凌 真，董登存，李倚云，聞琍毓

(揚(yáng)州藥品檢驗(yàn)所，江蘇 揚(yáng)州 225009)

丹參(Salvia miltiorrhiza Bge.)為唇形科鼠尾草屬植物干燥的根及根莖，具有活血調(diào)經(jīng)、祛瘀止痛、涼血消癰、清心除煩和養(yǎng)血安神的功效，現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，丹參具有抗心肌缺血、腦缺血、血栓，改善微循環(huán)、促進(jìn)組織再生及抗菌、抗炎等作用［1］。丹參的有效成分主要分為水溶性和脂溶性，其中水溶性成分中活性較強(qiáng)的有丹酚酸B，是目前研究較多的丹參活性成分之一［2～5］。

目前，對(duì)于丹酚酸B的毒性研究方面的文章還較少，本文采用一次性尾靜脈注射的方法，考察丹酚酸B對(duì)小鼠的急性毒性作用，為后續(xù)研究作參考。

1 試驗(yàn)材料

1.1 受試物 丹酚酸 B原料，批號(hào):110620，含量:99.4%，淺黃褐色粉末，由上海醫(yī)藥工業(yè)研究院提供。臨用前用0.9%的氯化鈉注射液配制至所需濃度。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物 清潔級(jí)ICR小鼠(由揚(yáng)州大學(xué)比較醫(yī)學(xué)中心提供，生產(chǎn)許可證號(hào):SCXK(蘇)2007－0001)，體重18～21 g，數(shù)量70只，雌雄各半;小鼠雌雄分開(kāi)飼養(yǎng)于屏障環(huán)境內(nèi)(使用許可證號(hào):SYXK(蘇)2009－0006)，飼喂小鼠配合飼料(購(gòu)自南京安立默科技有限公司)，自由飲水和攝食。

1.3 儀器與試劑 CP225D電子分析天平(賽多利斯，德國(guó))，1mL一次性醫(yī)用注射器(江陰市醫(yī)療器械有限公司)，0.9%的氯化鈉注射液(江蘇亞邦藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司)。

2 方法與結(jié)果

2.1 預(yù)試驗(yàn) 探索丹酚酸B原料溶液對(duì)小鼠尾靜脈注射給藥的100%致死量(LD100)和0%致死量(LD0)。結(jié)果為丹酚酸B原料溶液的100%致死量為800mg·kg－1，0%致死量為500mg·kg－1。

2.2 正式試驗(yàn) 用丹酚酸B原料溶液作為供試液，按改良寇氏法［6］進(jìn)行LD50的測(cè)定。根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果確定正式實(shí)驗(yàn)，分為生理鹽水對(duì)照組和6個(gè)劑量組，為500、540、570、600、700和750mg·kg－1。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分為七組，每組10只，雌雄各半，根據(jù)預(yù)試驗(yàn)的結(jié)果設(shè)計(jì)給藥劑量，分組。

根據(jù)《中藥、天然藥物急性毒性研究技術(shù)指導(dǎo)原則》(以下簡(jiǎn)稱(chēng)《指導(dǎo)原則》)，給藥前，小鼠禁食12 h，自由飲水。實(shí)驗(yàn)采用尾靜脈單次注射給藥方式給藥，給藥容積為20mL·kg－1，給藥時(shí)間在30 s完成。4 h內(nèi)嚴(yán)密觀(guān)察，第2天起，每天觀(guān)察2次，連續(xù)觀(guān)察14 d，隔天稱(chēng)量動(dòng)物體重，記錄動(dòng)物的飲食、外觀(guān)、行為、分泌物、排泄物、毒性反應(yīng)和死亡情況。對(duì)瀕死及死亡動(dòng)物進(jìn)行大體解剖，其他動(dòng)物在觀(guān)察期結(jié)束后進(jìn)行大體解剖，肉眼觀(guān)察主要臟器的改變。統(tǒng)計(jì)各組小鼠的死亡數(shù)，計(jì)算LD50值和95%的可信限。

