李 潔, 王揚(yáng)天, 彭 麗, 王 堅(jiān), 馮曉云, 劉志民

（1第二軍醫(yī)大學(xué)南京臨床醫(yī)學(xué)院內(nèi)分泌科, 南京 210002; 2第二軍醫(yī)大學(xué)附屬長(zhǎng)征醫(yī)院內(nèi)分泌科，上海 200003）

2型糖尿病是一種低度慢性、亞臨床性和非特異性的炎癥狀態(tài)[1-3]。研究發(fā)現(xiàn)，2型糖尿病患者血清中白細(xì)胞介素 6（interleukin-6，IL-6）、腫瘤壞死因子α（tumor necrosis factorα，TNF-α)、髓過(guò)氧化物酶（myeloperoxidase，MPO）、超敏C反應(yīng)蛋白（high sensitive-C reactive protein, hs-CRP）等炎癥標(biāo)志物水平增高，而這些炎癥因子的變化對(duì)評(píng)估預(yù)測(cè)糖尿病發(fā)生發(fā)展、并發(fā)癥的嚴(yán)重程度和臨床治療效果具有重要的參考價(jià)值[4-6]。前列環(huán)素是1976年發(fā)現(xiàn)的一種主要由血管內(nèi)皮細(xì)胞中產(chǎn)生的物質(zhì)，它是花生四烯酸的代謝產(chǎn)物，具有強(qiáng)烈的抗血小板和血管擴(kuò)張作用，但前列環(huán)素有化學(xué)性質(zhì)極不穩(wěn)定、半衰期短、口服給藥效果差等缺點(diǎn)。貝前列素鈉避免了上述不足，是全球首個(gè)口服給藥的前列環(huán)素前體藥物[7,8]。本研究擬觀察貝前列素鈉對(duì)糖尿病大鼠炎癥因子的影響及抗炎癥作用，以期為臨床應(yīng)用提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物模型和分組

雄性健康無(wú)特定病原體(SPF)級(jí) Sprague-Dawley（SD）大鼠，體質(zhì)量（160±109）g，60只，購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院上海實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。實(shí)驗(yàn)分以下 3組：（1）正常對(duì)照組10只。（2） 糖尿病組和貝前列素鈉組大鼠給予高脂飼料，喂養(yǎng)4周，誘發(fā)出胰島素抵抗模型后一次性給予鏈脲佐菌素 30 mg/kg腹腔注射；血糖穩(wěn)定 1周后測(cè)得 2次隨機(jī)血糖≥16.7 mmol/L，2型糖尿病造模成功。（3）貝前列素鈉組， 10只糖尿病大鼠，按照0.6mg/（kg·d）每日 9∶00灌胃給藥，最終納入實(shí)驗(yàn)各組 6只（主要由于高血糖酮癥、灌胃所致死亡）。

1.2 實(shí)驗(yàn)試劑

貝前列素鈉（德納，安斯泰來(lái)制藥贈(zèng)送），IL-6、TNF-α、MPO、hs-CRP試劑盒購(gòu)于南京建成生物工程研究所。

1.3 標(biāo)本采集方法

給藥8周后處死大鼠，處死前，以 4 mg/kg的10%水合氯醛腹腔注射麻醉，麻醉后腹主動(dòng)脈采血，10 000 r/min離心15min，離心后取上清液檢測(cè)IL-6,TNF-α，MPO，hs-CRP水平，嚴(yán)格按照試劑盒操作說(shuō)明書檢測(cè)。

1.4 觀察指標(biāo)的檢測(cè)

應(yīng)用酶聯(lián)免疫分析雙抗體夾心法（ELISA）檢測(cè)大鼠IL-6、hs-CRP、TNF-α水平，應(yīng)用比色法檢測(cè)MPO。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

所有計(jì)量資料采用±s表示，采用 SPSS 13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，多組間均數(shù)比較采用單因素方差分析, 兩兩比較采用LSD 檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

2.1 一般狀態(tài)與模型評(píng)價(jià)

正常對(duì)照組大鼠表現(xiàn)為飲食、飲水及活動(dòng)正常，毛色光亮，體質(zhì)量增長(zhǎng)迅速；糖尿病組大鼠出現(xiàn)顯著的多飲、多尿、多食，毛色凌亂無(wú)光澤，精神較萎靡、不活潑，體質(zhì)量增長(zhǎng)緩慢；貝前列素鈉組大鼠較糖尿病組精神好，毛色干凈，反應(yīng)靈敏、好斗。

2.2 三組大鼠炎癥因子比較

表1結(jié)果表明，與正常對(duì)照組比較，糖尿病組大鼠IL-6, TNF-α，MPO，hs-CRP顯著升高（P＜0.01）。貝前列素鈉干預(yù)8周后，IL-6, TNF-α, MPO，hs-CRP明顯下降（P＜0.05，P＜0.01）。

