張 敏，吳英詳，阮穎慧，里 南，林光美

(福建農(nóng)林大學(xué)1.食品科學(xué)學(xué)院 ，2.作物科學(xué)學(xué)院，福建 福州350002)

高效液相色譜(high performance liquid chromatography，HPLC)是采用顆粒十分細(xì)的高效固定相并采用高壓泵輸送流動(dòng)相的一種液相色譜法。20世紀(jì)60年代后期，由于新型柱填料高壓輸液泵和高靈敏度檢測(cè)器的出現(xiàn)，使高效液相色譜快速發(fā)展起來(lái)［1］。高效液相色譜作為物質(zhì)分離的重要工具，在各個(gè)方面都取得了很大的發(fā)展。近年來(lái)，為了使物質(zhì)的檢測(cè)更加準(zhǔn)確方便，出現(xiàn)了各種HPLC串聯(lián)技術(shù)，如液－質(zhì)聯(lián)用，以及與梯度洗脫、柱切換技術(shù)等先進(jìn)技術(shù)的配合，使得HPLC在藥物、食品、環(huán)境分析等領(lǐng)域發(fā)揮強(qiáng)大的優(yōu)勢(shì)，得到廣泛的應(yīng)用［2］。特別是在中藥分析中發(fā)揮很大作用，中藥成分繁多，各種成分的性質(zhì)遍布所有極性段，HPLC可實(shí)現(xiàn)多成分分離分析，進(jìn)行中藥鑒別，建立指紋圖譜等［3］。因此，HPLC得到人們的廣泛青睞。

雷公藤為衛(wèi)矛科植物雷公藤(Tripterygium wilfordii Hook.)的根、葉及花，是我國(guó)傳統(tǒng)的一味中藥［4］，其成分復(fù)雜，不同產(chǎn)地、來(lái)源或同一產(chǎn)地不同生長(zhǎng)年限雷公藤藥材中有效成分的含量差異較大。臨床研究表明雷公藤是一味目前為止中藥、西藥難以取代的用于類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、紅斑狼瘡等自身免疫性疾病治療的藥物，但有效成分也是其毒性成分且閾值相近。所以利用高效、方便的提取方法和準(zhǔn)確靈敏的測(cè)定有效成分含量的方法，可為選育雷公藤優(yōu)質(zhì)種苗、以及何時(shí)采收藥材提供依據(jù)，也可為雷公藤的復(fù)方制劑生產(chǎn)建立藥材檢測(cè)的可控標(biāo)準(zhǔn)，還可為雷公藤制劑臨床用藥提供標(biāo)準(zhǔn)，實(shí)現(xiàn)雷公藤用藥的多指標(biāo)質(zhì)量控制。

1 HPLC在雷公藤良種選育上的應(yīng)用

隨著雷公藤的不斷開(kāi)發(fā)利用，野生資源已經(jīng)匱乏，因此利用便捷、高效、可靠的技術(shù)手段篩選有效成分含量高的雷公藤種源具有重要的意義。傳統(tǒng)上篩選雷公藤一般考察其莖、葉等的長(zhǎng)勢(shì)以判斷雷公藤藥材的優(yōu)良，此種方法較為簡(jiǎn)易，但效果不太準(zhǔn)確。目前，很多學(xué)者已將HPLC測(cè)定方法應(yīng)用到良種選育上并獲得很好的效果。黃文華(2005)利用HPLC測(cè)定了全國(guó)主要分布區(qū)25個(gè)群體91個(gè)個(gè)體的木質(zhì)部和韌皮部中的雷公藤甲素含量并分析差異性，篩選出3個(gè)居群中甲素含量高的個(gè)體［5］，應(yīng)用HPLC－DVD技術(shù)，通過(guò)測(cè)定不同產(chǎn)地的22個(gè)雷公藤樣品，建立HPLC圖譜，確定樣品的色譜指紋圖譜的20個(gè)共有峰，考察雷公藤藥材的質(zhì)量差異［6］。斯金平(2006)等建立HPLC測(cè)定方法，研究雷公藤藥材中雷公藤甲素質(zhì)量分?jǐn)?shù)的變異規(guī)律，為雷公藤藥材人工栽培遺傳改良、采收加工、質(zhì)量評(píng)價(jià)提供理論依據(jù)［7］。陳麗雅(2010)利用HPLC技術(shù)建立雷公藤藥材主要化學(xué)成分特征的指紋圖譜，分析4個(gè)不同種源雷公藤藥材質(zhì)量差異，利用HPLC指紋圖譜選育雷公藤優(yōu)良種源［8］。綜上表明，HPLC可以很好的應(yīng)用于雷公藤良種選育，能為評(píng)價(jià)雷公藤藥材質(zhì)量和尋找雷公藤的優(yōu)質(zhì)種源奠定基礎(chǔ)。

