王 琳

(天津市南開醫(yī)院，天津 300100)

色譜技術(shù)是目前應(yīng)用最廣泛、發(fā)展最迅速的生物樣品分析測定方法，在環(huán)境、生化藥物、精細(xì)化工產(chǎn)品分析等領(lǐng)域都涉及色譜及其相關(guān)技術(shù)的應(yīng)用。臨床藥理學(xué)是研究藥物在人體內(nèi)作用規(guī)律和人體與藥物間相互作用過程的一門交叉學(xué)科，以藥理學(xué)和臨床藥學(xué)為基礎(chǔ)，闡述藥動學(xué)、藥效學(xué)、毒副反應(yīng)的性質(zhì)和機(jī)制及藥物相互作用的規(guī)律等。色譜技術(shù)是臨床藥理學(xué)研究中最基本、最重要的技術(shù)［1］。

1 現(xiàn)代色譜(chromatography)技術(shù)

1.1 新型吸附劑電泳(electrophoresis) 如毛細(xì)管電泳(CE)、毛細(xì)管區(qū)帶電泳(CZE)、凝膠電泳(GE)、等電聚集電泳(IEE)、等速電泳(ITP)以及束膠電動毛細(xì)管色譜(MECC)、快速蛋白液相技術(shù)等，已逐步在中藥成分的分離、分析及鑒定中得到普遍應(yīng)用。

1.2 超高效液相色譜(UPLC) 超高效液相色譜(UPLC)與傳統(tǒng)HPLC方法相比，UPLC法顯示了諸多優(yōu)點(diǎn):節(jié)約時間、節(jié)省溶劑、峰容量增加等。該技術(shù)是分離科學(xué)和技術(shù)的巨大進(jìn)步，液相色譜亦由此進(jìn)入了全新的時代。Liu Mei［2］等用UPLC建立了丹參藥材的指紋圖譜。利用UFLC法測定由14味中藥組成的康視明合劑中柚皮苷的含量，并與HPLC法比較，結(jié)果顯示UFLC法在系統(tǒng)精密度、理論塔板數(shù)、拖尾因子、分離度等方面均優(yōu)于 HPLC法［3］。此外，與 MS/MS聯(lián)用，還可用于中藥復(fù)方血清化學(xué)成分、藥代動力學(xué)和代謝物等復(fù)雜生物樣本的分離及分析研究。

1.3 高速逆流色譜(HSCCC) HSCCC是用離心力固定液態(tài)固定相的逆流色譜，改變了以往逆流色譜耗時這一缺點(diǎn)。固定相不需要載體，因而消除了氣液色譜中由于使用載體而帶來的吸附現(xiàn)象，特別適用于制備性分離。當(dāng)加快儀器轉(zhuǎn)速至1 800 r/min時，其分離速度可與HPLC媲美，被廣泛地應(yīng)用于植物化學(xué)成分的分離制備研究，主要用于黃酮、苯丙素、生物堿、萜類、多酚及甾體等化合物的分離。如從朝鮮紅參中分離皂苷 Rg5、Rk1、Rg3、F4［4］，從龍膽中分離環(huán)烯醚萜龍膽苦苷Gentiopicrin［5］，從丹參中分離苯丙素類丹參酚酸B［6］，從喜樹中分離生物堿喜樹堿(camptothecin［7］，從 Polygonum cuspidatum Sieb.et Zucc 中分離多酚類Resveratrol、蒽醌類Emodin和Physcion。

1994年HSCCC創(chuàng)始人Ito又發(fā)展了pH－zonerefining CCC，使HSCCC的進(jìn)樣量又大大地前進(jìn)了一步，使其更加有利于天然植物的分離制備。