2.3 毒性反應(yīng) 給藥后，部分小鼠在20～30 s即出現(xiàn)活動(dòng)減少、呼吸急促、抽搐、震顫等癥，在注射30 s～2min內(nèi)死亡，極個(gè)別動(dòng)物在1～24 h內(nèi)出現(xiàn)死亡。將死亡小鼠進(jìn)行解剖，肉眼觀(guān)察小鼠的心、肝、脾、肺、腎等臟器，均未見(jiàn)異常改變。其余小鼠先出現(xiàn)活動(dòng)減少、呼吸急促等現(xiàn)象，但持續(xù)幾十秒至1 h后恢復(fù)。觀(guān)察14 d后，除750mg·kg－1組外，各劑量組存活動(dòng)物體重均有增長(zhǎng)，并與生理鹽水組基本一致，實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，存活小鼠頸椎脫臼處死，立即剖檢尸體，肉眼觀(guān)察小鼠的心、肝、脾、肺、腎等臟器，均未見(jiàn)異常改變;750mg·kg－1組的僅存活一只動(dòng)物，體重增加較大，腹腔有部分積液，可能為體重增長(zhǎng)較多的原因(見(jiàn)表1)。

表1 丹酚酸B靜脈注射小鼠的體重變化

2.4 LD50及LD50的95%可信限 根據(jù)動(dòng)物死亡數(shù)，用Bliss法計(jì)算半數(shù)致死量，LD50=636.8909mg·kg－1，LD50的 95%可信限為:617.2255 ～657.1828mg·kg－1(見(jiàn)表2)。

3 結(jié)論與討論

丹參是臨床防治動(dòng)脈粥樣硬化(AS)的常用藥物，含有多種有效成分，丹酚酸B是其多種有效成分中的一種，具有很強(qiáng)的抗氧化作用，是目前已知的抗氧化作用最強(qiáng)的天然產(chǎn)物之一，對(duì)心、腦、肝、腎等器官均具有重要的藥理作用，是目前研究較多的丹酚酸有效成分。

表2 Bliss法計(jì)算LD50值

關(guān)于丹酚酸B的急性毒性試驗(yàn)結(jié)果未見(jiàn)文獻(xiàn)報(bào)道，對(duì)丹酚酸B的毒性研究也較少。本文對(duì)丹酚酸B進(jìn)行了急性毒性試驗(yàn)，結(jié)果表明，實(shí)驗(yàn)小鼠尾靜脈注射過(guò)量的丹酚酸B后會(huì)出現(xiàn)一定的中毒現(xiàn)象，其半數(shù)致死量為636.8909mg·kg－1，LD50的 95% 可信限為 617.2255 ～ 657.1828mg·kg－1。生存的小鼠體重增加與生理鹽水組基本相同，將存活小鼠處死后，肉眼觀(guān)察未見(jiàn)主要臟器病理改變。以上結(jié)果顯示，丹酚酸B的毒性較低，臨床應(yīng)用比較安全。

由于對(duì)丹酚酸B的毒性研究未見(jiàn)報(bào)道，本文對(duì)丹酚酸B的急性毒性做了初步的研究，對(duì)丹酚酸B的進(jìn)一步研究、開(kāi)發(fā)和臨床的安全應(yīng)用提供一定的參考。

［1］王蓉，愿永芳.丹酚酸B藥理作用的研究概況［J］.中醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2011，17(4):130 －132.

［2］汪蕓.丹酚酸B對(duì)心腦血管疾病藥理作用的研究進(jìn)展［J］.現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志，2010，19(35):4634 －4637.

［3］林治榮，陳程，田登科，等.丹酚酸A與丹酚酸B抗大鼠心肌缺血再灌注損傷的比較研究［J］.時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2011，22(2):412 －414.

［4］Han X，Liu JX，LI XZ.Salvianolic acid B inhibits autophagy and protects starving cardiac myocytes［J］.Acta Pharmacol Sin，2011，32(1):38 －44.

［5］姜希娟，趙桂峰，盧斌，等.丹參單體對(duì)TNF－α誘導(dǎo)大鼠動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞MCP－1和IL－1β的影響［J］.中華現(xiàn)代中醫(yī)學(xué)雜志，2006，2(7):583 －586.

［6］徐叔云，卞如濂，陳修.藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)［M］.第2版.北京:人民衛(wèi)生出版社，1991:201.