BacT/Alert3D系統(tǒng)BacT/Alert 3D系統(tǒng)是由Organon Teknika 公司研制生產(chǎn)的，為全自動(dòng)結(jié)核液體培養(yǎng)和檢測(cè)系統(tǒng)。其原理如下：該系統(tǒng)中有許多裝有肉湯培養(yǎng)基的小瓶，當(dāng)有結(jié)核分枝桿菌生長(zhǎng)時(shí)會(huì)釋放大量CO2，從而降低培養(yǎng)基pH值，使瓶底的傳感器顏色發(fā)生變化，該變化會(huì)被系統(tǒng)內(nèi)的反射元件捕捉檢測(cè)；BacT/Alert 3D 系統(tǒng)每10 min自動(dòng)讀取1次結(jié)果，讀取的數(shù)據(jù)會(huì)自動(dòng)轉(zhuǎn)換并存儲(chǔ)到數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)。此系統(tǒng)密閉，樣本接種后沒(méi)有交叉污染，無(wú)放射性[5]。

與固體培養(yǎng)基相比，BacT/Alert 3D系統(tǒng)大大加快了結(jié)核分枝桿菌分離的速度，縮短了診斷時(shí)間[6]。除能快速?gòu)呐R床標(biāo)本中分離出結(jié)核分枝桿菌外，BacT/Alert 3D系統(tǒng)還可進(jìn)行抗結(jié)核藥物的藥敏試驗(yàn)。有相關(guān)文獻(xiàn)[7,8]對(duì)該系統(tǒng)的耐藥檢測(cè)與BACTEC 460系統(tǒng)進(jìn)行對(duì)比，結(jié)果顯示其一致性無(wú)明顯差異，表明BacT/Alert 3D系統(tǒng)可作為快速、簡(jiǎn)便檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌及其耐藥性的先進(jìn)技術(shù)。

1.1.2MGIT960系統(tǒng)MGIT 960系統(tǒng)是美國(guó)BD公司于1996年研制的全自動(dòng)快速結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)鑒定藥敏儀。該儀器[9]利用熒光檢測(cè)實(shí)現(xiàn)結(jié)核分枝桿菌的鑒定和分離：在MGIT培養(yǎng)管底部包埋了釕的五水合物氧傳感器，有結(jié)核分枝桿菌生長(zhǎng)時(shí)會(huì)消耗管內(nèi)氧，氧濃度降低引發(fā)熒光產(chǎn)生。MGIT 960系統(tǒng)熒光強(qiáng)度記憶探測(cè)器每隔60 min監(jiān)測(cè)培養(yǎng)管內(nèi)的熒光強(qiáng)度，通過(guò)處理得出陽(yáng)性結(jié)果。MGIT 960 可在1～2周內(nèi)獲得結(jié)果，大大縮短了檢測(cè)周期[9,10]。

隨著結(jié)核分枝桿菌耐藥問(wèn)題的日益加劇，其耐藥性檢測(cè)對(duì)結(jié)核病的治療顯得尤為重要。近年來(lái)有相當(dāng)多文獻(xiàn)[11-14]報(bào)道用MGIT 960系統(tǒng)評(píng)估結(jié)核分枝桿菌對(duì)一線和二線抗結(jié)核藥物的敏感性及特異性，并建立了一線和二線抗結(jié)核藥物的臨界濃度，從而更好地指導(dǎo)臨床用藥治療。2010年WHO推薦使用液體自動(dòng)培養(yǎng)法作為二線藥物藥敏試驗(yàn)的金標(biāo)準(zhǔn)。

MGIT 960系統(tǒng)雖然具有自動(dòng)化程度高、無(wú)輻射危害、陽(yáng)性分離率高、檢測(cè)所需時(shí)間減少，且可進(jìn)行藥敏試驗(yàn)等優(yōu)點(diǎn)，但價(jià)格昂貴，在結(jié)核病高發(fā)的發(fā)展中國(guó)家難以廣泛應(yīng)用，因此限制了其推廣。