1.4 超臨界流體色譜(SFC) SFC是采用在臨界溫度及臨界壓力以上的流體做流動相的色譜方法。超臨界流體色譜和質(zhì)譜聯(lián)用是近年來才發(fā)展起來的一種高效分離檢測手段，超臨界流體色譜常和EI/CI質(zhì)譜聯(lián)用。隨著接口技術(shù)的發(fā)展，出現(xiàn)了與大氣壓化學(xué)電離(APCI)質(zhì)譜的聯(lián)用技術(shù)。近年來隨著商用 SFCNMR和SFE－NMR儀器的出現(xiàn)以及NMR探頭和高靈敏度等多項(xiàng)技術(shù)提高之后，SFC－NMR和SFE－NMR聯(lián)用技術(shù)得以迅速發(fā)展，在分析復(fù)雜混合物中(如中藥復(fù)方體系化學(xué)成分和結(jié)構(gòu)研究)有著廣闊的應(yīng)用前景。SFC和FTIR的聯(lián)用技術(shù)尚處于發(fā)展階段，但是已經(jīng)顯示出優(yōu)越性，是分離和鑒定難揮發(fā)、易熱分解復(fù)雜有機(jī)物的有效手段。

1.5 親和色譜(AC)AC是利用或模擬生物分子之間的可逆的特異性相互作用，從復(fù)雜的樣品基質(zhì)中選擇性提取、分離和(或)分析特定物質(zhì)的一種色譜方法。Su等［8］將DNA固定于硅膠表面，制成高效親和色譜，用于制作中藥提取物的生物活性指紋圖譜。一維與二維的色譜分析結(jié)果表明，化合物的保留時間和其與DNA的親和力大小有關(guān)。該方法還可用于從復(fù)雜的樣品基質(zhì)中，同時篩選并分析出多個與DNA具有作用力的化合物。

1.5.1 分子烙印親和色譜(MIC) 分子烙印技術(shù)(MIT)是20世紀(jì)末出現(xiàn)的一種新技術(shù)，它屬于超分子化學(xué)中主客體化學(xué)范疇，是利用具有分子識別能力的聚合物材料－分子烙印聚合物(MIP)來分離、篩選、純化目標(biāo)分子的技術(shù)。

1.5.2 免疫親和色譜(IAC)IAC是利用抗原和抗體間可逆的結(jié)合作用，高效選擇性分離和純化復(fù)雜體系中微量成分的方法。將抗體固定到固相載體上，可用于從復(fù)雜的樣品中分離得到所需的目標(biāo)化合物，或研究抗體與小分子間作用力的大小。作為四逆散的主要成分，柴胡皂苷a、芍藥苷、柚皮苷和甘草酸苷受到了關(guān)注［9，10］，可采用 IAC 探討這些成分在四逆散中的作用。

1.6 生物色譜法(biochromatography) 這是生命科學(xué)與色譜分離技術(shù)交叉形成的一種極具發(fā)展?jié)摿Φ男屡d色譜技術(shù)?；诜肿幼R別原理，它利用藥物產(chǎn)生效應(yīng)(或產(chǎn)生毒性作用)，一般是通過藥物與靶點(diǎn)(受體、通道、酶等)結(jié)合的原理，采用生物靶點(diǎn)選擇性地固化效應(yīng)物質(zhì)，從而分析、分離效應(yīng)物質(zhì)，是一種效應(yīng)—化學(xué)分析—成分分離聯(lián)動的技術(shù)，尤其適合于天然藥物效應(yīng)物質(zhì)基礎(chǔ)的研究。

分子生物色譜法的應(yīng)用中，毛希琴等［11］將RP －HPLC、固定化脂質(zhì)體色譜，固定化載體蛋白色譜3種色譜模式聯(lián)用模擬生理狀態(tài)下中藥活性成分在體內(nèi)的吸收與輸運(yùn)過程，并應(yīng)用于中藥川芎中活性成分的初步篩選，從川芎的甲醇提取液中篩選出幾種既有細(xì)胞膜的穿透能力又有與載體蛋白的結(jié)合能力的成分，并對其中兩種主要的組分進(jìn)行了初步的結(jié)構(gòu)鑒定。

