于向紅，王曙賓，粘立軍

(石家莊以嶺藥業(yè)股份有限公司，河北石家莊050035)

參松養(yǎng)心膠囊(國藥準(zhǔn)字Z20103032，國家標(biāo)準(zhǔn)號:YBZ00952003-2006Z-2009)是中國工程院院士吳以嶺教授以中醫(yī)絡(luò)病理論為指導(dǎo)，根據(jù)多年的臨床經(jīng)驗研制成功的創(chuàng)新性抗心律失常中藥，對治療心律失常有雙向調(diào)節(jié)的療效。該藥處方由黃連、山茱萸、五味子、甘松、赤芍、桑寄生、土鱉蟲等十二味中藥組成，原工藝中黃連、山茱萸、五味子、甘松四味藥材采用70%乙醇回流合提，赤芍、桑寄生等采用水煎煮合提，土鱉蟲采用粉碎加入，其中醇提工藝中乙醇用量大、生產(chǎn)成本高。

隨著現(xiàn)代提取技術(shù)的不斷發(fā)展，連續(xù)逆流超聲提取技術(shù)逐漸被應(yīng)用到中藥生產(chǎn)中，連續(xù)逆流超聲提取技術(shù)是一種增大傳質(zhì)推動力、提高提取效率的提取新方法，與傳統(tǒng)的提取方法相比，具有節(jié)省溶劑用量，縮短提取時間，減少后續(xù)濃縮能耗等優(yōu)點［1-13］。

本次研究是在單位前期小試研究工作的基礎(chǔ)上，采用連續(xù)逆流超聲提取技術(shù)對參松養(yǎng)心膠囊醇提工藝進行中試放大實驗，對影響產(chǎn)品質(zhì)量和生產(chǎn)成本相關(guān)環(huán)節(jié)進行考察，解決回流提取工藝中乙醇用量大、生產(chǎn)成本高等問題，從而降低生產(chǎn)成本，提高生產(chǎn)效率。

1 儀器與試藥

1.1 儀器連續(xù)逆流超聲提取成套設(shè)備(型號:GDC-TQ/3/C2N1，廠家:濟寧金百特生物機械有限公司，該設(shè)備超聲總功率70KW，超聲波頻率27kHz，超聲溫度40～60℃，進料速度120kg/h，進溶媒速度1 105 L/h)，Agilent 1200(廠家:安捷倫科技有限公司)，UV檢測器。METTLER TOLEDO AG135型電子天平，小型超聲儀(型號:KQ-250DB，廠家:昆山市超聲儀器有限公司)。

1.2 試藥鹽酸小檗堿標(biāo)準(zhǔn)品(批號:110713-200208)，購于中國藥品生物制品檢定所;甲醇(色譜純);乙腈(色譜純);其它試劑均為分析純，山茱萸、五味子、黃連、甘松藥材購于安國藥材市場，經(jīng)本公司質(zhì)檢科范文成主任藥師鑒定，均符合《中國藥典》2010年版(一部)有關(guān)項下規(guī)定［14］。

2 方法及結(jié)果

2.1 參松養(yǎng)心膠囊醇提工藝中試試驗方法

2.1.1 原回流提取工藝樣品的制備平行制備3批樣品，每批按處方量取山茱萸等四味藥共1 168.2 kg，加70%乙醇8倍量，回流提取3次，第1次3 h，第2次2 h，第3次1 h，合并提取液，減壓真空濃縮(蒸汽壓力≤0.1 MPa，溫度50～70℃，真空度0.04 MPa～0.085 MPa)，濃縮浸膏噴霧干燥(進風(fēng)口溫度160℃，出風(fēng)口溫度88℃，霧化器頻率45Hz)，得噴霧干燥粉末，稱質(zhì)量。

2.1.2 連續(xù)逆流超聲提取樣品的制備平行制備3批樣品，每批按處方量取山茱萸等四味藥共1 168.2 kg，加70%乙醇2 000 L，浸泡20 min，超聲波提取(超聲總功率70 KW，超聲波頻率27 kHz，超聲溫度40～60℃，超聲時間70 min，進料速度120 kg/h，進溶媒速度1 105 L/h)，超聲提取共用1.5 h，得提取液12 200 L，減壓真空濃縮(蒸汽壓力≤0.1 MPa，溫度50～70℃，真空度0.04 MPa～0.085 MPa)，濃縮浸膏噴霧干燥(進風(fēng)口溫度160℃，出風(fēng)口溫度88℃，霧化器頻率45 Hz)，得噴霧干燥粉末，稱質(zhì)量。

2.2 收粉率的測定方法取不同提取工藝下制備的噴霧干燥粉末，稱質(zhì)量，記錄收粉量，計算收粉率。

2.3 鹽酸小檗堿定量測定方法

2.3.1 色譜條件［15-17］:HPLC:Agilent 1200，UV檢測器，四元泵，自動進樣，在線脫氣;色譜柱:Agilent Zorbax SBC18(250 mm×4.6 mm，5 μm);流動相:乙腈-磷酸三乙胺水溶液(23∶77)，磷酸-三乙胺-水溶液配比比例為(1∶2∶1 000);檢測波長為345 nm，體積流量:1 mL/min，柱溫:30℃，進樣量:10 μL，理論塔板數(shù)按鹽酸小檗堿峰計算應(yīng)不低于2 000。