1.2 分子線性雜交

結(jié)核分枝桿菌耐藥問(wèn)題已成為控制結(jié)核病的關(guān)鍵，耐多藥(multidrug-resistant, MDR)及廣泛耐藥(extensively drug-resistant, XDR)結(jié)核病患者日益增多，這無(wú)疑給結(jié)核病診斷帶來(lái)挑戰(zhàn)。由于結(jié)核分枝桿菌耐異煙肼[15,16]、利福平[17,18]、鏈霉素[19]及喹諾酮類藥物[20]的分子機(jī)制于20世紀(jì)末已基本闡明，因此一系列基于分子雜交的結(jié)核分枝桿菌耐藥檢測(cè)技術(shù)應(yīng)運(yùn)而生，如GenoType?MTBDRplus、GenoType?MTBDRsl及INNO-LiPA Rif.TB等方法。

1.2.1INNO-LiPARif.TB方法結(jié)核分枝桿菌對(duì)利福平耐藥是由于編碼RNA聚合酶β亞基的基因(rpoB)發(fā)生點(diǎn)突變、小片段插入或缺失造成的。比利時(shí)的de Beenhouwer等[21]最初利用反向斑點(diǎn)雜交與rpoB基因不同區(qū)域進(jìn)行雜交，然后根據(jù)雜交條帶判讀結(jié)果以檢測(cè)耐利福平結(jié)核分枝桿菌。后來(lái)此技術(shù)演變成商業(yè)化應(yīng)用的既能分辨結(jié)核與非結(jié)核分枝桿菌群，又能同時(shí)檢測(cè)利福平耐藥的INNO-LiPA Rif.TB 技術(shù)。固定在膜上的5種野生型探針(S1～S5)部分重疊覆蓋整個(gè)rpoB基因，并與野生型的基因序列發(fā)生特異雜交反應(yīng)，這些探針能檢測(cè)突變的存在，但不能提供具體的突變位點(diǎn)；另外4種突變型探針(R)能與4類最常見(jiàn)的突變序列雜交。如果是利福平敏感菌株，會(huì)與野生型探針發(fā)生雜交而產(chǎn)生相應(yīng)的陽(yáng)性信號(hào)條帶；如果是利福平耐藥菌株，相應(yīng)地會(huì)在至少1個(gè)耐藥型探針條帶上出現(xiàn)陽(yáng)性信號(hào)。

有相關(guān)文獻(xiàn)[22]報(bào)道，用INNO-LiPA Rif.TB方法檢測(cè)培養(yǎng)利福平耐藥結(jié)核分枝桿菌的敏感度達(dá)96.2%。從技術(shù)上講，該法只能檢測(cè)耐利福平菌株，但在結(jié)核病高發(fā)國(guó)家，高達(dá)90%的耐利福平分離菌株同時(shí)也對(duì)異煙肼耐藥[23]。利福平扮演著耐多藥結(jié)核分枝桿菌檢測(cè)靶標(biāo)的代言人，故INNO-LiPA Rif.TB可用于耐多藥結(jié)核病的初步篩查。

1.2.2GenoType?MTBDRplus及GenoType?MTBDRsl方法GenoType?MTBDRplus及GenoType?MTBDRsl由德國(guó)Hain Lifescience公司生產(chǎn)，分別檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌對(duì)異煙肼、利福平和乙胺丁醇、氨基糖苷類及喹諾酮類藥物的耐藥性，其原理與INNO-LiPA Rif.TB相似，都是將多重聚合酶鏈反應(yīng)(polymerase chain reaction，PCR)結(jié)合反向雜交技術(shù)，與固定在硝化纖維膜條帶上的特異基因雜交，最后根據(jù)顯色條帶判斷是否耐藥。這2種方法可通過(guò)雜交條帶的顯色判斷突變位點(diǎn)所在。