細(xì)胞膜色譜法(CMC)是將活性組織細(xì)胞膜固定在特定載體表面，制備成細(xì)胞膜固定相(CMSP)，用液相色譜的方法研究藥物或化合物與固定相上細(xì)胞膜及膜受體的相互作用。

1.7 多維組合色譜 這是在通用型色譜基礎(chǔ)上發(fā)展上起來的，通過雙柱或多柱的串聯(lián)切換技術(shù)，組合不同性能檢測器。多維色譜法具有對樣品進(jìn)行預(yù)處理、分離富集等功能，因此獲得了迅速的發(fā)展。①多維色譜包括多種分離方式組合，主要有:GC－GC、HPLCGC、GC－PGC(裂解氣相色譜)、HPLC －SFC(超臨界流體色譜)、LC－LC、正相色譜 －反相色譜聯(lián)用(NBPC－RPLC)、LC －TLC、LC – CE(毛細(xì)管電泳)、SFC－SFC、LC－GC、SFC－GC、分子排阻色譜 －離子交換色譜聯(lián)用(SEC－IEC)、SEC－RPLC、非手性柱色譜－手性柱色譜(Achiral－Chiral)、多維毛細(xì)管電泳(CE)、二維薄層色譜(2D－TLC)等多種聯(lián)用方法。②色譜聯(lián)用技術(shù)還包括色譜儀器和一些有定性、定結(jié)構(gòu)功能的分析儀器—質(zhì)譜儀(MS)、傅立葉紅外光譜儀(FTIR)、傅立葉變換核磁共振波譜儀(FT－NMR)、原子吸收光譜儀(AAS)、等離子發(fā)射光譜儀(ICP－AES)等儀器的直接、在線聯(lián)用，這一類色譜聯(lián)用的目的在于增強(qiáng)色譜分析的定性能力。中藥的特征是復(fù)方，講究配伍，因此其化學(xué)成分十分復(fù)雜，要闡明藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，建立多維組合色譜的技術(shù)平臺十分必要。

陳衛(wèi)東等［12］建立了離線裂解－氣相色譜－質(zhì)譜聯(lián)用法(PGC/MS)研究中藥材指紋圖譜的測定方法。通過對18種中藥材裂解指紋圖譜分析對比，認(rèn)為這些藥材裂解指紋圖譜可以區(qū)分不同種類及不同產(chǎn)地的中藥材。

1.8 萃取技術(shù)與色譜技術(shù)聯(lián)機(jī)耦合 ①固體樣品:采用超臨界流體萃取(SFE)、加壓液相萃取(PLE)、亞臨界水萃取(PHWE)、微波輔助液相萃取(MAE)、超聲波輔助液相萃取(SAE);②液體樣品:采用固相萃取(SPE)以及使用膜為基質(zhì)幾種萃取，如透析和電滲析的液膜萃取(SLM)、微孔膜液液萃取(MMLLE)。這些萃取方法與色譜聯(lián)機(jī)耦合，如SFE–LC、SFE–GC、PLE–LC、PLE – GC、PHWE – LC、MAE–LC、MAE–GC、SAE– LC、SAE – GC、SPE – LC、SPE – GC、SLM– LC、MMLLE – GC、Dialysis– LC、LLE – GG等［13］。它們還可以和—些有定性、定結(jié)構(gòu)功能的分析儀器聯(lián)用，用于中藥復(fù)雜樣品有效成分分析，顯示出了無比的優(yōu)勢。

1.9 臨床藥理學(xué)研究內(nèi)容及常用檢側(cè)方法 臨床藥理學(xué)的研究內(nèi)容包括藥動學(xué)與生物利用度研究，藥動學(xué)是研究藥物在正常人與病人體內(nèi)的吸收、分布、代謝和排泄的規(guī)律性，而生物利用度是用藥代動力學(xué)原理來研究和評價藥物相同劑量的不同劑型的吸收速度與量的差別。

