鄧 姝，何貴翔

(南京中醫(yī)藥大學(xué)，江蘇 南京 210029)

多囊卵巢綜合征(PCOS)日益成為婦科的常見疾病，以女性內(nèi)分泌代謝異常及生殖功能障礙為主，持續(xù)不排卵和雄激素過高為主要特征。其病因病理機(jī)制復(fù)雜，涉及神經(jīng)、內(nèi)分泌、代謝系統(tǒng)及卵巢局部的多種調(diào)控因素。PCOS的發(fā)生與胰島素抵抗和高雄激素血癥有密切關(guān)系，究竟二者孰因孰果，迄今仍未闡明，但雄激素過多作為PCOS的基本特征已得到廣泛認(rèn)可，有報(bào)道中國PCOS患者有約50%以上有高雄激素血癥。因此我們一直在探尋一種理想而可靠的建立動(dòng)物模型的方法，用以深入研究PCOS高雄激素血癥的發(fā)生發(fā)展和治療，以期為臨床診斷和治療提供參考。其造模方法主要有外源性雄激素、芳香化酶抑制劑[1]、孕激素[2]、胰島素、抗孕激素等[3]。筆者僅將雄激素、胰島素、雄激素及雌孕激素聯(lián)合等造模方法作一綜述及評價(jià)。

1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的選擇

為了深入研究PCOS的病理機(jī)制，在選擇構(gòu)建PCO動(dòng)物模型的動(dòng)物上應(yīng)選用與人類相近的靈長動(dòng)物，因?yàn)殪`長動(dòng)物多數(shù)具有規(guī)律的排卵周期與人類比較接近。有相關(guān)報(bào)道采用恒河猴作為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，雖然其是較為理想的動(dòng)物模型，但是恒河猴價(jià)格相對較貴不適宜普及。也有研究者用豚鼠作為動(dòng)物模型，但豚鼠的生命力較弱及飼養(yǎng)環(huán)境要求嚴(yán)格，也經(jīng)不起反復(fù)灌胃等動(dòng)作的刺激，不適宜長期試驗(yàn)。目前絕大多數(shù)的PCOS實(shí)驗(yàn)采用的均是大鼠，大鼠具有4～5 d的較規(guī)律發(fā)情周期且價(jià)格經(jīng)濟(jì)可以大規(guī)模使用，常用的大鼠有SD和Wistar2種。

2 PCOS高雄激素血癥動(dòng)物模型常用方法

2.1 外源性雄激素造模法

2.1.1 脫氫表雄酮(DHEA) Anderson等[4]用21日齡雌性SD大鼠，皮下注射DHEA混合劑(6 mg/100 g體質(zhì)量+0.2 mL注射用芝麻油劑)，連續(xù)注射20 d其血清DHEAS、A、T和E2升高，LH稍降低，F(xiàn)SH變化不明顯。Henmi等[5]使用相同方法進(jìn)行建模研究，發(fā)現(xiàn)大鼠性激素水平改變明顯,T、DHEAS、E2均明顯高于對照組。劉宇濤等[6]用DHEA造模，大鼠卵巢表面出現(xiàn)明顯囊腫，體質(zhì)量明顯增加，與PCOS高雄激素血癥的表現(xiàn)較一致。李淑娟等[7]認(rèn)為此模型特點(diǎn)是卵巢呈多囊性改變,激素水平的變化接近多囊卵巢綜合征患者，其中T、E2均顯著高于對照組。Lee等[8]用DHEA造模，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示DHEA在卵泡膜細(xì)胞內(nèi)可能經(jīng)Δ5途徑促進(jìn)T的合成，使血T水平升高。李巍巍等[9]認(rèn)為用DHEA造模的大鼠適用于無LH升高的PCOS，提出可以利用此動(dòng)物模型進(jìn)行腎上腺源性雄激素導(dǎo)致PCOS發(fā)生的機(jī)制研究。李進(jìn)等[10]通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證明利用DHEA造模法大鼠血清激素T濃度顯著性上升，F(xiàn)SH、LH濃度略降低，認(rèn)為脫氫表雄酮造模法大鼠能更好的研究血清性激素的改變。朱輝等[11]認(rèn)為，注射外源性雄激素雖可誘發(fā)卵巢多囊改變，在形態(tài)、激素改變及對治療的反應(yīng)等許多方面仍與人PCOS有很大差別。