應(yīng)用該技術(shù)檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌的耐藥性，可在6 h內(nèi)獲得結(jié)果，真正實(shí)現(xiàn)了結(jié)核分枝桿菌的快速檢測(cè)。目前已有大量文獻(xiàn)對(duì)其進(jìn)行了評(píng)價(jià)，檢測(cè)效果幾乎可與表型結(jié)果相媲美[24-28]。由此可見(jiàn)，GenoType?MTBDR技術(shù)是一種快速、簡(jiǎn)便、有效檢測(cè)耐多藥結(jié)核分枝桿菌的工具。GenoType?MTBDRplus在2012年推出了GenoType MTBDRplus 2.0，更新的試劑盒可直接用來(lái)檢測(cè)痰涂片陽(yáng)性和痰涂片陰性標(biāo)本，實(shí)現(xiàn)了耐多藥結(jié)核分枝桿菌的篩檢。同時(shí)在操作上更加人性化，從原來(lái)需使用者配置PCR反應(yīng)體系變?yōu)橹苯酉蝮w系中加入模板即可。GenoType MTBDRplus 2.0的推出，必將使耐藥結(jié)核病的篩查更加快速、準(zhǔn)確。

1.3 條帶式菌種鑒定

MPB64免疫色譜法(MPB64-immunochromatographic assay，MPB64-ICA)是一種快速、簡(jiǎn)便鑒別結(jié)核與非結(jié)核分枝桿菌的方法，其原理是通過(guò)抗原-抗體反應(yīng)檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌在液體培養(yǎng)時(shí)分泌到培養(yǎng)基中的MPB64抗原。MPB64又稱MPT64，只存在于5種BCG亞株及結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群的培養(yǎng)濾液中，類似于純化蛋白衍生物(purified protein derivative，PPD)，能誘發(fā)強(qiáng)烈的遲發(fā)型超敏反應(yīng)[29,30]。針對(duì)以上特點(diǎn)，一種基于抗MPT64單克隆抗體的試劑盒Capilia TB被應(yīng)用于結(jié)核分枝桿菌的分群鑒定。該試劑盒結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，是將與膠體金結(jié)合的抗MPT64鼠單克隆抗體固定在硝化纖維膜上，檢測(cè)MPT64抗原15 min即可報(bào)告結(jié)果。傳統(tǒng)的分枝桿菌分型要培養(yǎng)陽(yáng)性后做相關(guān)生化實(shí)驗(yàn)，最終獲得結(jié)果需幾天至幾周，而Capilia TB試劑盒只需在液體培養(yǎng)或固體培養(yǎng)陽(yáng)性后當(dāng)天得到結(jié)果，快速、簡(jiǎn)便，為后續(xù)臨床治療節(jié)省大量時(shí)間。

2 美國(guó)FDA批準(zhǔn)通過(guò)的3種檢測(cè)方法

2.1 Gen-Probe分子生物學(xué)診斷

Gen-Probe是由美國(guó)San Diego基因探針公司研制并獲FDA認(rèn)可的結(jié)核分枝桿菌分子生物學(xué)診斷產(chǎn)品，可同時(shí)檢測(cè)抗酸染色陽(yáng)性/陰性的痰液標(biāo)本。Gen-Probe分子生物學(xué)診斷以rRNA為靶物，根據(jù)需要可采用Amplified MTD?Test直接擴(kuò)增試劑盒或AccuProbe探針檢測(cè)試劑盒，完成結(jié)核與非結(jié)核分枝桿菌檢測(cè)、鑒定。Amplified MTD?Test 以反轉(zhuǎn)錄擴(kuò)增技術(shù)為主導(dǎo)，以rRNA為擴(kuò)增靶物，通過(guò)30 min快速等溫?cái)U(kuò)增，2.5 h內(nèi)完成結(jié)核分枝桿菌檢測(cè)全程操作。AccuProbe結(jié)合DNA探針的高靈敏度及特異度，采用雜交保護(hù)法，以化學(xué)發(fā)光信號(hào)檢測(cè)特異種屬DNA，1 h內(nèi)以單一菌落鑒定分枝桿菌種屬，特異度、靈敏度接近100%。美國(guó)CDC推薦DNA探針為鑒定結(jié)核分枝桿菌的標(biāo)準(zhǔn)方法。