治療藥物監(jiān)測(TDM)是近20多年來形成的一門新的醫(yī)學(xué)分支，是臨床藥理學(xué)與藥物濃度測定技術(shù)緊密結(jié)合的結(jié)果。進(jìn)行TDM的藥物包括抗癲癇藥物、心血管藥物(如地高辛)、抗生素等，近年新增加了抗腫瘤藥物、抗病毒藥物(HIV)和治療精神病藥物。近年來，液質(zhì)聯(lián)用(HPLC－MS)技術(shù)也為體內(nèi)藥物檢測提供了更加敏感、特異、高效的濃度測定方法［14］，該方法因價格昂貴，操作技術(shù)要求高，短期難以普及和廣泛使用，但發(fā)展前景較好。

2 色譜技術(shù)在臨床藥理學(xué)方面的應(yīng)用

2.1 色譜技術(shù)在臨床藥動學(xué)方面的應(yīng)用 藥動學(xué)(PK)在臨床藥理、藥物作用機(jī)制以及新藥開發(fā)等方面的研究中越來越顯示出其重要性和必要性。藥動學(xué)的實(shí)驗(yàn)基本過程為:給藥→取血或組織樣品→樣品處理與分析測定→數(shù)據(jù)處理。藥動學(xué)包括定量和定性分析兩個方面，色譜技術(shù)在這兩個方面都發(fā)揮了重要的作用，根據(jù)目的不同選用不同的色譜分析方法。

2.1.1 定量分析 通過測定代謝物在體內(nèi)不同時間的濃度來建立反應(yīng)藥物變化規(guī)律的數(shù)學(xué)模型，計(jì)算各種藥動學(xué)參數(shù)。在定量分析中色譜技術(shù)的主要任務(wù)是測定血漿和尿液中的藥物及其代謝產(chǎn)物的濃度。隨著藥物開發(fā)步伐的加快，生物樣品分析技術(shù)也在飛速發(fā)展，越來越多便捷、經(jīng)濟(jì)的方法被開發(fā)并廣泛應(yīng)用，其中以HPLC和液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)應(yīng)用最為廣泛。

2.1.2 定性分析 色譜技術(shù)在定性藥動學(xué)中的任務(wù)主要是分析確定甚至提純藥物代謝產(chǎn)物。大多數(shù)藥物在體內(nèi)經(jīng)生物轉(zhuǎn)化成其代謝產(chǎn)物而排出體外，對藥物代謝產(chǎn)物的研究主要是確定藥物在體內(nèi)的代謝產(chǎn)物?，F(xiàn)在對藥物代謝產(chǎn)物的鑒定方法主要為分辨率高的質(zhì)譜方法，通過確定其相對分子質(zhì)量，進(jìn)而推測其代謝產(chǎn)物發(fā)生了何種基團(tuán)的改變。

對有效成分、代謝產(chǎn)物以及代謝途徑不明確的中藥，采用色譜方法尋找可能的有效成分和代謝產(chǎn)物是中藥現(xiàn)代化中重要的一步。

2.2 色譜技術(shù)在藥物轉(zhuǎn)運(yùn)、代謝研究中的應(yīng)用

2.2.1 在藥物轉(zhuǎn)運(yùn)中的應(yīng)用 藥物的吸收、分布、代謝、排泄過程都需要通過各種細(xì)胞膜，藥物通過細(xì)胞膜的方式有:濾過、簡單擴(kuò)散、載體轉(zhuǎn)運(yùn)。許多親水性藥物通過細(xì)胞膜需要載體蛋白的參與，轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的功能會影響到藥物的吸收及排泄，進(jìn)而影響藥物的血藥濃度及效應(yīng)，并且由相同轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白轉(zhuǎn)運(yùn)的藥物也可發(fā)生競爭性抑制，從而影響轉(zhuǎn)運(yùn)。色譜技術(shù)可通過檢測血漿及尿液中藥物濃度，探索參與特定藥物在體內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)的蛋白。Wen XD等［15］將微透析技術(shù)與 HPLCDAD－MS相結(jié)合，研究當(dāng)歸補(bǔ)血湯，以微透析回收率和牛血清白蛋白結(jié)合率為指標(biāo)，從中確定了4種活性成分及5種具有潛在活性的成分。Zhang X等［16］采用細(xì)胞膜色譜與HPLC－DAD－ELSD－MS聯(lián)用技術(shù)研究了當(dāng)歸補(bǔ)血湯中的活性成分，結(jié)果發(fā)現(xiàn)當(dāng)歸補(bǔ)血湯中9種成分可與 HL－02細(xì)胞結(jié)合，7種 成 分 可 與RAW 264.7細(xì)胞結(jié)合，13種成分可與 Caco－2細(xì)胞結(jié)合。

