(河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院，石家莊050011)

研究［1，2］證實(shí)，視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤(RB)的發(fā)生和發(fā)展是多基因參與、多階段變化的復(fù)雜過程。Livin是近幾年從人類基因組庫中篩選克隆出來的一種新的蛋白質(zhì)，其在一些腫瘤中高表達(dá)［3，4］。PTEN是第一個(gè)被發(fā)現(xiàn)的具有磷酸酶活性的抑癌基因，存在于多種正常組織，但在惡性腫瘤中表達(dá)明顯異常［5］。2011年2～9月，我們觀察了RB組織中Livin、PTEN蛋白的表達(dá)變化，并探討其臨床意義。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 RB患兒43例(RB組)，男23例，女20例;年齡9個(gè)月～8歲，平均3.35歲;臨床分期為眼內(nèi)生長(zhǎng)期21例，青光眼期13例，眼外擴(kuò)展期9例;術(shù)前患者均未進(jìn)行放化療，均行手術(shù)治療。術(shù)中切除癌組織標(biāo)本，均經(jīng)福爾馬林固定，自動(dòng)脫水，浸蠟，包埋，切片;術(shù)后病理檢查證實(shí)為RB，組織分化程度為未分化型24例、分化型19例。對(duì)照組視網(wǎng)膜組織切片34例，均來自外傷后眼球摘除患兒。兩組患兒性別、年齡具有可比性。

1.2 Livin、PTEN檢測(cè)方法 采用 Max-VisionTM快捷免疫組化法，按說明書操作。以已知的陽性切片作陽性對(duì)照，以PBS代替一抗作陰性對(duì)照。結(jié)果判定:Livin表達(dá)主要位于細(xì)胞質(zhì)，PTEN表達(dá)主要位于細(xì)胞核，以出現(xiàn)清晰的棕黃色顆粒作為陽性細(xì)胞判定。每張切片隨機(jī)選取10個(gè)不同高倍視野，各計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞。陽性細(xì)胞所占百分比≤5%計(jì)0分，6% ～25%計(jì)1分，26% ～50%計(jì)2分，51% ～75%計(jì)3分，＞75%計(jì)4分;無著色為0分，淺黃色為1分，棕黃色為2分，深棕褐色為3分。上述兩項(xiàng)相加＜2分為陰性表達(dá)，≥2分判為陽性表達(dá)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)軟件。數(shù)據(jù)比較用χ2檢驗(yàn)或Fisher確切概率法。P≤0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

RB組中 Livin、PTEN陽性表達(dá)分別為27例(62.79%)、20 例(46.51%)，顯著高于對(duì)照組的 7例(20.59%)、31 例(91.18%)，P 均 ＜0.05。Livin、PTEN表達(dá)與RB臨床病理參數(shù)的關(guān)系見表1。由表1可見，Livin表達(dá)與RB的分化程度有關(guān)(P＜0.05)，PTEN表達(dá)與RB的分化程度及臨床分期有關(guān)(P 均 ＜0.05)。

表1 Livin、PTEN表達(dá)與RB臨床病理參數(shù)的關(guān)系(例)

3 討論

Livin又名 KIAP/ML-IAP，2000年由科學(xué)家在人基因組庫中篩選克隆出的一種新型、有較強(qiáng)抗凋亡功能的凋亡抑制蛋白(IAPs)家族新成員，能夠與凋亡蛋白酶結(jié)合，抑制其介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡［6］。本研究中，Livin在RB組織中的表達(dá)明顯高于正常視網(wǎng)膜組織(P＜0.05)，提示 Livin的異常表達(dá)可能與RB的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)。Livin的陽性表達(dá)與RB的組織分化程度有關(guān)，提示Livin表達(dá)可能與RB的惡性程度有關(guān)，可能是預(yù)后不良的指征。