2.2 AMPLICOR? MTB試驗(yàn)

羅氏AMPLICOR?MTB試驗(yàn)利用PCR擴(kuò)增分枝桿菌16S RNA中一段長(zhǎng)584 bp的片段，該片段存在于所有分枝桿菌內(nèi)，再用針對(duì)結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群的DNA探針與擴(kuò)增子雜交進(jìn)而檢測(cè)。特殊的是，該試劑盒將DNA探針包被在微孔板上，利用生物素-辣根過(guò)氧化物酶-四甲基聯(lián)苯胺底物系統(tǒng)反應(yīng)顯色，加入氫硫酸終止反應(yīng)后在450 nm波長(zhǎng)讀取吸光度(A)值。A≥0.35判為陽(yáng)性。

AMPLICOR?MTB試驗(yàn)通過(guò)在擴(kuò)增體系內(nèi)用dUTP替代dTTP及加入尿嘧啶-N-轉(zhuǎn)葡萄糖激酶(AmpErase?)來(lái)克服PCR污染[31]，可為臨床、實(shí)驗(yàn)室及感染控制部門提供快速、有價(jià)值的結(jié)核病診斷和控制所需的臨床相關(guān)信息。此法操作簡(jiǎn)便，約6.5 h即可獲結(jié)果。有文獻(xiàn)[32]報(bào)道，用AMPLICOR?MTB檢測(cè)肺結(jié)核患者痰涂片陰性及肺外結(jié)核病的敏感度分別為88%、50%，特異度和陽(yáng)性預(yù)測(cè)值均為100%。美國(guó)FDA認(rèn)可其用于檢測(cè)抗酸染色陽(yáng)性的痰液標(biāo)本。

2.3 基于 γ干擾素釋放試驗(yàn)的2種商業(yè)化結(jié)核檢測(cè)試劑盒

潛伏性結(jié)核病感染的診斷曾依靠結(jié)核菌素皮膚試驗(yàn)(tuberculin skin test，TST)，但其敏感度和特異度都較低，且不能區(qū)分BCG接種干擾，特別是對(duì)兒童、老年人及免疫系統(tǒng)受抑制人群，檢測(cè)結(jié)果更不盡如人意[33]。近年來(lái)出現(xiàn)的以檢測(cè)CD4+T細(xì)胞分泌的γ干擾素為原理的T-SPOT.TB檢測(cè)試劑盒和QuantiFeron-Gold test (QFT) 試劑盒，能高效檢測(cè)潛伏結(jié)核分枝桿菌感染和活動(dòng)性結(jié)核病，其敏感度和特異度都顯著高于TST。這2種試劑盒都是利用結(jié)核分枝桿菌RD1區(qū)域編碼的6 kDa早期分泌抗原靶分子蛋白(6 kDa early secretory antigenic target，Esat-6)和10 kDa培養(yǎng)濾液蛋白(10 kDa culture filtrate protein，Cfp10)的肽段作為特異性抗原，刺激T細(xì)胞釋放γ干擾素[34]，再分別通過(guò)酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)(enzyme-linked immunospot，ELISPOT)試驗(yàn)和全血酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)檢測(cè)γ干擾素水平來(lái)判斷是否存在結(jié)核分枝桿菌感染。與TST相比，這2種方法不需要進(jìn)行患者隨訪，24 h內(nèi)即可獲結(jié)果，并且不會(huì)像TST因反復(fù)實(shí)驗(yàn)而影響結(jié)果。T-SPOT.TB和QFT試劑盒目前均已獲美國(guó)FDA批準(zhǔn)用于檢測(cè)臨床標(biāo)本。對(duì)這2種方法的比較，有文獻(xiàn)報(bào)道T-SPOT.TB法較QFT法更靈敏[35]，但兩者均不能區(qū)別潛伏感染與活動(dòng)性結(jié)核病。

