羅 莉，陳榮潔，丁艷芬，楊崇仁，3△

(1.云南維和藥業(yè)股份有限公司，云南玉溪 653100;2.云南省植物提取物工程研究中心，云南玉溪 653100;3.中國科學院昆明植物研究所，云南昆明 650201)

三 七 ［Panaxnotoginseng(Burk.)F.H.Chen］是我國名貴中藥材，也是云南重要的特色藥物植物資源［1］。三七有散瘀止血、消腫定痛的功效［2］，大量的藥理藥效及臨床研究表明三七有多方面的生理功能，已廣泛用于治療冠心病、心絞痛、腦血管后遺癥等疾病［3］。云南文山是三七道地產(chǎn)區(qū)［4］，歷史上曾在長江以南省區(qū)引種［5］。隨著市場需求的增加，三七種植面積和種植區(qū)域不斷擴大，2010年，云南省三七種植面積約12萬畝，其中，5萬多畝種植在文山州以外的地區(qū)。三七一般均需3年收獲，種植過程中各種病害嚴重，目前，大量使用各種農(nóng)藥甚至是禁用的劇毒農(nóng)藥，給臨床藥材應用帶來極大風險。因此，開展三七藥材農(nóng)藥分析檢測方法及使用情況分析，對三七產(chǎn)業(yè)健康持續(xù)發(fā)展意義重大。

本文建立了有機磷農(nóng)藥殘留［6］的多成分GCFPD分析方法［7］，對云南省不同產(chǎn)地的三七進行分析和比較。

1 儀器、試劑與材料

1.1 儀器與試劑

儀器:Agilent 6890N氣相色譜儀，配有FPD檢測器。超純水系統(tǒng) (MILLIPORE)。

試藥試劑:分析純乙酸乙酯 (天津化工廠)、無水硫酸鈉。

農(nóng)藥對照品:對硫磷、甲基對硫磷、樂果、氧化樂果、甲胺磷、久效磷、二嗪農(nóng)、乙硫磷、馬拉硫磷、殺撲磷、敵敵畏、乙酰甲胺磷 (農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護科研監(jiān)測所)。

1.2 測試植物樣品

3年生三七，地上部位;地下部位分為大根、主根、剪口，分別晾干，粉碎，待用。樣品分別采自云南省文山州、云南省紅河州彌勒縣和瀘西縣。鑒定人:楊崇仁教授。

2 實驗方法

2.1 儀器及工作條件［8］

GC－FPD，GC:Agilent 6890N;色譜柱:HP－5 MS，30m×0.25mm×0.25μm，進樣方式:分流進樣;進樣量1μL;進樣口溫度230℃;檢測器溫度280℃;程序升溫:初始溫度80℃，10℃ min－1升至200℃，20℃ min－1升至250℃，保持10min。

2.2 對照品儲備液的制備

取對硫磷、甲基對硫磷、樂果、氧化樂果、甲胺磷、久效磷、二嗪農(nóng)、乙硫磷、馬拉硫磷、殺撲磷、敵敵畏、乙酰甲胺磷等12種有機磷農(nóng)藥對照品適量，用乙酸乙酯分別制成每1mL約含100μg的溶液，即得。

2.3 混合對照品儲備液的制備

精密量取上述各對照品儲備液1mL，置20mL棕色量瓶中，加乙酸乙酯稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.4 供試品溶液的制備

取本品粉末 (過二號篩)約5g，精密稱定，加無水硫酸鈉5g，加入乙酸乙酯50～100mL，冰浴超聲處理3min，放置，取上層液濾過，藥渣加入乙酸乙酯30～50mL，冰浴處理2min，放置，濾過，合并兩次濾液，用少量乙酸乙酯洗滌濾紙及濾渣，與上述濾液合并。取濾液于40℃下減壓濃縮至近干，用乙酸乙酯轉移至5mL量瓶中，并稀釋至刻度，精密量取1mL，置活性炭小柱 ［120～40目，0.25g，內徑 0.9cm(如 Supelclean ENVICarb SPE Tubes，3mL活性炭小柱)，用乙酸乙酯5mL預洗］上，置多功能真空樣品處理器上，用正己烷－乙酸乙酯 (1∶1)混合溶液5mL洗脫，收集洗脫液，置氮吹儀上濃縮至近干，精密加入乙酸乙酯1mL使溶解，即得。

