黃際薇，張永明，黃亞非

(中山大學(xué)附屬第三醫(yī)院，廣東 廣州 510630)

喉咽靈口服液是我院自制生產(chǎn)的醫(yī)院制劑，由野菊花、威靈仙、地膽頭等組成，具有清熱解毒，軟堅(jiān)散結(jié)，益氣養(yǎng)陰等作用，用于治療氣管炎和急、慢性咽喉炎[1]。喉咽靈口服液的制備工藝：將上述藥材放入多功能提取罐中，加水浸過(guò)藥材，煎煮二次，每次1.5 h，合并煎煮液，濾過(guò)，減壓濃縮，加入白糖、苯甲酸鈉，煮沸30 min，冷卻至室溫后，加入回收的揮發(fā)油，用純化水加至總量，充分?jǐn)噭?，即得?/p>

喉咽靈口服液組方藥材野菊花揮發(fā)油有抗菌、抗病毒、抗炎、免疫抑制等作用，對(duì)金黃色葡萄球菌、肺炎雙球菌等均有較強(qiáng)的抑制作用，對(duì)大腸桿菌、白喉?xiàng)U菌、結(jié)核桿菌及白色念珠菌、白色葡萄球菌有一定的抑制作用，對(duì)枯草桿菌、變形桿菌、傷寒桿菌、酵母菌也有顯著的抑制作用[2-7]。威靈仙、野菊花揮發(fā)油成分的氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀(GC-MS)分析已有文獻(xiàn)報(bào)道[8-15]，而對(duì)于喉咽靈口服液揮發(fā)油的GC-MS分析則少有報(bào)道。為探討組方藥材揮發(fā)性成分在復(fù)方中的關(guān)聯(lián)性，尋找喉咽靈口服液治療氣管炎和咽喉炎的物質(zhì)基礎(chǔ)，本研究采用GC-MS聯(lián)用法對(duì)喉咽靈口服液以及方中野菊花、威靈仙的揮發(fā)油進(jìn)行比較分析，為進(jìn)一步研究喉咽靈口服液的物質(zhì)基礎(chǔ)與配伍機(jī)理奠定基礎(chǔ)。

1 儀器與試藥

Agilent 6890 N-5975 I氣質(zhì)聯(lián)用儀(Agilent 公司)；TC-15套式恒溫器(浙江新華醫(yī)療器械廠(chǎng))；電子天平(瑞士Precisa)；揮發(fā)油提取器(上海玻璃儀器廠(chǎng))。

威靈仙、地膽頭、野菊花購(gòu)自廣州市藥材公司，由廣州中醫(yī)藥大學(xué)唐紅梅教授鑒定。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱為HP-5H5毛細(xì)管色譜柱(30.0 m×0.25 mm×0.25 μm)；程序升溫：柱初始溫度60 ℃，保持3 min，以5 ℃·min-1的速度升溫至250 ℃，保持5 min；進(jìn)樣口溫度：250 ℃；載氣為高純氦氣，流量：1.0 mL·min-1；進(jìn)樣量：1 μL。

2.2 質(zhì)譜條件

離子源溫度：230 ℃，四極桿溫度：150 ℃，色譜-質(zhì)譜接口溫度：280 ℃；電離方式：EI；電子能量：70 eV；掃描范圍(m/z) 35 ～ 450。

2.3 藥材揮發(fā)油提取及處理

按中華人民共和國(guó)藥典2010年版附錄63揮發(fā)油測(cè)定法提取[16]。分別稱(chēng)取野菊花200 g、威靈仙400 g，用中藥粉碎機(jī)粉碎后，置1 L圓底燒瓶中，加一定量的水浸泡一段時(shí)間，用水蒸氣蒸餾法提取，收集蒸餾液，水層用氯化鈉飽和，用三氯甲烷萃取，萃取液經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥后，蒸去三氯甲烷，即得。

2.4 喉咽靈口服液揮發(fā)油

直接取喉咽靈口服液制備過(guò)程中產(chǎn)生的揮發(fā)油。

2.5 結(jié) 果

2.5.1 野菊花、威靈仙藥材的GC-MS分析 按上述實(shí)驗(yàn)方法和條件對(duì)喉咽靈口服液中富含揮發(fā)油的兩味藥材進(jìn)行分析，總離子流(TIC)圖見(jiàn)圖1。經(jīng)GC-MS檢測(cè)，所測(cè)成分的質(zhì)譜圖經(jīng)計(jì)算機(jī)質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫(kù)檢索，按各色譜峰的質(zhì)譜裂片圖與文獻(xiàn)核對(duì)，對(duì)基峰、質(zhì)荷比和相對(duì)豐度等進(jìn)行比較，并結(jié)合有關(guān)圖譜解析，分別對(duì)各色譜峰加以確認(rèn)，從而鑒定出其中的化學(xué)成分，采用面積歸一化法測(cè)得各組分的相對(duì)百分含量，分析鑒定結(jié)果見(jiàn)表1。

