王景翔，于宏偉，曹德英，李濤，黃瑞彬（.石家莊學(xué)院化工學(xué)院，石家莊050035；.河北醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，石家莊 05007）

鹽酸氟桂利嗪（Flunarizine hydrochloride，F(xiàn)H）為選擇性的鈣通道阻滯藥，對血管平滑肌有擴(kuò)張作用，能顯著地改善腦循環(huán)和冠脈循環(huán)，并能預(yù)防血管的脆化性。臨床常用于腦血栓形成、腦栓塞、腦動(dòng)脈硬化、腦出血恢復(fù)期、腦外傷后遺癥、內(nèi)耳眩暈癥、冠狀動(dòng)脈硬化等疾病的預(yù)防和治療[1，2]；其制成口腔崩解片后，不用水或用極少量水就可將藥物服下[3]，尤其適宜于腦血管疾病急性發(fā)作期及老年患者的服用。為制定該制劑的儲存條件和有效期，筆者研究了FH口腔崩解片的穩(wěn)定性。

1 儀器與試藥

FA-2104B電子天平（上海精密科學(xué)儀器有限公司）；DK-98-1型電熱恒溫水浴鍋、101-2型電熱鼓風(fēng)干燥箱（天津市泰斯特儀器有限公司）；YB-Ⅱ澄明度檢測儀（天津光學(xué)儀器有限公司）；LHS-100HC恒溫恒濕培養(yǎng)箱（嘉興中新醫(yī)療儀器有限公司）；SPD-10A高效液相色譜（HPLC）儀（日本島津株式會社）；N2010色譜工作站（浙江大學(xué)）。

FH對照品（石家莊華新制藥廠，批號：070216，純度：99.62%）；FH口腔崩解片（石家莊學(xué)院化學(xué)實(shí)驗(yàn)中心藥物制劑實(shí)驗(yàn)室制備，批號：080901、080902、080903，規(guī)格：每片5 mg）；甲醇為色譜純，其他試劑均為分析純，水為高純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 崩解時(shí)限測定

依據(jù)國家藥品評審中心發(fā)布的《口腔崩解片的劑型特點(diǎn)和質(zhì)量控制會議紀(jì)要》（2003年9月）[4]的規(guī)定，取10 mL比色試管6支，內(nèi)置26目工業(yè)篩網(wǎng)制成的篩籃，加入2 mL水，置于（37±0.5）℃恒溫水浴中保溫2 min，使試管內(nèi)外溫度平衡；取樣品6片，每支試管中放入1片，采用靜態(tài)法測定崩解時(shí)限。以片劑接觸水面開始記時(shí)，至全部崩散為完全崩解，篩網(wǎng)上應(yīng)無大顆粒殘留，用秒表記錄崩解時(shí)限，取平均值即為測定結(jié)果，測定3批樣品，崩解時(shí)限分別為18.9、19.6、18.2 s，均符合≤1 min的規(guī)定要求。

2.2 含量測定

2.2.1 色譜條件。色譜柱：Shimadzu ODS C18（150 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：甲醇-磷酸二氫鉀溶液（0.01 mol·L－1，pH＝3.5）＝68∶32，流速：1.0 mL·min－1；檢測波長：254 nm；柱溫：30 ℃；進(jìn)樣量：20 μL。

2.2.2 對照品溶液制備。精密稱取于105℃干燥至恒重的FH對照品60 mg，置于50 mL容量瓶中，加入乙醇10 mL溶解后，加鹽酸溶液（稀鹽酸24 mL加水至1 000 mL）稀釋至刻度，搖勻，得對照品儲備液；精密吸取儲備液1 mL，置于100 mL容量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，得濃度為12 μg·mL－1對照品溶液。

2.2.3 供試品溶液制備。取FH口腔崩解片20片，精密稱定，研細(xì)；精密稱取細(xì)粉適量（約相當(dāng)于FH 12 mg）置于100 mL容量瓶中，加乙醇10 mL溶解后加鹽酸溶液稀釋至刻度，搖勻，用0.45 μm濾膜濾過；再精密量取續(xù)濾液5 mL，置于50 mL容量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，得供試品溶液。

2.2.4 干擾試驗(yàn)。稱取處方量輔料適量，照“2.2.3”項(xiàng)下方法制備成輔料溶液。取輔料溶液和對照品、供試品溶液進(jìn)樣測定，結(jié)果輔料對主峰無干擾；供試品與對照品溶液中主峰保留時(shí)間一致，無雜峰，色譜詳見圖1。

圖1 高效液相色譜圖A.對照品；B.供試品；C.輔料；1.FH Fig 1 HPLC chromatogramsA.substance control；B.test sample；C.excipient；1.FH

