李艷

中圖分類號：Ｓ８５２．５＋３文獻標(biāo)識碼：B文章編號：１００７－２７３Ｘ（２０12）09-0022-01

當(dāng)前國內(nèi)檢測豬口蹄疫抗體水平的方法有ＥＬＩＳＡ法、豬口蹄疫正向間接血凝法和免疫金標(biāo)試紙法等。前兩種方法雖然都具有微量、特異、準(zhǔn)確的優(yōu)點，但需要比較完備的試驗儀器和經(jīng)驗豐富的技術(shù)人員，且檢測時間較長。而免疫金標(biāo)試紙檢測法是新開發(fā)的一種全新的豬口蹄疫抗體檢測方法，檢測一個樣品只需８～１５ｍｉｎ，操作簡便、快速、直觀，結(jié)果容易判定，但其檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性尚待驗證。鑒于此，為了選擇一種切合遠(yuǎn)安縣動物疫病防控實際的檢測方法，我們采用兩種常用的檢測方法（免疫金標(biāo)試紙檢測法和正向間接血凝試驗法）對遠(yuǎn)安縣農(nóng)村散養(yǎng)戶的２００份豬血清樣品進行了口蹄疫免疫效果對比檢測試驗，這對于本中心能夠及時準(zhǔn)確掌握生豬口蹄疫免疫效果具有一定的指導(dǎo)意義。

１材料與方法

１．１材料

被檢樣品采自全縣７個鄉(xiāng)鎮(zhèn)的農(nóng)村散養(yǎng)戶。２００份豬血清均為免疫口蹄疫疫苗后１８～２０ｄ所采的全血樣品，免疫疫苗均為中牧實業(yè)股份有限公司蘭州生物藥廠提供的豬口蹄疫滅活疫苗。

豬口蹄疫正向間接血凝抗原（包括稀釋液）購自深圳市康百得生物科技有限公司，試劑盒批號：２０１２０２１８；豬口蹄疫抗體免疫金標(biāo)試紙條購自深圳市康百得生物科技有限公司，生產(chǎn)批號：２０１１０９０８；儀器：Ｖ型９６孔１１０度血凝板，臺式離心機，精密移液器（５～５０μL），微量振蕩器。

１．２方法

將２００份全血樣品放入離心機離心，５ｍｉｎ后吸取上層血清液，置于試管架上備用。向金標(biāo)試紙檢測卡的橢圓形加樣孔內(nèi)加入２～３滴（５０～１００μＬ）待檢豬血清，室溫下靜置８～１５ｍｉｎ判定結(jié)果。加樣后８～１５ｍｉｎ與金標(biāo)試紙附帶的參照卡的色帶滴度進行對照比較，當(dāng)被檢樣品檢測線（Ｔ）條帶的色澤大于或等于參照卡中１∶３２效價時，說明檢測樣品中豬口蹄疫抗體的滴度較高，如果低于１∶３２則表示被檢豬的口蹄疫抗體水平過低，應(yīng)及時進行豬口蹄疫疫苗接種。正向間接血凝試驗操作程序如下：加稀釋液５０μＬ→加被檢血清５０μＬ→在血凝板上倍比稀釋被檢血清→加血凝抗原→振蕩搖勻→３７℃下靜置３０ｍｉｎ→結(jié)果判定。以５０％紅血球出現(xiàn)凝集的血清最大稀釋倍數(shù)為該血清的血凝效價。血凝效價達１∶３２為免疫合格，１∶３２以下為免疫不合格。

２結(jié)果與分析

由表１、表２可見，免疫金標(biāo)試紙檢測豬口蹄疫抗體效價合格率為８２．５％，正向間接血凝試驗檢測其合格率為８１．０％。通過數(shù)據(jù)比較表明，免疫金標(biāo)試紙檢測與豬口蹄疫正向間接血凝試驗的結(jié)果基本符合，試驗結(jié)果可靠。

３討論

（１）從上述檢測結(jié)果中可以看出，遠(yuǎn)安縣農(nóng)村散養(yǎng)戶中有一部分豬只免疫不合格，造成這種現(xiàn)象的原因可能與基層防疫員的技術(shù)水平、操作水平、疫苗用量及疫苗質(zhì)量等有關(guān)；也可能是廣泛存在的豬繁殖與呼吸障礙綜合征、豬圓環(huán)病毒感染而破壞了豬的免疫系統(tǒng)，造成免疫抑制。

（２）從操作方法上看，免疫金標(biāo)試紙檢測法操作簡便，更重要的是檢測時間短，能快速做出疾病診斷。而間接血凝試驗是通過紅血球凝集程度來判斷結(jié)果的，操作者的判斷能力不一樣，就很有可能出現(xiàn)不同的結(jié)果，即便同一操作者每次的試驗判斷結(jié)果都可能有一定的偏差。

（３）從經(jīng)濟成本上看，免疫金標(biāo)試紙檢測也能體現(xiàn)出一定的優(yōu)勢，既能批量檢測，也能單獨進行檢測，且不造成浪費。而間接血凝試驗所需抗原一經(jīng)開啟就必須一次用完，在檢測量較小的情況下就會造成很大的浪費。

４結(jié)論

綜上所述，豬口蹄疫抗體免疫金標(biāo)試紙檢測法具有操作簡便、結(jié)果直觀、反應(yīng)時間短等優(yōu)勢，非常符合遠(yuǎn)安縣的實際工作需要，鄉(xiāng)鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)服務(wù)中心及養(yǎng)殖場均可推廣應(yīng)用，對提高遠(yuǎn)安縣應(yīng)對重大動物疫病時的應(yīng)急反應(yīng)能力將起到舉足輕重的作用。