葛文平，張 旭，高 翔，劉 寧，張海濤，張曉娟

（中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院，北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院，醫(yī)學(xué)實驗動物研究所，衛(wèi)生部人類疾病比較醫(yī)學(xué)重點實驗室，國家中醫(yī)藥管理局人類疾病動物模型三級實驗室，北京 100021）

小鼠是現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究和生命科學(xué)研究最常用的模式動物之一，其微生物質(zhì)量會直接影響實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性，而判斷微生物質(zhì)量的基礎(chǔ)是對其攜帶的微生物和寄生蟲進行定期檢測，根據(jù)檢測結(jié)果監(jiān)督、改進、提高動物的飼養(yǎng)管理水平。ICR、KM、C57BL、BALB/c和 BALB/c-nu是我國目前需求量最大的幾種小鼠品系，本文對五家實驗動物生產(chǎn)單位生產(chǎn)的 ICR、KM、C57BL/6、BALB/c及 BALB/cnu等品系的無特殊病原體（SPF）小鼠進行隨機抽檢。按現(xiàn)行國標(biāo)《實驗動物微生物學(xué)檢測方法》［1］和《實驗動物寄生蟲學(xué)檢測方法》［2］進行檢測，鑒定抽檢小鼠所攜帶的微生物和寄生蟲情況，進而為實驗動物生產(chǎn)管理和質(zhì)量評估提供參考。

1 材料和方法

1.1 材料

本實驗所檢測的實驗小鼠均購自具有《實驗動物生產(chǎn)許可證》的實驗動物生產(chǎn)單位。單位名稱以A、B、C、D、E為代碼，購入動物的許可［A：SCXK （京）2009-0007；B：SCXK（京）2006-0009；C：SCXK （京）2007-0005；D：SCXK（京）2008-0016；E：SCXK （京）2008-0002］。其中，KM小鼠購自（C、D）兩家生產(chǎn)單位；ICR小鼠品系購自（B、C、E）三家生產(chǎn)單位；C57BL/6購自（A、B、D、E）四家生產(chǎn)單位； BALB/c購自（A、B、D、E）四家生產(chǎn)單位；BALB/cnu購自（A、B、E）三家生產(chǎn)單位。每個生產(chǎn)單位，每種小鼠品系抽檢數(shù)量為10只。

1.2 檢測方法

按照《實驗動物微生物學(xué)檢測方法》（GB/T 14926.1。14926.64.2001）和《實驗動物寄生蟲學(xué)檢測方法》（GB/T 18448.1～18448.10.2001），對所得到的樣本進行微生物和寄生蟲檢測。按照《實驗動物微生物學(xué)等級及監(jiān)測》（GB 14922.2-2001）和《實驗動物寄生蟲學(xué)等級及監(jiān)測》（GB 14922.1-2001），對檢測結(jié)果進行綜合判定。檢測項目見表1。

2 結(jié)果

2.1 細菌檢測結(jié)果

按方法1.2對來自5個不同生產(chǎn)單位的 KM、ICR、C57BL/6、BALB/c、BALB/c-nu，小鼠進行了細菌檢測，檢測結(jié)果見表2。以肺炎克雷伯桿菌感染的比例最高。金黃金黃色葡萄球菌和綠膿桿菌亦見感染。

表1 微生物和寄生蟲檢測項目Tab.1 List of bacteria，virus and parasites

表2 細菌檢測結(jié)果Tab.2 Results of bacteria detection

2.2 病毒檢測結(jié)果

按方法1.2對來自5個不同生產(chǎn)單位的 KM、ICR、C57BL/6、BALB/c、BALB/c-nu，小鼠進行了病毒檢測，檢測結(jié)果見表3。以Reo-3、PVM、POLY和SV感染率較高，MHV和MVM亦見感染。

2.3 病毒檢測結(jié)果

按方法1.2對來自5個不同生產(chǎn)單位的 KM、ICR、C57BL/6、BALB/c、BALB/c-nu小鼠進行了寄生蟲檢測，檢測結(jié)果見表4。

3 討論

根據(jù)我國國家標(biāo)準(zhǔn)，在抽檢的5個生產(chǎn)單位的商 品 化 SPF 水 平 的 KM、ICR、C57BL/6、BALB/c、BALB/c-nu小鼠中，病毒方面主要是呼腸孤病毒Ⅲ型（Reo-3），小鼠肺炎病毒（PVM），多瘤病毒（POLY）；細菌方面主要是肺炎克雷伯桿菌金黃色葡萄球菌和綠膿桿菌，總陽性率見表5。