2.2.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線制備。精密吸取對照品儲備液0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2 mL分別置于25 mL容量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻；依“2.1.1”項(xiàng)下色譜條件，各取20 μL進(jìn)樣；以峰面積（A）對濃度（c）進(jìn)行回歸分析，得回歸方程A＝31 250.67c－1 547.37（r＝0.999 9）；表明FH檢測濃度線性范圍為4.8～57.6 μg·mL－1。

2.2.6 回收率試驗(yàn)。精密稱取FH對照品約4、5、6 mg各3份，按處方量加入相應(yīng)的輔料，分別按“2.2.3”項(xiàng)下制備高、中、低（38.4、28.8、19.23 μg·mL－1）3個(gè)濃度的溶液，分別測定，計(jì)算回收率分別為99.26%、100.28%、101.27%，RSD分別為0.97%、1.26%、1.49%。

2.2.7 精密度試驗(yàn)。取“2.2.6”項(xiàng)下高、中、低3個(gè)濃度的溶液，在同日內(nèi)不同時(shí)間測定5次，計(jì)算日內(nèi)RSD分別為0.85%、0.93%、1.06%；每天測定1次，連續(xù)測定5 d，計(jì)算日間RSD分別為1.21%、1.35%、1.59%。結(jié)果表明本方法精密度較好。

2.2.8 樣品含量測定。將樣品按“2.2.3”項(xiàng)下方法制備成供試品溶液，精密吸取20 μL注入色譜儀，記錄峰面積；另取對照品溶液同法測定。依外標(biāo)法以峰面積計(jì)算FH的含量，以C26H26F2N2計(jì)，含量（標(biāo)示量）應(yīng)在90%～110%之間。測定3批樣品，含量分別為100.62%、101.53%和99.97%。

2.3 有關(guān)物質(zhì)檢查

2.3.1 供試溶液制備。取FH口腔崩解片20片，研細(xì)，精密稱取細(xì)粉適量（約相當(dāng)于FH 10 mg）置于100 mL容量瓶中，加乙醇10 mL溶解后加鹽酸溶液稀釋至刻度，搖勻，制成每1 mL含100 μg FH的溶液，濾過，續(xù)濾液作為供試溶液。

2.3.2 對照溶液制備。精密吸取上述供試溶液1 mL，置于100 mL容量瓶中，加鹽酸溶液稀釋至刻度，搖勻，制成每1 mL含1 μg FH的溶液，作為對照溶液。

2.3.3 方法專屬性考察。取3份供試溶液各10 mL，分別滴加6 mol·L－1的鹽酸、2 mol·L－1的氫氧化鈉溶液和30%的雙氧水各2滴，振搖，室溫放置20 min，過濾，取續(xù)濾液20 μL注入色譜儀，記錄色譜。另取2份供試溶液各10 mL，置于稱量瓶中，密塞，其中1份置于溫度為105℃的烘箱中加熱4 h，取出后放至室溫；另1份置于照度為（4 500±500）lx的澄明度檢測儀中放置1 d，過濾，同法測定，記錄色譜，見圖2。

圖2 破壞性試驗(yàn)色譜圖A.酸破壞樣品；B.堿破壞樣品；C.氧化破壞樣品；D.高溫破壞樣品；E.光照破壞樣品；1.FHFig 2 HPLC chromatogram of destructive testA.destroyed by acid；B.destroyed by alkalization；C.destroyed by oxidation；D.destroyed by heat；E.destroyed by light；1.FH

圖2結(jié)果表明，樣品被破壞后產(chǎn)生的降解物雜質(zhì)峰均能與主峰分離，該色譜系統(tǒng)可有效分離并測定降解物質(zhì)，適用于樣品的有關(guān)物質(zhì)檢查。

2.3.4 有關(guān)物質(zhì)測定。精密吸取對照溶液20 μL注入色譜儀，調(diào)節(jié)檢測靈敏度，使主成分色譜峰的峰高為滿量程的10%～20%；再精密吸取供試溶液與對照溶液各20 μL分別注入色譜儀，記錄色譜圖至主成分峰保留時(shí)間的2倍。如顯雜質(zhì)峰，各雜質(zhì)峰峰面積之和與對照溶液峰面積比較，計(jì)算有關(guān)物質(zhì)含量，應(yīng)不超過1%。測定3批樣品，結(jié)果有關(guān)物質(zhì)含量分別為0.47%、0.26%、0.28%。

2.4 影響因素試驗(yàn)

