王玉健，王 斌，馬 妍，楊志勇

（天津市公安局物證鑒定中心，天津 300384）

應(yīng)用EZ-tape膠帶分離提取混合斑精細(xì)胞

王玉健，王 斌，馬 妍，楊志勇

（天津市公安局物證鑒定中心，天津 300384）

法醫(yī)遺傳學(xué)；精細(xì)胞；混合斑；EZ-tape膠帶

在強(qiáng)奸案件中的DNA檢驗(yàn)往往需要將混合斑中男性精子與女性陰道上皮細(xì)胞徹底分離。常規(guī)方法是剪取載體及其上面附著的混合斑跡一起進(jìn)行差異裂解分離出精子細(xì)胞與女性陰道上皮細(xì)胞。在實(shí)踐中，由于載體的介入可能會(huì)帶來(lái)不利因素，加大了混合斑分離的難度，往往得不到男性精斑的DNA分型或者得到的是混合DNA分型。本研究根據(jù)混合斑的形成特點(diǎn)，利用EZ-tape膠帶既不破壞載體又可多次粘取載體表面混合斑跡的特性，巧妙地克服了載體帶來(lái)的諸多不利因素，提高了男性精子的檢出率。

1 材料與方法

1.1 材料

10份混合斑檢材均來(lái)自于日常案件，檢材包括內(nèi)褲、護(hù)墊、衛(wèi)生紙、床單等。

1.2 儀器與試劑

EZ-tape膠帶（公安部物證鑒定中心研制），F(xiàn)reedom EVO 100-4型自動(dòng)化提取工作站（瑞士TECAN公司），EQ1000法醫(yī)DNA提取試劑盒（北京東勝創(chuàng)新生物科技有限公司），9700型PCR擴(kuò)增儀、3130XL型遺傳分析儀、SinofilerTM試劑盒（美國(guó)AB公司）。

1.3 方法

用EZ-tape膠帶多次粘取載體表面的可疑斑跡部位，用干凈的鑷子揭下基座上的膠帶，剪碎放入1.5mL離心管中，按照文獻(xiàn)[1]中的步驟加300μL TNE緩沖液于37℃浸泡30min，然后加入30μL 10%的SDS，加蛋白酶K至終質(zhì)量濃度為40 μg/mL（如果女性細(xì)胞較多，蛋白酶K終質(zhì)量濃度可增至100 μg/mL）。于56℃保溫過夜消化女性上皮細(xì)胞后直接挑出膠帶，然后以離心半徑5cm，14000r/min，離心5min，取得富含女性DNA的上清液保存?zhèn)溆茫行跃?xì)胞沉淀用TNE緩沖液洗滌兩次備用。按照文獻(xiàn)[2]的方法，在Freedom EVO 100-4型自動(dòng)化提取工作站上應(yīng)用EQ1000法醫(yī)DNA提取試劑盒運(yùn)行“工作站-磁珠法”提取程序，分孔提取上述上清液及男性精子細(xì)胞懸液，最終得到的DNA樣品采用SinofilerTM試劑盒進(jìn)行復(fù)合擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物以3130XL型遺傳分析儀進(jìn)行檢測(cè)分析。

2 結(jié)果與討論

10份混合斑檢材均分離獲得男性精子DNA的STR分型。EZ-tape膠帶是公安部物證鑒定中心研制的一種針對(duì)脫落細(xì)胞的提取裝置，其原理為利用膠帶直接粘取滲透性和非滲透性客體表面上的脫落細(xì)胞，膠帶固定在基座上易于操作，使用前后存放于有機(jī)玻璃密閉容器中，避免污染[3]。

本研究將EZ-tape膠帶應(yīng)用到強(qiáng)奸案件混合斑中精子的分離，除利用EZ-tape膠帶的上述優(yōu)點(diǎn)外，還利用其不破壞檢材載體即可取到載體表面目的細(xì)胞的特性。這就避免了檢材載體帶來(lái)的載體體積過大、載體本身易碎易爛、載體所含抑制物以及載體深層附著的大量女性細(xì)胞等不利因素，縮短了女性細(xì)胞的消化時(shí)間，簡(jiǎn)化了精子的離心分離、洗滌等操作步驟，降低了混合斑分離的難度及成本。

在實(shí)際檢驗(yàn)中，最好先使用特定波長(zhǎng)的紫外光源照射上述檢材，通過護(hù)目鏡可觀察到混合斑跡的熒光區(qū)域范圍，再結(jié)合顯微鏡檢查大體了解女性上皮細(xì)胞及男性精子細(xì)胞的數(shù)量，最后根據(jù)檢材實(shí)際情況對(duì)粘取次數(shù)、粘取范圍、一步消化時(shí)蛋白酶K的用量以及消化時(shí)間略作調(diào)整。

綜上所述，EZ-tape膠帶的使用很大程度上避免了檢材載體帶來(lái)的諸多不利因素，提高了男性精子的檢出率，可在強(qiáng)奸案件中加以利用。

[1]鄭秀芬.法醫(yī)DNA分析[M].北京：中國(guó)人民公安大學(xué)出版社，2002：47.

[2]匡金枝，聶同鋼，朱巍，等.DNA自動(dòng)化檢案及其規(guī)范程序的研究與應(yīng)用[C]//公安部物證鑒定中心.法醫(yī)遺傳學(xué)進(jìn)展與應(yīng)用：第三屆全國(guó)法醫(yī)DNA檢驗(yàn)技術(shù)研討會(huì)論文選.北京：群眾出版社，2008：20-22.

[3]李萬(wàn)水，胡蘭，劉海東，等.用EZ-tape膠帶提取接觸DNA一例[C]//公安部物證鑒定中心.法醫(yī)遺傳學(xué)進(jìn)展與應(yīng)用：第三屆全國(guó)法醫(yī)DNA檢驗(yàn)技術(shù)研討會(huì)論文選.北京：群眾出版社，2008：367-368.

2012-02-13）

（本文編輯：李成濤）

DF795.2

B

10.3969/j.issn.1004-5619.2012.02.015

1004-5619（2012）02-0133-01

王玉?。?973—），男，天津人，副主任法醫(yī)師，主要從事法醫(yī)DNA檢案工作；E-mail：mayan0615@126.com