2.5 測定法

分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各1 μl，注入氣相色譜儀，測定，即得。

3 結果與討論

本項研究參照《中國藥典》2010年版一部附錄IXQ農(nóng)藥殘留量測定法，建立了12種有機磷農(nóng)藥殘留量同時測定的方法 (表1)。理論板數(shù)按敵敵畏峰計算大于6000，相鄰色譜峰的分離度大于1.5。12種有機磷農(nóng)藥混合對照圖譜如圖1。該法分離度高，重現(xiàn)性好，操作方便，不僅可作為三七等中藥材的有機磷農(nóng)藥殘留量測定，也適于農(nóng)作物及其產(chǎn)品的有機磷農(nóng)藥殘留量檢測。

按本方法檢測的結果表明，從三七中檢出3種有機磷農(nóng)藥殘留，即二嗪農(nóng)、馬拉硫磷和對硫磷。在瀘西和彌勒的莖葉中檢測出二嗪農(nóng)，殘留量為0.13mg/kg;在文山大根中檢測出馬拉硫磷，殘留量為0.03mg/kg;在文山和瀘西的三七中均檢出對硫磷，且瀘西莖葉的殘留量高達0.58mg/kg(表2)。

農(nóng)藥殘留一般與施肥方式、農(nóng)藥性質、施肥部位、天氣條件、環(huán)境條件相關，因此，各地三七的農(nóng)藥殘留有明顯的差異。

大部分中藥材在栽培過程中均需施用大量農(nóng)藥，但農(nóng)藥殘留在藥材中的監(jiān)管很少，這是個普遍問題，因此，不僅是三七，所有栽培中藥材農(nóng)藥殘留監(jiān)管均需重視并制定相應控制標準 (日本肯定列表可作參考)。

目前，我國已制定了一些農(nóng)藥在部分農(nóng)產(chǎn)品中農(nóng)藥最大殘留限量 (MRL)的國家標準。其中規(guī)定二嗪農(nóng)允許殘留量最大的是在花生中不得過0.5mg/kg;馬拉硫磷允許殘留最大的是在原糧、大豆、葡萄中不得過8mg/kg;規(guī)定了在蔬菜、水果中不得使用對硫磷，允許殘留量最大的是在原糧、棉籽油中不得過0.1mg/kg;雖國家未規(guī)定上述3種農(nóng)藥在三七中的最大殘留量，但本文通過分析，瀘西莖葉的對硫磷殘留量高達0.58mg/kg，顯然，為了保證藥材的安全性，三七的農(nóng)藥殘留應引起必要的重視。

表2 樣品有機磷農(nóng)藥殘留量測定結果

［1］鄭光植，楊崇仁.三七——生物學及其應用 ［M］.昆明:云南科技出版社，1994.

［2］魏均嫻，杜元沖.三七現(xiàn)代科學與應用 ［M］.昆明:云南科技出版社，1996.

［3］中國藥典委員會.中華人民共和國藥典 ［M］.北京:北京科技出版社，2000.

［4］王淑琴，葉洪軍.官艇锏.中國三七 ［M］.昆明:云南民族出版社，1992.

［5］董弗兆，劉祖武.樂麗濤.云南三七 ［M］.昆明:云南科技出版社，1988.

［6］龔耀剛，王興文，程莉，等.水提三七有效部位重金屬及農(nóng)藥殘留的研究 ［J］.云南中醫(yī)學院學報，2004，27(4):11－13.

［7］王江，賈建章，劉辰，等.GC－FPD快速分析法測定蔬菜水果中25種有機磷農(nóng)藥殘留量 ［J］.中國衛(wèi)生檢驗雜志，2009，(10):2251－2253.

［8］中國藥典委員會.中華人民共和國藥典 ［M］.北京:北京科技出版社，2010.