圖1 喉咽靈口服液揮發(fā)油(a)、野菊花揮發(fā)油(b)和威靈仙揮發(fā)油(c)總離子流圖

表1 喉咽靈口服液、野菊花和威靈仙揮發(fā)油GC-MS特征圖譜分析

續(xù)表1序號(hào) 化學(xué)成分分子式相對(duì)分子質(zhì)量w/％喉咽靈野菊花威靈仙371，3，4?Oxadiazol?2(3H)?one，5?(2，6?difluorophenyl)?3?[4?(trifluoromethyl)pyridin?2?yl]-C14H6F5N3O2343-1 24-38異戊酸對(duì)甲酚酯(p?cresylisovalerate)C12H16O2192-1 49-392-異丁基-3-甲基吡嗪(2?isobutyl?3?methylpyrazine)C9H14N2150-1 16-40Urea，1?(butoxycarbonyl)?3?(5?methylpyrid?2?yl)-C12H17N3O3251-1 82-41Heptasiloxane，1，1，3，3，5，5，7，7，9，9，11，11，13，13?tetradecamethyl-C14H44O6Si7505-1 14-42薄荷醇呋喃(benzofuran，4，5，6，7?tetrahydro?3，6?dimethyl-)C10H14O150-1 83-434?thiazolemethanol，2?(4?chlorophenyl)-C10H8ClNOS225-1 19-441-碘代十八烷(1?iodo?octadecane)C18H37I380-1 15-45Voachalotineoxindole，19，20?dihydro-C22H28N2O4384-0 94-46(3?Cyano?4?thiophen?2?yl-5，6，7，8-tetrahydro?quinolin?2?ylsulfa?nyl)?aceticacidmethylesterC17H16N2O2S2344-1 04-47Quinoline，4-[(2，4?dinitrophenyl)thio]-，1?oxideC15H9N3O5S343-1 28-48糠醛(furfural)C5H4O296--2 07492?cyclopentene?1，4?dioneC5H4O296--12 77501，3-環(huán)庚二烯(1，3?Cycloheptadiene)C7H1094--1 1351壬醛(1?Nonanal)C9H18O142--3 5352十二烷(Dodecane)C12H26170--3 0853反式-2-壬烯醛((E)?2?Nonenal)C9H16O140--1 63542-莰醇(L(?)?Borneol)C10H18O154-2 532 25556，6-二甲基二環(huán)[3 1 1]庚-2-烯-2-甲醛(6，6?dimethyl?bicy?clo(3 1 1)hept?2?ene?2?carboxaldehyd)C10H14O150--1 1156胡薄荷酮(pulegone)C10H16O152--1 5857草蒿腦(estragole)C10H12O148--1 9158十四烷(tetradecane)C14H30198--3 6359壬酸(nonanoicacid)C9H18O2158--1 3560十六烷(hexadecane)C16H34226--1 79613-苯基丙烯酸(3?phenylpropenoicacid)C9H8O2148--1 2762百秋李醇(patchoulialcohol)C15H26O222--1 42631，4?Dimethyl?8?isopropylidenetricyclo[5 3 0 0(4，10)]decaneC15H24204--1 18642，2′?Isopropylidenebis(5?methylfuran)C13H16O2204--7 64658?MethylheptadecaneC18H38254--1 11662(1H)Naphthalenone，3，5，6，7，8，8a?hexahydro-4，8a?dim?ethyl?6?(L?methylethenyl)-C15H22O218--1 5267Trichloroaceticacid，hexadecylesterC18H33Cl3O2387--2 2168棕櫚酸乙酯(ethylhexadecanoate)C18H36O2284--1 3769十六烷酸(n?Hexadecanoicacid)C16H32O2256--20 6570亞油酸乙酯(9，12-Octadecadienoicacidethylester)C20H36O2308--2 2471亞油酸((Z，Z)-9，12?Octadecadienoicacid)C18H32O2280--6 21

3 討 論

本研究測(cè)定了喉咽靈口服液與方中野菊花和威靈仙揮發(fā)油的化學(xué)成分，共鑒定出71種成分，有1個(gè)共有成分樟腦，喉咽靈口服液24個(gè)成分，占其揮發(fā)油總量的98.14％；野菊花34個(gè)成分，占其揮發(fā)油總量的81.95％；威靈仙27個(gè)成分，占其揮發(fā)油總量的93.64％；喉咽靈口服液與野菊花有10個(gè)相同成分，喉咽靈口服液與威靈仙有2個(gè)相同成分，各成分含量相差很大。表明喉咽靈口服液的揮發(fā)油主要來(lái)自野菊花，喉咽靈口服液與方中野菊花和威靈仙揮發(fā)油的化學(xué)成分及含量不是兩個(gè)單味藥揮發(fā)油主要成分之加和,而是存在著很大的差別，這些差別的產(chǎn)生可能是由于中藥方劑在配伍合煮時(shí)發(fā)生了復(fù)雜的化學(xué)反應(yīng)與物理變化[17-18]，加之中藥化學(xué)成分本身的復(fù)雜性，各種化學(xué)成分之間既可能因?yàn)橹堋⒃鋈?、吸附、沉淀等而改變某種成分的溶出率，亦可能在溶液中發(fā)生固有物質(zhì)間的絡(luò)合、水解、聚合、解離、氧化或還原反應(yīng)，從而生成原來(lái)沒(méi)有的某些新物質(zhì)[19]。

通過(guò)對(duì)喉咽靈口服液揮發(fā)性成分的研究，為進(jìn)一步研究喉咽靈口服液的物質(zhì)基礎(chǔ)與配伍機(jī)理奠定了基礎(chǔ)。喉咽靈口服液全方藥材在前煮過(guò)程中所發(fā)生的復(fù)雜的物理變化與化學(xué)反應(yīng)有待進(jìn)一步深入研究；喉咽靈口服液揮發(fā)油中新成分的出現(xiàn)及單一組方個(gè)別成分大量的增加或減少所帶來(lái)的藥理作用也有待進(jìn)一步深入研究。

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