2.2.2 在藥物代謝中的應(yīng)用 大部分藥物在體內(nèi)都要經(jīng)代謝后排泄。參與藥物代謝的酶分兩大類:I相氧化酶和II相結(jié)合酶。無活性的代謝產(chǎn)物直接從體內(nèi)排泄，而有活性的代謝產(chǎn)物在與由同種酶代謝的藥物合用時會發(fā)生競爭抑制作用，因此，明確藥物代謝途徑也是藥物上市和指導(dǎo)臨床應(yīng)用所必需的。張蕾等［17］采用電噴霧離子化源(ESI)單重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜建立了同時測定大鼠灌胃時給予三物黃芩湯后血漿中苦參堿、氧化苦參堿和氧化槐果堿含量的 HPLC－MS分析方法，并計(jì)算了3種生物堿在大鼠體內(nèi)的藥代動力學(xué)參數(shù)。色譜技術(shù)不僅可以分析藥物母藥以及代謝產(chǎn)物的濃度，還可以分析未知物質(zhì)是否是藥物的代謝產(chǎn)物。鄒玲莉等［18］利用離子對反相高效液相色譜法測定大鼠血漿和紅細(xì)胞中外源性磷酸肌酸及其代謝產(chǎn)物。

Wang P等［19］采用 HPLC/DAD－MS聯(lián)用技術(shù)建立了當(dāng)歸補(bǔ)血湯的血清代謝物指紋圖譜，利用DAD和MS檢測器鑒定了指紋圖譜中的色譜峰，結(jié)果發(fā)現(xiàn)當(dāng)歸補(bǔ)血湯中有46種成分進(jìn)入了家兔體內(nèi)，并通過文獻(xiàn)檢索鑒定了10種成分;血清指紋圖譜中有21種成分在體外沒有發(fā)現(xiàn)，可能是當(dāng)歸補(bǔ)血湯的體內(nèi)代謝物。Wang XJ等［20］利用 UPLC/Q －TOF－MS/MS聯(lián)用技術(shù)分別建立了茵陳蒿湯的體內(nèi)和體外指紋圖譜，結(jié)果發(fā)現(xiàn)茵陳蒿湯的體外指紋圖譜中有45種成分，而大鼠灌胃茵陳蒿湯后的血清指紋圖譜中有21種成分;通過對照品對照及與文獻(xiàn)數(shù)據(jù)對比，鑒定了體外指紋圖譜中的30種成分，血清指紋圖譜中的21種成分有19種為直接被吸收的成分，另兩種是在體內(nèi)代謝產(chǎn)生的。

目前，對藥物代謝途徑的研究主要有兩種方法:一是重組酶與研究藥物孵育，用色譜技術(shù)測定藥物及代謝產(chǎn)物濃度，推定何種酶參與藥物代謝;二是抑制實(shí)驗(yàn)，用已知酶的底物與研究藥物孵育，測定研究藥物及代謝產(chǎn)物濃度是否因加入酶的底物而抑制，推斷研究藥物的代謝途徑。Yao等［21］利用LC－MSN研究了青藤堿在體內(nèi)的代謝，并鑒定了其代謝產(chǎn)物及代謝途徑。