2 HPLC在雷公藤藥材成分分析的應(yīng)用

雷公藤化學(xué)成分復(fù)雜，有些微量成分具有很強(qiáng)的生物活性，但其有效成分至今未能得到完全、徹底的研究。到目前為止已從該屬植物中共分離鑒定了140種以上的天然化合物，主要分為倍半萜類(包括倍半萜生物堿)、二萜類、三萜類、少量木質(zhì)素和其他化合物，其中共分離到74種倍半萜化合物，24種二萜類化合物，19種三萜類化合物［9］。如何將現(xiàn)代化的分離手段與傳統(tǒng)的提取方法相結(jié)合，進(jìn)行雷公藤有效成分的分離分析至關(guān)重要，而HPLC可實(shí)現(xiàn)多成分分離分析，該技術(shù)也得到人們的認(rèn)同，若其與高效的提取方法相結(jié)合，將會(huì)推進(jìn)雷公藤有效成分的研究及活性單體的制備。李紅茹利用超臨界流體提取雷公藤有效成分。并表明雷公藤有效成分含量的測(cè)定多采用高效液相色譜法［10］。孫乙銘(2009)等用高效液相色譜法測(cè)定雷公藤中雷公藤甲素的含量，研究雷公藤植株不同部位及不同采收年限雷公藤根雷公藤甲素含量的差異情況，結(jié)果呈良好的線性關(guān)系，回收率為95.90%，RSD=3.49%(n=6)［11］;陳岳祥(2009)等建立高效液相色譜法測(cè)定廣西產(chǎn)粉背雷公藤中不同部位雷公藤甲素的含量方法［12］。結(jié)果均表明HPLC測(cè)定法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、靈敏、重復(fù)性良好，適用于雷公藤甲素的含量測(cè)定。

張玉(2008)采用HPLC儀器檢測(cè)雷公藤藥材提取物中雷公藤甲素和雷公藤紅素的含量差異，比較提取方法的提取率［13］;庫(kù)爾班江(2008)等建立雷公藤藥材中雷公藤紅素的HPLC測(cè)定方法，均表明HPLC方法可靠［14］。張聰聰(2009)等利用HPLC法對(duì)雷公藤甲素等主要成分進(jìn)行測(cè)定，其結(jié)果在一定范圍內(nèi)均呈良好的線性關(guān)系，平均加樣回收率在98.81 ～99.84 范圍內(nèi)，RSD≤1.42(n=6)［15］。李蜜(2010)等運(yùn)用HPLC測(cè)定雷公藤藥材中雷公藤內(nèi)酯醇含量。結(jié)果表明雷公藤內(nèi)酯醇與其他成分分離效果良好，平均回收率為 98.17%［16］。陳蘭(2010)建立了高效液相色譜法測(cè)定雷公藤紅素的方法;研究表明該方法具有操作簡(jiǎn)便，準(zhǔn)確，回收率好，精密度高，重現(xiàn)性好，分析快速的優(yōu)點(diǎn)，可作為雷公藤藥材中雷公藤紅素的定量分析和質(zhì)量控制方法［17］。此外，周雯(2007)以高效液相色譜法測(cè)定雷公藤甲素、毒性成分雷公藤紅素和總生物堿的含量。建立雷公藤有效成分色譜指紋圖譜，并以高效液相－質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)鑒定了色譜指紋圖譜中27個(gè)共有峰中的21個(gè)共有峰所對(duì)應(yīng)的化學(xué)成分的結(jié)構(gòu)［18］。歐陽(yáng)小琨(2007)建立了HPLC同時(shí)測(cè)定雷公藤提取物中雷公藤春堿、雷公藤吉堿、雷公藤定堿以及雷公藤次堿的分析方法［19］。結(jié)果表明HPLC法穩(wěn)定可靠，重現(xiàn)性較好，分離效能高，方法可實(shí)現(xiàn)多成分的分析。