取實(shí)驗(yàn)室制備的樣品（批號為080901），除去包裝后置于潔凈的表面皿中，分別在高溫、高濕和光照條件下進(jìn)行穩(wěn)定性的影響因素試驗(yàn)，并于第5、10天取樣測定，考察其性狀、崩解時(shí)限、含量和有關(guān)物質(zhì)[5]，結(jié)果與0 d比較，詳見表1。

表1 樣品影響因素試驗(yàn)結(jié)果（n＝3）Tab 1Results of influence factors test of samples（n＝3）

從表1可見，高溫對樣品的影響較大，并且有關(guān)物質(zhì)含量超標(biāo)；口腔崩解片的吸濕性較強(qiáng)，但對光照較穩(wěn)定。提示FH口腔崩解片應(yīng)密封，在陰涼干燥處保存。

2.5 加速試驗(yàn)

取3批樣品，選用雙鋁復(fù)合膜包裝材料模擬上市包裝，置于溫度（40±2）℃、相對濕度為（75±5）%的恒溫恒濕培養(yǎng)箱中放置6個(gè)月，分別于1、2、3、6個(gè)月末取樣測定，考察其性狀、含量、有關(guān)物質(zhì)以及崩解時(shí)限，結(jié)果與0月對照，詳見表2。

表2 樣品加速試驗(yàn)結(jié)果（n＝3）Tab 2Results of accelerated test（n＝3）

2.6 長期留樣試驗(yàn)

取3批樣品，按選定的包裝材料進(jìn)行包裝，置于溫度（25±2）℃、相對濕度為（60±10）%的恒溫恒濕培養(yǎng)箱中放置12個(gè)月，分別于0、3、6、9、12個(gè)月末取樣測定，考察其性狀、含量、有關(guān)物質(zhì)和崩解時(shí)限，結(jié)果與0月對照，詳見表3。

表3 樣品長期試驗(yàn)結(jié)果（n＝3）Tab 3Results of long-term test（n＝3）

表3結(jié)果顯示，樣品連續(xù)放置12個(gè)月各項(xiàng)質(zhì)量指標(biāo)變化較小，在選定包裝及儲存條件下穩(wěn)定性良好。

2.7 有效期統(tǒng)計(jì)分析

選擇批號為080901樣品的長期試驗(yàn)測定數(shù)值為例，以標(biāo)示量（y）對時(shí)間（x）進(jìn)行線性回歸，得回歸方程：y＝－0.465 3x+100.58（r＝0.989 3）；求出各時(shí)間點(diǎn)標(biāo)示量的計(jì)算值（y′），然后計(jì)算95%單側(cè)可信限置信區(qū)間y′±σ；用x與y′、y′+σ、y′－σ作圖，從置信區(qū)間下界線的標(biāo)示量90%處劃一條直線，自交點(diǎn)作垂線于x軸相交處，即為最短有效期[6，7]，結(jié)果見圖3。

圖3 有效期統(tǒng)計(jì)分析圖Fig 3 The term of validity statistical analysis

從圖3可見，F(xiàn)H口腔崩解片的最短有效期為24個(gè)月，與穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果推斷相符合。

3 討論

影響因素試驗(yàn)中樣品在高溫和高濕狀態(tài)下性狀發(fā)生較大變化，尤其濕度的影響更大，這與片劑中加入大量崩解劑吸濕有關(guān)，因此不再進(jìn)行95%濕度條件下的試驗(yàn)。加速試驗(yàn)中6個(gè)月的有關(guān)物質(zhì)量增加近3倍，提示生產(chǎn)及內(nèi)包裝環(huán)境應(yīng)嚴(yán)格控制濕度，盡量減少半成品的周轉(zhuǎn)期限；成品也應(yīng)在陰涼干燥處儲存，密封并在包裝盒內(nèi)放置干燥劑。

采用雙鋁復(fù)合膜包裝的樣品經(jīng)加速試驗(yàn)，在規(guī)定的時(shí)間內(nèi)各項(xiàng)質(zhì)量指標(biāo)均穩(wěn)定，說明其包裝材料選擇較為適宜；模擬產(chǎn)品的上市包裝，進(jìn)行長期試驗(yàn)，檢驗(yàn)結(jié)果表明該制劑質(zhì)量穩(wěn)定，在規(guī)定的貯藏條件下可以長期儲存，有效期暫定為2年。

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[4]國家食品藥品監(jiān)督管理局藥品審評中心.口腔崩解片的劑型特點(diǎn)和質(zhì)量控制會議紀(jì)要[EB/OL].http：//www.cde.org.cn/.2003-08-03.2011-01-10.

[5]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（二部）[S].2010年版.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：附錄200-201.

[6]陳海峰.藥物建立有效期的考慮要點(diǎn)[J].中國新藥雜志，2009，18（19）：1 831.

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