2.3 色譜技術(shù)在生物等效性研究中的應(yīng)用 生物等效性試驗(yàn)研究的目標(biāo)是證實(shí)等量同種藥物的兩種制劑生物利用度完全相同，最終使得在替換使用相關(guān)的兩種制劑時，具有相同的有效性和安全性。當(dāng)前，在這一領(lǐng)域的研究中，國內(nèi)外普遍采用雙處理、兩周期隨機(jī)交叉實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的方法，即以藥時曲線下面積(AUC)、峰濃度(Cmax)和達(dá)峰時間(Tmax)為參數(shù)，通過多因素方差分析、t檢驗(yàn)以及計(jì)算90%可信區(qū)間來評價藥物的生物等效性。各種評價生物等效性的參數(shù)也就是藥物代謝動力學(xué)的各種參數(shù)，均需要色譜實(shí)驗(yàn)提供。

2.4 色譜技術(shù)在藥物個體差異及種族差異研究中的應(yīng)用

2.4.1 個體差異 機(jī)體對藥物的反應(yīng)存在個體差異，藥物反應(yīng)的個體差異主要與藥效學(xué)和藥動學(xué)兩方面有關(guān)。①藥效學(xué)方面的差異即在相當(dāng)?shù)难帩舛认?，藥物效?yīng)不同。②藥動學(xué)方面的差異即在應(yīng)用相同劑量的藥物時，血藥濃度存在差異。

造成藥物反應(yīng)個體差異的原因有許多，如遺傳、環(huán)境、食物以及健康狀態(tài)等，其中最重要的決定性因素是遺傳。遺傳藥理學(xué)是研究機(jī)體的遺傳變異引起的藥物反應(yīng)異常的學(xué)科。色譜技術(shù)和分子生物學(xué)技術(shù)是遺傳藥理學(xué)最基本的研究方法。分子生物學(xué)技術(shù)用于基因型的分析，而色譜技術(shù)用于藥物代謝酶和轉(zhuǎn)運(yùn)體表型的分析。

2.4.2 種族差異 藥物反應(yīng)的種族差異是指藥物反應(yīng)在種族人群間存在差異。種族差異的發(fā)現(xiàn)為各國的藥物監(jiān)督部門提出警示:不同藥物在不同人群中應(yīng)用時不應(yīng)盲目引用國外臨床試驗(yàn)結(jié)果，應(yīng)進(jìn)行獨(dú)立的臨床試驗(yàn)后方可在該國上市。

引起種族差異最主要的因素也是遺傳因素，種族間的差異主要表現(xiàn)在藥物反應(yīng)或代謝蛋白的有功能意義的突變頻率存在差異。色譜技術(shù)也是發(fā)現(xiàn)藥動學(xué)種族差異的重要手段之一，是指導(dǎo)種族差異個體化用藥的重要支持?，F(xiàn)在已有許多藥物的藥動學(xué)研究發(fā)現(xiàn)存在明顯的種族差異，種族間用藥劑量存在明顯差別。

2.5 色譜技術(shù)在藥物相互作用中的應(yīng)用 目前由于藥物種類日益增多，臨床合并用藥的機(jī)會和種類也越來越多，由藥物相互作用所帶來的問題特別是藥物不良反應(yīng)問題愈來愈引起人們的關(guān)注。藥物相互作用主要表現(xiàn)在三個方面:一是不影響藥物在體液中的濃度，但改變藥理作用，表現(xiàn)為藥物效應(yīng)動力學(xué)的相互作用。二是通過影響藥物的吸收、分布、代謝和排泄，改變藥物在作用部位的濃度而影響藥物作用，表現(xiàn)為藥物代謝動力學(xué)的相互作用。三是藥物在體外的相互作用，本類相互作用多發(fā)生在液體制劑，如在靜脈輸液中或注射器內(nèi)即可發(fā)生。藥物在體外的相互作用屬藥劑學(xué)或藥物化學(xué)的研究范疇，屬配伍禁忌。