3 HPLC在雷公藤制劑質(zhì)量控制的應(yīng)用

長(zhǎng)期的臨床研究表明雷公藤對(duì)抗腫瘤、抑制免疫、抗炎、抗生育、抗艾滋病毒等效果明顯，有廣闊的應(yīng)用發(fā)展前景。雷公藤制劑常見(jiàn)的類型有片劑、滴丸、微囊劑等［20］，而其自身的藥理特性又從某種程度上制約著雷公藤藥物的發(fā)展，因此，除了對(duì)雷公藤藥物構(gòu)－效關(guān)系進(jìn)行研究從而保證雷公藤藥物的用藥安全外，對(duì)藥物的量－效關(guān)系進(jìn)行把關(guān)是比較有效且簡(jiǎn)便的途徑。我國(guó)部頒標(biāo)準(zhǔn)也規(guī)定了雷公藤藥物中雷公藤甲素和雷公藤紅素的檢測(cè)方法和含量控制。許多研究也表明HPLC可以作為雷公藤制劑質(zhì)量控制的測(cè)定方法。夏焱(2005)對(duì)雷公藤藥物中的重要有效成分－雷公藤甲素和主要毒性成分－雷公藤紅素的含量測(cè)定方法進(jìn)行了研究，建立甲素和紅素的HPLC含量測(cè)定方法，初步確定了HPLCELSD結(jié)合紫外檢測(cè)的方式對(duì)該類藥物進(jìn)行質(zhì)量控制，表明HPLC可作為雷公藤類藥材及其制劑中這兩種成分的定量分析及藥物質(zhì)量控制的方法［21］;闕慧卿(2005)等采用高效液相色譜(HPLC)法測(cè)定雷公藤多苷片中內(nèi)酯甲的含量，并與該藥品采用薄層掃描法(TLC)所制定的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行比較;結(jié)果表明HPLC法更準(zhǔn)確，更可靠［22］。劉法千(2007)等應(yīng)用HPLC法測(cè)定雷公藤多苷中雷公藤內(nèi)酯甲的含量。結(jié)果表明該方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，可用于雷公藤多苷的質(zhì)量控制［23］。庫(kù)爾班江(2008)等采用外標(biāo)法建立雷公藤制劑中雷公藤紅素的HPLC測(cè)定方法，表明HPLC可作為雷公藤制劑中雷公藤紅素的定量分析和質(zhì)量控制方法［24］。吳霞(2009)等建立雷公藤制劑中雷公藤紅素含量的HPLC測(cè)定方法，并對(duì)市售雷公藤制劑樣品中雷公藤紅素含量進(jìn)行比較研究。表明利用適當(dāng)?shù)臋z測(cè)手段對(duì)其進(jìn)行質(zhì)量監(jiān)控和制定合理的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)勢(shì)在必行［25］。除此之外，羅曉玲(2007)研究建立了雷公藤不同部位及制劑中5種萜類化合物的HPLC－ELSD分析方法。為雷公藤及其制劑的質(zhì)量控制提供了較全面的通用分析方法［26］。

4 展望

隨著雷公藤研究的不斷深入以及其良好的藥效和廣泛的應(yīng)用，雷公藤的需求量越來(lái)越大，而且“雷公藤GAP關(guān)鍵技術(shù)及新藥研發(fā)”獲得了“十一五”及“十二五”國(guó)家科技支撐計(jì)劃項(xiàng)目資助，足見(jiàn)雷公藤藥材的重要地位，但是經(jīng)過(guò)多年開(kāi)發(fā)雷公藤資源已經(jīng)大幅度減少，且雷公藤藥物的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)及用藥安全一直是人們所關(guān)注的核心問(wèn)題。所以必須通過(guò)科學(xué)手段從雷公藤種源篩選、新劑型研發(fā)、有效成分結(jié)構(gòu)改造、制劑質(zhì)量控制等系統(tǒng)得保障雷公藤用藥的安全。研究表明，高效液相色譜可以應(yīng)用于雷公藤的化學(xué)成分的分離分析，且方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，若其能與一些更精確的檢測(cè)儀器結(jié)合，使成分的檢測(cè)更加準(zhǔn)確方便，將會(huì)推進(jìn)雷公藤產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。

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