2.3.2 鹽酸小檗堿標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備稱取鹽酸小檗堿標(biāo)準(zhǔn)品9.36 mg，置于50 m L量瓶中，加甲醇定容搖勻，用5 mL移液管移取5 mL上述標(biāo)準(zhǔn)品溶液，置于另一個10 mL量瓶中，加甲醇定容，制成質(zhì)量濃度為93.6 μg/mL的鹽酸小檗堿標(biāo)準(zhǔn)品溶液，搖勻，備用。

2.3.3 供試品溶液的制備精密稱取參松養(yǎng)心膠囊醇提部分樣品粉末0.2 g，加甲醇20 mL，稱定質(zhì)量，超聲提取10 min，取出，放冷，用甲醇補足減失的質(zhì)量，搖勻，用0.22 μm微孔濾膜濾過，備用。

2.3.4 測定法精密吸取標(biāo)準(zhǔn)品溶液和供試品溶液各5 μL，注入液相色譜儀，測定峰面積，計算鹽酸小檗堿的含有量。

2.3.5 線性關(guān)系考察取鹽酸小檗堿標(biāo)準(zhǔn)品溶液，分別進樣1、2、3、4、5、6、7、8 μL。測定峰面積，以鹽酸小檗堿的進樣量(μg)為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)作圖，得標(biāo)準(zhǔn)曲線y=4 075.2x+34.773(R2=1)。結(jié)果表明鹽酸小檗堿進樣量在425.55～3 085.55 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.3.6 方法學(xué)考察精密度RSD為0.65%，重復(fù)性RSD為2.26%，穩(wěn)定性結(jié)果顯示，標(biāo)準(zhǔn)品溶液和樣品溶液常溫下放置24h不影響含有量測定，加樣回收率在99.13%～102.78%之間，平均加樣回收率為101.65%，RSD為1.60%，表明本方法具有較好的回收率。

2.4 提取溶媒用量及提取所用時間記錄不同提取工藝的提取溶媒消耗量及提取總時間。

2.5 實驗結(jié)果不同提取工藝對3批樣品出粉率、鹽酸小檗堿提取率、總提取時間及乙醇耗用量的測定結(jié)果，見表1。

表1 3批樣品各指標(biāo)測定結(jié)果(n=3)

3 討論

從測定結(jié)果可以看出，回流提取樣品的收粉率和鹽酸小檗堿的提取率均略高于連續(xù)逆流超聲提取，但從乙醇消耗量及提取時間來看，原工藝加熱回流提取，提取次數(shù)多，提取時間長達6～7 h，乙醇耗用量大，而采用超聲逆流提取技術(shù)后，藥材浸泡及提取總過程僅需要1.5 h，耗時為回流提取的1/4，且乙醇耗用量大大減少，節(jié)省溶劑用量近3/5，提取時間大幅縮短，溶劑用量大量減少，相應(yīng)的生產(chǎn)成本顯著降低，因此，連續(xù)逆流超聲提取工藝更節(jié)省成本，更經(jīng)濟。

但連續(xù)逆流超聲提取技術(shù)畢竟是一種新興的提取技術(shù)，在大生產(chǎn)過程中發(fā)現(xiàn)其也存在一些缺點，比如對藥材飲片的粉碎粒度要求比較高，連續(xù)超聲時間不能過長、設(shè)備比較昂貴等，但隨著技術(shù)的不斷發(fā)展，其性能參數(shù)也會越來越完善，應(yīng)用也會越來越廣泛。

本課題后續(xù)試驗對連續(xù)逆流超聲提取工藝樣品指紋圖譜以及相應(yīng)的藥效學(xué)進行了研究，發(fā)現(xiàn)該工藝制備樣品與原工藝樣品相比指紋圖譜變化不大，藥效實驗結(jié)果顯示該工藝制備的樣品能夠明顯抑制CaCl2、烏頭堿、心肌缺血再灌、哇巴因、急性心肌缺血所致心律失常的發(fā)生，與原工藝樣品相比，其抗心律失常效果沒有明顯差異。

綜上，本實驗是在前期小試實驗已確定工藝參數(shù)的基礎(chǔ)上，對小試實驗?zāi)芊穹糯笊a(chǎn)進行驗證，研究結(jié)果表明，連續(xù)逆流超聲提取技術(shù)應(yīng)用到參松養(yǎng)心膠囊中試生產(chǎn)中可大幅度降低生產(chǎn)成本，提高生產(chǎn)效率，該項提取技術(shù)是中藥提取未來發(fā)展的一個方向，具有廣闊的應(yīng)用前景，有望推廣到大生產(chǎn)應(yīng)用中。

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