2.1.2 丙酸睪丸酮 Tamura等[12]將9日齡、4周齡和8周齡雌性SD大鼠皮下注射丙酸睪酮(0.1 mg/g)，15周后僅9日齡的大鼠陰道涂片顯示陰道上皮呈持續(xù)性角化無周期性變化，血清T上升，4周齡和8周齡雌性大鼠造模結(jié)果不理想。王莉等[13]采用7～9日齡小鼠于頸背皮下注射丙酸睪丸酮1 mg/只1次，8周后連續(xù)陰道涂片檢查2個(gè)周期,本模型的大鼠卵巢重量明顯減輕,大鼠血清T含量明顯上升。田君等[14]認(rèn)為該方法造模的基本原理在于過高的雄激素干擾了卵泡的生長成熟出現(xiàn)不排卵，丙酸睪丸酮誘導(dǎo)的PCOS大鼠模型具有高胰島素血癥、性激素異常的內(nèi)分泌特征和卵巢多囊改變的形態(tài)學(xué)特點(diǎn)，并且激素和形態(tài)變化符合生理規(guī)律。李琴華等[15]提出將孕16 d的雌性大鼠連續(xù)3 d頸背部每只皮下注射丙酸睪丸酮2.5 mg及中性茶油，將所產(chǎn)下的子代雌鼠進(jìn)行觀察，這些子代雌鼠的卵巢形態(tài)多囊改變，17-羥孕酮、雄烯二酮、睪酮均上升。這種通過母體高雄環(huán)境建立子代實(shí)驗(yàn)性PCOS大鼠模型，易于大量培育，為PCOS病因?qū)W研究及治療提供了良好的模型。但楊正望等[16]認(rèn)為本模型除了無排卵，卵巢多囊性改變與人相似外，血清激素水平、卵巢重量、體積以及對治療的反應(yīng)都不同，不太適合作為PCOS的研究模型。

2.2 雄激素聯(lián)合HCG造模 談?wù)滂さ萚17]通過實(shí)驗(yàn)比較得出采用硫酸普拉睪酮鈉與HCG聯(lián)合造模的大鼠雄激素水平明顯升高。楊正望等[18]提出采用硫酸普拉睪酮鈉聯(lián)合HCG建立PCOS大鼠動(dòng)物模型，其在影響血清性激素方面及卵巢局部形態(tài)學(xué)方面與臨床更接近，符合PCOS 動(dòng)物模型的要求。鄺少松等[19]用9日齡雌性大鼠皮下注射十一酸睪酮5 mg/kg，等到大鼠85日齡時(shí)肌注HCG1.5 U/只，每天2次，連續(xù)9 d。結(jié)果顯示大鼠的雄激素、血脂及瘦素水平明顯升高。目前臨床沒有LH制品，由于HCG的結(jié)構(gòu)與LH相似，因此利用雄激素與HCG聯(lián)合造?？梢院芎玫哪MPCOS的高雄激素和高LH分泌的癥狀。

2.3 雄激素聯(lián)合胰島素造模 田君等[14]分別用DHEA+胰島素、胰島素+HCG造模，結(jié)果顯示用DHEA+胰島素的大鼠卵巢體積增大，血清T、LH、LH/FSH較對照組有顯著性差異，符合人PCOS 患者的病理特征。大量文獻(xiàn)報(bào)道高胰島素及胰島素抵抗?fàn)顟B(tài)可以導(dǎo)致高雄激素的產(chǎn)生，而高胰島素能作用于卵巢直接促進(jìn)卵泡膜細(xì)胞產(chǎn)生更多的雄激素。另一組則在病理切片中發(fā)現(xiàn)有黃體生成提示有排卵，不適宜用作造模。Honnma等[20]卻認(rèn)為此方法造模并不能全面模擬臨床上PCOS的病理狀況，不適用于PCOS高雄激素血癥的動(dòng)物模型。