表1 3組大鼠炎癥因子(IL-6, hs-CRP, TNF-α, MPO)指標(biāo)比較Table 1 Comparison of IL-6, hs-CRP, TNF-α and MPO between three groups (n＝6,±s)

表1 3組大鼠炎癥因子(IL-6, hs-CRP, TNF-α, MPO)指標(biāo)比較Table 1 Comparison of IL-6, hs-CRP, TNF-α and MPO between three groups (n＝6,±s)

注: IL-6: 白細(xì)胞介素-6; hs-CRP: 超敏C反應(yīng)蛋白; TNF-α: 腫瘤壞死因子α; MPO: 髓過(guò)氧化物酶。與正常對(duì)照組比較, *P＜0.05,**P＜0.01; 與糖尿病組比較, #P＜0.05, ##P＜0.01

組別 IL-6(ng/L) hs-CRP(μg/L) TNF-α(ng/L) MPO(U/L)正常對(duì)照組 27.4±1.1 1.78±0.28 44±3 25±13糖尿病組 51.8±4.2** 2.44±0.09** 88±7** 163±23**貝前列素鈉組 46.4±5.1**# 2.05±0.14*## 69±5**## 119±28**##

3 討 論

糖尿病已成了危害人類健康的最大兇手之一，許多相關(guān)文獻(xiàn)闡明，糖尿病及其血管病變是炎癥性疾病，這種炎癥反應(yīng)被認(rèn)為是一種亞臨床炎癥，是處在感染性和自身免疫性炎癥水平以下的炎癥，這種炎癥反應(yīng)進(jìn)一步導(dǎo)致胰島素抵抗、胰島β細(xì)胞損傷和血管內(nèi)皮細(xì)胞功能紊亂，從而對(duì)糖尿病及其慢性血管并發(fā)癥的發(fā)生發(fā)展起著重要作用。血管活性物質(zhì)如貝前列素鈉可對(duì)糖尿病并發(fā)癥產(chǎn)生有益的影響[9]

近年研究表明，促炎癥因子在2型糖尿病及其并發(fā)癥動(dòng)脈粥樣硬化（artherosclerosis，AS）相關(guān)疾病的發(fā)病機(jī)制中起十分重要的作用[10,11]。內(nèi)臟脂肪細(xì)胞會(huì)產(chǎn)生多種促炎癥因子，啟動(dòng)胰島素抵抗（IR），并使肝臟合成CRP，CRP是主要由肝臟產(chǎn)生的一種急性時(shí)相反應(yīng)蛋白，主要受脂肪細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子如IL-6、TNF-α的調(diào)節(jié)。CRP是AS炎癥反應(yīng)的主要標(biāo)志物。在眾多促炎癥因子中， TNF-α還能誘導(dǎo) IL-6、前列腺素等其他促炎癥因子的合成和分泌[12]。MPO是活化的中性粒細(xì)胞分泌的過(guò)氧化物酶類，研究證實(shí)，MPO與炎癥及心血管疾病有關(guān)，能加速內(nèi)皮功能不全，促進(jìn)血小板聚集和血栓形成，加速易損斑塊的形成和破裂[13,14]；同時(shí)，還促進(jìn)膽固醇在血管壁的沉積，破壞高密度脂蛋白膽固醇的轉(zhuǎn)運(yùn)作用[15]。

在本研究中2型糖尿病大鼠表現(xiàn)為肥胖、多飲、多食等特征。給予貝前列素鈉進(jìn)行干預(yù)治療，大鼠多飲、多食癥狀有所改善，本研究全面觀察了各組大鼠炎癥因子指標(biāo)，包括 IL-6、TNF-α、MPO、hs-CRP。研究發(fā)現(xiàn)與對(duì)照組相比，糖尿病組大鼠IL-6、hs-CRP、TNF-α、MPO水平顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），提示2型糖尿病機(jī)體炎癥因子生成增加，炎癥損傷嚴(yán)重。貝前列素鈉組與糖尿病組大鼠比較，IL-6、hs-CRP、TNF-α、MPO水平降低明顯（P＜0.05，P＜0.01）。研究提示貝前列素鈉可抑制炎癥因子生成，改善血管內(nèi)皮功能，延緩糖尿病血管病變的發(fā)生。貝前列素鈉是一種新型的具有穩(wěn)定活性的前列環(huán)素類似物，具有抗血小板和促進(jìn)血管擴(kuò)張的特性，口服進(jìn)入體內(nèi)后，其藥理作用和前列環(huán)素完全相同，而且避免了靜脈應(yīng)用時(shí)血壓降低的不良反應(yīng)，更易為患者接受，便于長(zhǎng)期服用。本研究證實(shí)貝前列素鈉具有顯著的抗炎作用，為臨床上對(duì)2型糖尿病慢性炎癥損傷的治療提供了新的思路。

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