劉鳳臣，蔡廣知，楊建龍，張彥飛，貢濟(jì)宇

(長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，吉林 長(zhǎng)春 130117)

當(dāng)歸和川芎的化學(xué)成分主要為揮發(fā)油，具有平喘、解痙等作用[1-2]，對(duì)痛經(jīng)、哮喘、抗免疫、心肌缺血、腦缺血、哮喘持續(xù)狀態(tài)、發(fā)熱等有明顯療效[3-7]。2味藥在臨床應(yīng)用時(shí)主要是其飲片的炮制品，超臨界CO2萃取技術(shù)萃取溫度低，可大量保存對(duì)熱不穩(wěn)定成分及易氧化的揮發(fā)性成分[8]，為了解飲片炮制之后揮發(fā)油的變化,本實(shí)驗(yàn)采用超臨界CO2萃取技術(shù)萃取揮發(fā)油，采用GC-MS計(jì)算機(jī)聯(lián)用技術(shù)對(duì)其成分變化進(jìn)行研究。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗(yàn)材料與試劑 當(dāng)歸和川芎藥材(購于吉林大藥房)，石油醚、乙醇、黃酒、蒸餾水。

1.1.2 主要設(shè)備 超臨界萃取儀Spe-ed SFE-Ⅱ(Applied Separations Inc.)，電子天平(梅特勒-托利多儀器有限公司)，科偉牌高速萬能粉碎機(jī)(北京科偉永興儀器有限公司)，熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱DHG-9070A型(上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司)，QP-2010型GC-MS聯(lián)用儀(日本島津公司)。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 藥材炮制 酒炙當(dāng)歸：取當(dāng)歸片，加入定量黃酒拌勻，稍悶潤，待酒被吸盡后，文火炒至深黃色，取出放涼(100 kg，用黃酒10 kg)。

酒炙川芎：川芎片，加入定量黃酒拌勻，稍悶潤，待酒被吸盡后，置炒制容器內(nèi)，用文火加熱，炒至棕黃色時(shí)，取出晾涼。篩去碎屑(100 kg用黃酒10 kg)。

1.2.2 藥材粉碎、處理 分別精密稱取川芎、當(dāng)歸生品及酒炙品各20 g，粉碎、干燥，過40目篩,即得。

1.2.3 揮發(fā)油的提取 采用超臨界CO2萃取法萃取其揮發(fā)油，將藥材粉末置于萃取釜中調(diào)壓力為30 MPa，溫度40 ℃，連續(xù)萃取180 min，收集揮發(fā)油，即得。

1.2.4 色譜條件

1.2.4.1 GC條件 HP-5MS石英毛細(xì)管柱(30 m×0.25 mm×0.25 μm)；柱溫80～240 ℃，程序升溫4 ℃/min；

柱流量1.0 mL/min；進(jìn)樣口溫度250 ℃；柱前壓100 kPa；進(jìn)樣量0.2 μL；分流比10∶1；載氣為高純氦氣。

1.2.4.2 MS條件 電離方式EI；電子能量70 ev；接口溫度240 ℃；離子源溫度230 ℃；質(zhì)量范圍35～450。

1.2.5 樣品制備及測(cè)定 分別精密稱取揮發(fā)油0.2 g，置5 mL容量瓶中，加石油醚定容至刻度，過0.22 μL濾膜，即得。取0.2 μL注入GC-MS聯(lián)用儀，記錄總離子流圖，保留時(shí)間和峰面積，再通過譜庫檢索，確定揮發(fā)油的組成和相對(duì)含量。

2 結(jié)果

2.1 當(dāng)歸、川芎酒炙前后揮發(fā)油含量及提取率比較 見表1。

表1 藥材酒炙前后揮發(fā)油含量及提取率比較

2.2 GC-MS分析結(jié)果 采用超臨界CO2萃取所得當(dāng)歸生品及酒炙品總揮發(fā)油，利用GC-MS聯(lián)用儀分析，得到的圖譜與標(biāo)準(zhǔn)圖譜對(duì)照，鑒定出16種化學(xué)成分，參考標(biāo)準(zhǔn)圖譜和相關(guān)文獻(xiàn)[9]確定其化學(xué)結(jié)構(gòu)，用峰面積歸一化法計(jì)算各組分的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，生品、酒炙品總離子流圖分別見圖1、圖2，結(jié)果見表2。

圖1

圖2

圖3

圖4

表2 超臨界CO2萃取當(dāng)歸的揮發(fā)油成分GC-MS分析結(jié)果

表3 超臨界CO2萃取川芎的揮發(fā)油成分GC-MS分析結(jié)果

同樣方法，從川芎酒炙前后所得的揮發(fā)油中鑒定出12種化學(xué)成分，生品、酒炙品總離子流圖分別見圖3、圖4，結(jié)果見表3。

3 討論

本實(shí)驗(yàn)采用超臨界CO2萃取技術(shù)，整個(gè)過程耗時(shí)短，效率高，萃取溫度低，可大量保存對(duì)熱不穩(wěn)定的成分及易氧化的揮發(fā)性成分。

酒炙川芎和當(dāng)歸揮發(fā)油含量較生品降低，可能是由于藥材加工處理和炮制過程中有所損失，2種飲片炮制前后揮發(fā)油組分發(fā)生了變化，2味藥揮發(fā)油中多數(shù)成分的相對(duì)含量均有升高趨勢(shì)，少部分揮發(fā)油減少甚至消失，川芎和當(dāng)歸炮制前后揮發(fā)油變化的研究對(duì)臨床應(yīng)用具有重要價(jià)值。

酒炙可以改變藥材的藥性、化學(xué)組成及含量，本文的研究為藥材酒炙法炮制的規(guī)范化及臨床應(yīng)用積累了條件，今后在制定藥材炮制標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，應(yīng)充分考慮藥材炮制前后化學(xué)成分組成及含量變化，條件允許應(yīng)配合開展相關(guān)藥理實(shí)驗(yàn)研究。

[1]中華人民共和國藥典委員會(huì).中國藥典[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：124-125.

[2]陶靜儀,阮于平,陳耀祖.當(dāng)歸成分藁本內(nèi)酯平喘作用的研究[J].藥學(xué)學(xué)報(bào),1984,19(8):561-565.

[3]劉林娜.梅其炳.程建峰.當(dāng)歸揮發(fā)油的研究進(jìn)展[J].中成藥,2002,24(8):621-623.

[4]胡長(zhǎng)鷹.當(dāng)歸揮發(fā)油的提取與成分分析[J].科研開發(fā),2006,22(2):24.

[5王普善,高宣亮.中藥川芎的化學(xué)成分研究[J].中草藥,1985,16(3):41-42.

[6]季芳,呂雪芳,阮琴,等.川芎中阿魏酸HPLC檢測(cè)分析[J].中國現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)雜志,2003,20(4):149-151.

[7]張達(dá)磊.李桂生.川芎揮發(fā)油的研究進(jìn)展[J].時(shí)珍國醫(yī)國藥,2005,16(7):664-665.

[8]永芳.超臨界流體CO2萃取川芎揮發(fā)油化學(xué)成分的研究[J].中國藥學(xué)雜志,2000,35(2):84.

[9]叢浦珠,李筍玉.天然有機(jī)質(zhì)譜學(xué)[M].北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2002:23.