3 其他檢測(cè)技術(shù)

3.1 結(jié)核分枝桿菌快速診斷噬菌體法

眾所周知，噬菌體感染宿主細(xì)胞后在細(xì)胞內(nèi)擴(kuò)增繁殖，達(dá)到一定量后將宿主細(xì)胞裂解并釋放到細(xì)胞外，繼續(xù)感染其他宿主細(xì)胞。有研究人員[36]利用分枝桿菌噬菌體D29感染結(jié)核分枝桿菌，受感染的結(jié)核分枝桿菌因噬菌體的擴(kuò)增破壞而裂解。隨后向培養(yǎng)液中加入快速生長(zhǎng)的恥垢分枝桿菌并傾倒成固體培養(yǎng)基平板，噬菌體隨恥垢分枝桿菌生長(zhǎng)不斷重復(fù)“感染—復(fù)制—裂解”過(guò)程，最終在平板上形成噬菌斑，根據(jù)噬菌斑數(shù)量可推算出最初的結(jié)核分枝桿菌數(shù)量。在此研究基礎(chǔ)上，英國(guó)Biotec Laboratories Limited公司研發(fā)出FASTPlaque TBTM試劑盒，用于檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌及其對(duì)利福平的耐藥性。第1代FASTPlaque-RIFTM及FASTPlaque-MDRiTM只能應(yīng)用于結(jié)核病臨床標(biāo)本的分離株，如今的FASTPlaque-ResponseTM可用來(lái)直接檢測(cè)臨床標(biāo)本[37]。該法檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌周期短，48 h即可獲結(jié)果；操作簡(jiǎn)便，不需特殊儀器，適用于一般實(shí)驗(yàn)室。

3.2 發(fā)光二極管熒光顯微鏡

用普通顯微鏡觀察抗酸染色后的痰標(biāo)本是結(jié)核病診斷的標(biāo)準(zhǔn)程序，但其敏感度和特異度都較低，熒光顯微鏡的應(yīng)用大大提高了陽(yáng)性檢出率，且簡(jiǎn)便、快捷。但熒光顯微鏡也存在一些弊端，如汞蒸氣短弧光燈的使用壽命較短(200～300 h)，且供應(yīng)渠道較困難，需長(zhǎng)時(shí)間預(yù)熱和降溫，需經(jīng)常維護(hù)保養(yǎng)，需暗室等，這些在不同程度上限制了其應(yīng)用，尤其是在結(jié)核病高發(fā)的發(fā)展中國(guó)家[38]。2007年，Lawrenceville公司推出了Lumin發(fā)光二極管(light emitting diode, LED)，只需將其替換普通光學(xué)顯微鏡的目鏡就相當(dāng)于一臺(tái)熒光顯微鏡，組裝的“熒光顯微鏡”不但克服了上述所有不足，還具有一些新的優(yōu)點(diǎn)：LED的使用壽命可達(dá)30 000 h；使用電池就能維持正常工作；不產(chǎn)生紫外光而保護(hù)操作者；分辨及聚焦能力更加強(qiáng)大等[38,39]。根據(jù)WHO建議，普通顯微鏡檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌時(shí)需放大1 000倍，至少觀察100個(gè)視野(通常為300個(gè))，而LED熒光顯微鏡只需在放大400倍觀察50個(gè)視野即可，既節(jié)省時(shí)間又大大減少工作量。由于目前對(duì)LED報(bào)道的文章較少，用其檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌的敏感度和特異度還有待更多實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。