表3 病毒檢測結(jié)果Tab.3 Results of virus detection

表4 寄生蟲檢測結(jié)果Tab.4 Results of parasite detection

表5 攜帶病原微生物的陽性率Tab.5 Positive ratios of pathogenic microorganisms

一些國家的SPF級小鼠不排除綠膿桿菌，一是綠膿桿菌不易排除，二是綠膿桿菌為條件致病菌，對實驗研究危害相對較?。?-5］。

在病毒性病原中，呼腸孤病毒Ⅲ型（Reo-3）感染的陽性率最高，在許多脊椎動物體內(nèi)可分離獲得呼腸孤病毒，包括馬、牛、豬、綿羊、豚鼠、犬、貓、貂、禽類、蝙蝠以及人、黑猩猩和猴。除了感染嚙齒動物和禽類之外，一般不引起明顯的疾病，特別是對成年動物。呼腸孤病毒與動物和人類某些呼吸道及消化道疾病的發(fā)生有關(guān)［6］。

PVM屬于副黏液病毒屬（paramyxoviridae）的肺病毒（pneumovirus），其天然宿主是小鼠、大鼠和倉鼠。常見小鼠感染會引起慢性鼻炎和間質(zhì)性肺炎，通常不會產(chǎn)生明顯的臨床癥狀，而多呈潛伏性感染［6］。

小鼠肝炎病毒MHV（mouse hepatitis viruc）可引起小鼠發(fā)生肝炎、腦炎和腸炎，一般呈亞臨床感染或慢性感染，而機體抵抗力低時可引起急性發(fā)病死亡，導(dǎo)致實驗失敗。MHV可改變各種免疫應(yīng)答參數(shù)，影響酶的活性，從而對實驗產(chǎn)生嚴重的干擾［6］?？死撞畻U菌肺炎是由于一種常見的病原菌叫克雷伯菌引起的肺部炎癥，存在于正常人的腸道和呼吸道，亦存在于水和谷物中。在免疫低下以及接受手術(shù)和侵襲性醫(yī)源性操作的人群易患本屬細菌感染，實驗動物操作人員可能會將克雷伯桿菌傳給小鼠，從而造成小鼠的感染，免疫缺陷動物尤其敏感［7-10］。

小鼠體外寄生蟲常見的有螨、蚤、虱等。小鼠飼養(yǎng)環(huán)境與外界施行隔離控制，使得需在宿主體外完成部分生活史的虱、蚤的感染機會大大減少，而螨成為最主要的體外寄生蟲。患鼠因寄生蟲種類的不同而癥狀不同，一般可出現(xiàn)被毛粗亂、煩躁不安、消瘦、發(fā)育遲緩、種鼠生產(chǎn)能力下降、仔鼠成活率低等癥狀，感染嚴重部位可脫毛、結(jié)痂、瘙癢、潰瘍或發(fā)生皮炎，影響實驗結(jié)果。

通過檢測，目前SPF級小鼠的微生物質(zhì)量具有不穩(wěn)定性，有一些國標(biāo)中規(guī)定需要排除的病原體，這些病原體對藥物評價、疫苗研制和免疫學(xué)研究的影響尤其嚴重。以上病原體均可通過移卵或剖腹產(chǎn)予以凈化。

［1］GB 14922.2 2001，中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)—— 實驗動物微生物學(xué)等級及監(jiān)測［S］.北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2001.

［2］GB 14922.1 2001，中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)——實驗動物寄生蟲學(xué)等級及監(jiān)測［S］.北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2001.

［3］Taconic Health Standards.http：//www.taconic.com/wmspage.cfm?parm1=265

［4］List of agentsmonitored and policy for communication of changes in health status.The Jackson Laboratory.http：//jaxmice.jax.org/health/agents_list.htm l

［5］Routine Health Monitoring of Isolator-Reared VAF/Elite? Animals. http：//www. criver. com/en-US/TrainEducation/ health/Pages/home.aspx

［6］殷震，劉景華.動物病毒學(xué)［M］.北京：科學(xué)出版社，1985

［7］Bleich A，Kirsch P，Sahly H，F(xiàn)ahey J，Smoczek A，Hedrich HJ，Sundberg JP，2008.Keebsiella oxytoca： opportunistic infections in laboratory rodent［J］.Lab Anim 42：369-375.

［8］Fox JG，Anderson LC，Lowe FM，Quimby FW，editors.Laboratory Animal Medicine.2nded［M］.San Diego：Academic PRESS：2002.1325 pp.

［9］Fox J，Barthold S，Daviss M，Newcomer C，Quimby F，and Smith A editors.The Mouse in Biomedical Research：Diseases： 2nded［M］.New York：Academic Press：2007.756 pp

［10］MacArthur CJ，Pillers DA，Pang J，Degagne JM，Kempton JB，Trune DR.2008.Gram-negative pathogen K lebsiella oxytoca is associated with spontaneous chronic otitis media in Toll-like receptor 4-deficient C3H/HeJ mice［J］.Acta-to-laryngologica 128：132-138.

［11］Percy DH，Barthold SW.pathology of Laboratory Rodents and Rabbits［J］.Ames：Lowa State University Press；2007.325 pp.