2.4 胰島素和 HCG 聯(lián)合 Bogovich[21]用具有規(guī)則發(fā)情周期的85日齡雌性SD大鼠，第1～10天給予劑量逐漸增加的胰島素，胰島素劑量由開始的0.5 IU/d逐漸增至6.0 IU/d.第11～22天給予固定劑量胰島素6.0 IU/d和HCG 6.0 IU/d，其中HCG分2次注射，每次注射劑量為3.0 IU，對照組為分別單獨(dú)注射胰島素和HCG，以及相同劑量的生理鹽水為空白對照組，結(jié)果顯示大鼠血清LH、T、胰島素水平明顯增高。劉艷麗[22]認(rèn)為INS與高LH是2個(gè)獨(dú)立的原發(fā)因素，兩者的協(xié)同作用與PCOS的發(fā)病有關(guān)。李軼等認(rèn)為[23]該模型中聯(lián)合使用胰島素和HCG，比2種藥物單獨(dú)使用更能促進(jìn)體內(nèi)雄激素水平顯著升高，進(jìn)一步證實(shí)，高雄激素血癥和高LH水平在PCOS發(fā)病機(jī)制中的關(guān)鍵作用。T可通過AR使體外培養(yǎng)的脂肪細(xì)胞胰島素介導(dǎo)的糖攝入下降，但高雄激素是如何介導(dǎo)高胰島素狀態(tài)的發(fā)生尚未見文獻(xiàn)報(bào)道。在HCG和胰島素共同作用下，使血中SHBG降低，抑制卵泡顆粒細(xì)胞的有絲分裂，限制了顆粒細(xì)胞的數(shù)量，雄激素增加，因此雌性大鼠出現(xiàn)了高雄激素血癥及無排卵的癥狀，此法適宜用于高雄激素血癥造模。

2.5 其他 楊智鶯等[24]用米非司酮造模，結(jié)果實(shí)驗(yàn)組大鼠血清T、LH、E2較對照組明顯增加(P<0.01)，而FSH水平降低，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。Kafali等[25]首次采用來曲唑建立PCO動(dòng)物模型，用不同劑量0.1、0.5、1.0 mg/kg來曲唑進(jìn)行灌胃，共21 d。劉宏改等[26-27]亦用來曲唑誘導(dǎo)大鼠PCOS模型成功，實(shí)驗(yàn)表明來曲唑在降低大鼠體內(nèi)E2水平的同時(shí)抑制雌激素對下丘腦的負(fù)反饋，使垂體促性腺激素分泌增加；另一方面引起卵巢局部雄激素增加，兩方面的共同作用可以誘導(dǎo)卵巢呈多囊樣改變。劉艷麗等[28]利用來曲唑造模，通過實(shí)驗(yàn)證明實(shí)驗(yàn)組大鼠血清T水平高于其對照組，來曲唑阻斷了雄激素向雌激素的轉(zhuǎn)化途徑，產(chǎn)生了內(nèi)源性的雄激素聚積。李進(jìn)等[29]通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證明來曲唑造模法大鼠的優(yōu)勢表現(xiàn)在卵巢改變上，認(rèn)為DHEA造模法大鼠能更好的研究血清性激素的改變。