3.3 Xpert? MTB/RIF自動(dòng)檢測(cè)系統(tǒng)

最近由Cepheid公司研發(fā)推出Xpert?MTB/RIF系統(tǒng)，應(yīng)用于結(jié)核病診斷及耐藥檢測(cè)。該系統(tǒng)集眾多功能于一身[40-43]：不僅可直接從臨床標(biāo)本中診斷結(jié)核分枝桿菌的存在，還可同時(shí)檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌對(duì)利福平的耐藥性，從標(biāo)本處理、DNA提取、半套式實(shí)時(shí)PCR擴(kuò)增結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群耐利福平基因rpoB到結(jié)果分析，都由Xpert?MTB/RIF系統(tǒng)完成，需要手工操作的只是將標(biāo)本加入每個(gè)一次性塑料囊筒，完全實(shí)現(xiàn)了結(jié)核病診斷的自動(dòng)化。從加入標(biāo)本到獲得結(jié)果全程只需2 h，真正達(dá)到結(jié)核病診斷簡(jiǎn)便、快捷的要求。Xpert?MTB/RIF系統(tǒng)通過(guò)擴(kuò)增結(jié)核分枝桿菌rpoB基因中長(zhǎng)為81 bp的耐藥決定區(qū)，然后對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行探針雜交來(lái)判斷是否對(duì)利福平耐藥，大約95%利福平耐藥株的突變基因都位于該耐藥決定區(qū)[43]。該系統(tǒng)主要由2部分組成[43]。①Xpert?MTB/RIF塑料囊筒：該囊筒內(nèi)包含處理后的液態(tài)臨床標(biāo)本、PCR緩沖液及低壓凍干的實(shí)時(shí)PCR反應(yīng)試劑；②GeneXpert 儀器：該儀器控制囊筒內(nèi)的流體學(xué)并進(jìn)行實(shí)時(shí)PCR分析。多篇文獻(xiàn)已對(duì)該系統(tǒng)進(jìn)行了評(píng)價(jià)，其檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌及對(duì)利福平耐藥的敏感度和特異度均達(dá)到98%以上，即使涂片陰性培養(yǎng)陽(yáng)性的標(biāo)本檢測(cè)也達(dá)到72.5%[41]。2010年，WHO[44]推薦應(yīng)將Xpert?MTB/RIF作為疑似耐藥及人類免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)相關(guān)結(jié)核病患者的首選篩查方法。

Xpert?MTB/RIF系統(tǒng)一經(jīng)面世，因其顯著的優(yōu)點(diǎn)如操作簡(jiǎn)單、無(wú)需太多培訓(xùn)、不易造成交叉污染、對(duì)生物安全性要求低、對(duì)涂片陰性肺結(jié)核患者的敏感度高、能快速得出結(jié)果等引起了眾多研究人員的關(guān)注。但該系統(tǒng)檢測(cè)費(fèi)用相當(dāng)昂貴，目前難以在我國(guó)推廣應(yīng)用。如能在經(jīng)濟(jì)欠發(fā)達(dá)的結(jié)核病高發(fā)國(guó)家和地區(qū)普及使用，必將給結(jié)核病的診斷帶來(lái)革命性的突破。

4 結(jié)語(yǔ)

現(xiàn)有的各結(jié)核病診斷技術(shù)相互之間并沒(méi)有任何相斥現(xiàn)象。如分子線性探針試驗(yàn)、快速藥敏試驗(yàn)等只適用于抗酸桿菌涂片陽(yáng)性樣本檢測(cè)，而對(duì)涂片陰性樣本，仍需開(kāi)展常規(guī)培養(yǎng)。在現(xiàn)有的固體培養(yǎng)及藥敏試驗(yàn)基礎(chǔ)上，WHO將液體培養(yǎng)及分子線性探針試驗(yàn)作為檢測(cè)二線抗結(jié)核藥物敏感性的國(guó)際金標(biāo)準(zhǔn)。基于分子檢測(cè)系統(tǒng)具有高敏感度、特異度，簡(jiǎn)便快速，但檢測(cè)費(fèi)用昂貴的特點(diǎn)，結(jié)核病診斷的突破口應(yīng)是如何降低檢測(cè)成本而達(dá)到檢測(cè)方法推廣普及。另外，結(jié)核病診斷操作的規(guī)范化、儀器試劑的標(biāo)準(zhǔn)化也是需解決的問(wèn)題。

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