色譜技術(shù)是研究藥動學(xué)方面藥物相互作用，并將其應(yīng)用至臨床的重要技術(shù)。通過運(yùn)用色譜技術(shù)對其中一種藥物濃度進(jìn)行定量分析，了解藥物之間的相互作用，可為臨床聯(lián)合用藥的合理性提供指導(dǎo)。

2.6 色譜技術(shù)在藥物療效與藥物濃度監(jiān)測中的作用 血藥濃度和藥物的藥理作用強(qiáng)度之間有密切關(guān)系，通常用血藥濃度來表示藥物在體內(nèi)的濃度。對于臨床上常見的一些治療窗較窄的藥物，應(yīng)進(jìn)行藥物濃度監(jiān)測。色譜技術(shù)以其靈敏度高、簡便快捷等優(yōu)點(diǎn)成為目前血藥濃度監(jiān)測最常用的方法之一。治療藥物監(jiān)測是指在臨床進(jìn)行藥物治療過程中，觀察藥物療效的同時，定時采集患者的血液(或尿液、唾液等)，測定其藥物濃度，以便根據(jù)患者的具體情況，使給藥方案個體化，從而達(dá)到滿意的療效及避免發(fā)生不良反應(yīng)，同時也可以為藥物過量中毒的診斷和處理提供有價值的實(shí)驗(yàn)室依據(jù)，將臨床用藥從傳統(tǒng)的經(jīng)驗(yàn)?zāi)Ｊ教岣叩奖容^科學(xué)的水平。張梅等［22］利用RP－HPLC方法測定大鼠口服葛根后血漿中大豆苷元的含量用以了解以其血藥濃度與藥效關(guān)系。

2.7 色譜技術(shù)在體內(nèi)活性物質(zhì)檢測中的應(yīng)用 人體內(nèi)天然存在一些具有生理功能和生物學(xué)活性的物質(zhì)，在正常生理過程和病理過程中對機(jī)體起著重要的調(diào)節(jié)作用，包括神經(jīng)遞質(zhì)、激素、活性肽、抗原、抗體以及代謝物等。有些內(nèi)源性物質(zhì)的代謝，可以反映機(jī)體某些器官的功能狀態(tài)，如肌酐檢定腎功能、膽紅素評估肝功能等。有些內(nèi)源性物質(zhì)本身即具有藥理活性，正常機(jī)體需要維持一定的血藥水平，如金屬離子鐵、鋅等。運(yùn)用分析化學(xué)技術(shù)檢測體內(nèi)內(nèi)源性活性物質(zhì)的水平，以便了解人體生理病理狀況從而為疾病的診斷和治療提供依據(jù)。

內(nèi)源性活性化合物往往濃度很低(ng/L～μg/L)，因此測定方法必須具有高靈敏性。常用的方法有色譜法和免疫分析法，色譜法特別是MS以其檢測方法靈敏、快速等優(yōu)點(diǎn)越來越受到青睞。色譜法通過在線分離、分析，將目標(biāo)內(nèi)源性活性物質(zhì)與其他內(nèi)源性干擾物質(zhì)分離，再通過多樣化的檢測手段進(jìn)行定量，其特異性強(qiáng)(抗干擾能力強(qiáng))、準(zhǔn)確度高。

3 結(jié)語

綜上所述，色譜技術(shù)在臨床藥理領(lǐng)域中的應(yīng)用非常廣泛，它能用于藥品的含量測定和雜質(zhì)限度檢查，還能用于藥物生物等效性和生物利用度及藥代學(xué)研究，從而能夠更多地排除主、客觀因素影響，使對藥物的評價更加客觀、準(zhǔn)確。于此可見，色譜技術(shù)在臨床藥理學(xué)研究中具有極其重要的作用和意義?，F(xiàn)代色譜技術(shù)的發(fā)展也必將促進(jìn)臨床藥理學(xué)研究的發(fā)展。

1 譚志榮，曾玲，郭棟，等.色譜技術(shù)在臨床藥理學(xué)中的應(yīng)用.中國新藥雜志，2008，17(12):1007

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