3 中藥治療

中醫(yī)認(rèn)為腎虛和血瘀是高雄激素血癥的主要病機(jī)，高雄激素血癥會(huì)引起卵泡成熟和排卵的障礙。李喜鶴等[30]通過實(shí)驗(yàn)證明中藥隱丹參酮有降雄激素的作用，可以降低睪酮的前體合成物質(zhì)17-OHP含量，因此具有抗雄激素的作用。王翠霞等[31]將補(bǔ)腎化痰方用于PCOS大鼠，高劑量組大鼠LH、T水平下降明顯，但對FSH沒有明顯作用。王針織等[32]運(yùn)用補(bǔ)腎化痰祛瘀中藥進(jìn)行試驗(yàn),結(jié)果顯示中藥可以明顯降低用藥組大鼠INS的水平，但大鼠排卵的恢復(fù)并不是通過降低T水平。方云蕓[33]運(yùn)用右歸丸治療雄激素致不孕大鼠，能有效降低大鼠血清T的含量，并有降低IGF-1的趨勢，促進(jìn)T 轉(zhuǎn)化為E2。郝琦蓉等[34]認(rèn)為，中藥多囊平膠囊能使PCO大鼠血T、瘦素的水平均明顯下降，并且OGTI實(shí)驗(yàn)中曲線下面積減小。李小平等[35]發(fā)現(xiàn)白芍、當(dāng)歸、生地黃、熟地黃、皂角刺能降低胰島素及雄激素水平，改善卵巢微循環(huán)，促進(jìn)卵泡發(fā)育和排卵?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)證明，補(bǔ)腎藥可通過調(diào)節(jié)腦內(nèi)β-內(nèi)咖肽-5羥色胺等遞質(zhì)影響GnRH分泌，而對生殖功能起調(diào)節(jié)作用;提高卵巢對垂體促性腺激素的反應(yīng)性，增加內(nèi)源性雌激素水平。因此有許多中醫(yī)專家提出用厚味之物(鹿角膠、紫河車等)治療高雄激素血癥，其可以溫補(bǔ)腎陽，調(diào)理沖任氣血，調(diào)整機(jī)體陰陽氣血平衡，使HPO軸功能恢復(fù)正常，抑制卵巢分泌過多的雄激素。王莉等[36]研究補(bǔ)腎天癸方對ASR大鼠的影響，實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示天癸方能降低AR mRNA表達(dá)，同時(shí)卵巢AR mRNA表達(dá)增高，加強(qiáng)了雄激素對卵巢組織的抑制作用。戴春秀[37]指出益腎導(dǎo)痰調(diào)沖湯能夠改善PCOS大鼠性激素水平，具有恢復(fù)排卵作用。

4 結(jié)語

綜上所述，PCOS的動(dòng)物模型的研究以及利用POCS動(dòng)物模型對中藥治療機(jī)制的研究在國內(nèi)尚處于起步階段，文中所介紹的造模方法多數(shù)只能片面反映PCOS高雄激素血癥的癥狀。利用藥物在短期內(nèi)造成的PCOS模型與人類疾病自身病證出現(xiàn)在時(shí)間上和機(jī)制上均有所不同，我們只能簡單進(jìn)行癥狀的模擬，因此會(huì)影響到對中藥作用機(jī)制的闡述，需要我們解決的問題還很多。多數(shù)文獻(xiàn)中報(bào)道對PCOS動(dòng)物模型干預(yù)時(shí)多選擇補(bǔ)腎藥、活血藥、化痰藥和健脾藥，以補(bǔ)腎中藥報(bào)道最為廣泛并與臨床用藥基本相同。目前中藥的干預(yù)點(diǎn)多傾向于對生殖器官、垂體和腎上腺、細(xì)胞因子、卵巢局部調(diào)控因素及性激素和內(nèi)分泌代謝的探討，由于國內(nèi)當(dāng)前科研水平的限制中醫(yī)藥對PCOS的干預(yù)多數(shù)還停留在多水平、多靶點(diǎn)上，今后應(yīng)集中在PCOS疾病的單因素、單靶點(diǎn)的研究上結(jié)合臨床，突破限制，研究出病證相結(jié)合的更符合科研要求的PCOS高雄激素血癥的動(dòng)物模型，使中醫(yī)藥的療效靶點(diǎn)更為確切，治療機(jī)制更加清楚，使研究成果更具說服力。

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