史建國(guó) 董亞南 高 軍 杜 斌 孟 雷

山東大學(xué)附屬濟(jì)南市中心醫(yī)院神經(jīng)外科，山東濟(jì)南 250013

腦的炎性反應(yīng)是創(chuàng)傷性腦損傷后普遍存在的現(xiàn)象。外傷后腦組織的炎癥反應(yīng)主要包括炎癥因子的產(chǎn)生和釋放，并由此引起血腦屏障（blood-brain barrier，BBB）的破壞，水腫的形成。激活的補(bǔ)體片段通過(guò)多種途徑導(dǎo)致和加重繼發(fā)性腦損害。本實(shí)驗(yàn)對(duì)補(bǔ)體C3在閉合性顱腦損傷動(dòng)物模型中的動(dòng)態(tài)變化與腦水腫的關(guān)系進(jìn)行分析。

1 資料與方法

1.1 一般資料

健康、成年清潔級(jí)雄性SD大鼠（山東大學(xué)醫(yī)學(xué)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供）共48只，重量200～250 g。單純隨機(jī)分成8組：正常組（N）、假傷組（S）、腦損傷后 2、6、24 h、3、5、7 d 8 組，每組6只。

1.2 方法

1.2.1 致傷裝置的機(jī)械結(jié)構(gòu) 參照高燕等[1]改進(jìn)Feeney’s自由落體模型裝置并制作大鼠腦外傷模型。消毒皮膚，正中切開(kāi)，剝離骨膜，暴露右頂骨，用牙科鉆在冠狀縫后1.5 mm，中線旁2.5 mm處鉆一直徑5 mm骨窗，保持硬膜完整。將撞桿置于硬膜上，用20 g砝碼于30 cm高處沿外周導(dǎo)管墜落，撞擊撞桿從而撞擊硬膜，致右頂葉腦挫裂傷，打擊后切口內(nèi)滴注4萬(wàn)單位硫酸慶大霉素4～5滴（山東益健藥業(yè)有限公司，H20046418，2 mL∶8萬(wàn)單位），骨蠟封閉骨窗，縫合頭皮。假手術(shù)組僅開(kāi)顱窗后用骨蠟封閉，不施加打擊。

1.2.2 腦組織含水量測(cè)定 大鼠斷頭后快速剝出全腦，距創(chuàng)傷邊緣2 mm處取出腦組織，用電子分析天平（上海衡平儀器儀表廠，型號(hào)FA1004）測(cè)其濕重，然后放人110℃烤箱烘烤24 h至恒重，取出后冷卻10 min后稱干重，按下式計(jì)算：腦含水量（%）=（濕重-干重）/濕重×100%。

1.2.3 腦組織C3測(cè)定 對(duì)血腫周圍腦組織做冰凍及石蠟切片，免疫組化方法檢測(cè)C3表達(dá)情況，每張切片觀察10個(gè)高倍（×400）視野，取其均數(shù)（圖1）。具體操作按北京東亞免疫技術(shù)研究所提供的試劑盒進(jìn)行。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS12.0軟件進(jìn)行單因素方差分析，組間比較采用Duncan檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

腦組織含水量，C3測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 腦組織含水量、C3測(cè)定結(jié)果（x ± s）

圖1 正常大鼠腦組織C3免疫組化（×400）

3 討論

補(bǔ)體系統(tǒng)是人和某些動(dòng)物種屬在長(zhǎng)期的種系進(jìn)化過(guò)程中獲得的非特異性免疫因素之一，它也在特異性免疫中發(fā)揮效應(yīng)，它的作用是多方面的。補(bǔ)體系統(tǒng)的生物學(xué)活性，大多是由補(bǔ)體系統(tǒng)激活時(shí)產(chǎn)生的各種活性物質(zhì)（主要是裂解產(chǎn)物）發(fā)揮的[2]。補(bǔ)體廣泛參與機(jī)體抗微生物防御反應(yīng)以及免疫調(diào)節(jié)，是體內(nèi)具有重要生物學(xué)意義的效應(yīng)系統(tǒng)和效應(yīng)放大系統(tǒng)。補(bǔ)體有介導(dǎo)細(xì)胞溶解、擴(kuò)大炎癥反應(yīng)、清除免疫復(fù)合物和免疫調(diào)節(jié)等多種作用。實(shí)驗(yàn)和臨床研究發(fā)現(xiàn)，補(bǔ)體系統(tǒng)的激活在腦外傷后的炎癥反應(yīng)中起重要作用[3]。人體血清中補(bǔ)體含量相對(duì)穩(wěn)定，補(bǔ)體C3在人血補(bǔ)體系統(tǒng)中含量最高 ,在補(bǔ)體激活途徑中具有最重要的作用，是重要的炎性介質(zhì)，其激活產(chǎn)物有C3a、C3b。C3a作用于肥大細(xì)胞釋放組織胺增加血管通透性，擴(kuò)張血管，加重組織水腫；C3b具有免疫調(diào)理作用[4]。腦內(nèi)補(bǔ)體主要有星形細(xì)胞產(chǎn)生。在創(chuàng)傷性腦損傷中，血清和腦脊液中補(bǔ)體水平都升高，其中機(jī)制之一是創(chuàng)傷應(yīng)激引起腦細(xì)胞的嚴(yán)重創(chuàng)傷后的急性相反應(yīng)（acute phase response，APR）[5]，即機(jī)體保護(hù)組織免于損傷，激活組織修復(fù)過(guò)程的鏈級(jí)反應(yīng)。補(bǔ)體介導(dǎo)的腦損害涉及很多機(jī)制，其一是補(bǔ)體激括的3條途徑（即經(jīng)典、旁路、末端激活途徑）中任何一條啟動(dòng)補(bǔ)體鏈均可導(dǎo)致過(guò)敏毒素C3a和C5a的產(chǎn)生，C3a和C5a是炎癥的潛在調(diào)節(jié)者，C3a和C5a均能引起炎性細(xì)胞因子如TNF-a、IL-1β、IL-6和IL-8等的合成，這些因子一方面介導(dǎo)血腦屏障的損害，另一方面引起腦的APR，加上C5a結(jié)合于C5aR也可直接引起APR，因此產(chǎn)生惡性循環(huán)加重繼發(fā)性腦損害[6]。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)免疫組化方法檢測(cè)腦組織C3表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)C3變化與腦水腫變化趨勢(shì)一致，說(shuō)明補(bǔ)體在腦水腫的病理生理過(guò)程中發(fā)揮重要作用，了解補(bǔ)體系統(tǒng)在腦損傷中的作用，通過(guò)藥物抑制補(bǔ)體激活可能為減輕繼發(fā)性腦損害提供廣闊的治療前景，可改善患者預(yù)后，有益于降低腦損傷患者的傷殘率和病死率。

[1] 高燕，孫俊謨，田志雄，等.大鼠自由落體腦外傷模型的制作[J].浙江創(chuàng)傷外科，2004，9（10）：283-285.

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