PTEN是第一個(gè)被發(fā)現(xiàn)的具有磷酸酶活性的抑癌基因，存在于多種正常組織，但在惡性腫瘤中PTEN的表達(dá)明顯異常。PTEN也是惟一能使脂類去磷酸化的抑癌基因，與多種細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的因子有關(guān)，不僅參與細(xì)胞周期的調(diào)控，還能調(diào)控細(xì)胞的生長(zhǎng)、凋亡、移動(dòng)及信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)等，參與腫瘤的發(fā)生與發(fā)展，是人類腫瘤中最易發(fā)生突變的抑癌基因之一。關(guān)于PTEN與惡性腫瘤的關(guān)系，各家報(bào)道不一［7，8］。本研究中，PTEN 蛋白在 RB 中表達(dá)與正常對(duì)照者比較明顯降低(P＜0.05)，提示PTEN對(duì)RB的發(fā)生有抑制作用，PTEN的缺失或失活在RB的發(fā)病中發(fā)揮了重要作用。本研究還發(fā)現(xiàn)，PTEN與RB的分化、臨床分期有關(guān)(P＜0.05)。PTEN阻滯PI3K/AKT通路，導(dǎo)致G1期停滯，抑制細(xì)胞生長(zhǎng)，這是PTEN作用機(jī)制中最經(jīng)典的途徑。當(dāng)PTEN在組織中的表達(dá)下調(diào)或缺失時(shí)，其對(duì)PI3K/AKT通路的抑制作用即減弱或消失，可導(dǎo)致AKT磷酸化，引起下游Livin基因的表達(dá)上調(diào)，隨即啟動(dòng)一系列反應(yīng)，從而抑制腫瘤細(xì)胞的凋亡［9］。這也提示，RB組織中Livin的激活與PTEN的失活或缺失之間可能存在相互協(xié)同作用，共同參與了RB的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移及浸潤(rùn)，提示RB的形成是多基因、多因素共同作用的結(jié)果。

［1］彭輝燦，何湘珍，夏旭光.p16、p21、p53和 PCNA在視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤中的表達(dá)［J］.眼科新進(jìn)展，2002，22(4):242-244.

［2］應(yīng)方微，李永平，唐松，等.抗視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤細(xì)胞株SO-Rb50單克隆抗體相應(yīng)抗原的提?。跩］.中華眼底病雜志，2003，19(3):152-155.

［3］Yagihashi A，Asanuma K，Tsuji N，et al.Detection of anti-Livin antibody in gastrointestinal cancer patients［J］.Clin Chem，2003，49(7):1206-1208.

［4］Chen L，Ren GS，Li F，et al.Expression of Livin and vascular endothelial growth factor in different clinical stages of human esophageal carcinoma［J］.World J Gastroenterol，2008，14(37):5749-5754.

［5］Olaussen KA，Soria JC，Morat L，etal.Loss of PTEN expression is not uncommon，but lacks prognostic value in stage Ⅰ NSCLC［J］.Anticancer Res，2003，23(6C):4885-4890.

［6］Vucic D，Deshayes K，Ackerly H，etal.SMAC negatively regulates the anti-apoptotic activity ofmelanoma inhibitor of apoptosis(MLIAP)［J］.JBiol Chem，2002，277(14):12275-12279.

［7］Goncharuk VN，del-Rosario A，Kren L，etal.Co-downregulation of PTEN，KAI-1，and nm23-H1 tumor/metastasis suppressor proteins in non-small cell lung cancer［J］.Ann Diagn Pathol，2004，8(1):6-16.

［8］Wan XW，Jiang M，Cao HF，et al.The alteration of PTEN tumor suppressor expression and itsassociation with the histopatholocal features of human primary hepatocellular carcinoma［J］.Cancer Res Clin Oncol，2003，129(2):100-106.

［9］Chalhoub N，Zhu G，Zhu X，et al.Cell type specificity of PI3K signaling in Pdk1-and PTEN-deficient brains［J］.Genes ＆ Dev，2009，23(14):1619-1624.