曾祥偉,徐亞萍,李志軍,李夢溪
(東北林業(yè)大學野生動物資源學院,黑龍江 哈爾濱 150040)
雞傳染性囊病是由傳染性囊病病毒(IBDV)引起的幼雞的一種急性、高度接觸性傳染病。傳染性支氣管炎是由雞傳染性支氣管炎病毒(IBV)引發(fā)的雞的一種急性、高接觸性的呼吸道和泌尿生殖道疾病。這兩種病毒性疾病一直是危害世界養(yǎng)禽業(yè)的重要傳染病,主要依靠接種疫苗進行防控。然而,隨著這兩種病毒的不斷變異,疫苗接種也不能達到理想的保護效果。近兩年來,黑龍江地區(qū)的一些養(yǎng)殖場多次發(fā)生了IBDV和IBV混合感染,導致大批幼齡雞只發(fā)病死亡,造成巨大的經(jīng)濟損失。鑒于此,本試驗將從當?shù)胤蛛x的這兩種疫病流行毒株制作成油佐劑滅活疫苗,對剛開產(chǎn)的蛋雞進行多次加強免疫,制備抗IBDV-IBV二聯(lián)高免卵黃抗體,嘗試對當?shù)匕l(fā)生的疫情進行有效控制。
1.1 試驗動物 30只20周齡健康的海賽克斯蛋雞由中國農(nóng)業(yè)科學院哈爾濱獸醫(yī)研究所實驗牧場提供,它們均經(jīng)過了IBD、IB的常規(guī)基礎(chǔ)免疫。
1.2 主要試劑 IBD瓊擴標準抗原、IBD瓊擴標準陽性血清,雞傳染性支氣管炎凝集抗原與標準陽性血清,購自中國農(nóng)業(yè)科學院哈爾濱獸醫(yī)研究所。Span白油、甲醛、氯仿等,購自哈爾濱聯(lián)星生物公司。
1.3 IBD、IB油佐劑滅活疫苗 現(xiàn)場采集的已確診為IBD的典型病雞的新鮮腔上囊,與生理鹽水按1∶5比例勻漿,反復凍融3次,3000r/min離心30 min,取上清用甲醛滅活,并配以油佐劑制成滅活苗。將從當?shù)仞B(yǎng)殖場分離的IBV接種10日齡雞胚尿囊腔,37℃培養(yǎng)36~40h,收集尿囊液,經(jīng)甲醛滅活后加油佐劑,制成油乳劑滅活苗。
1.4 免疫方法 用制備好的IBD油乳劑滅活苗和IB油乳劑滅活疫苗對試驗雞進行分別肌肉注射,每種疫苗的接種劑量為2mL/只,每間隔10d,以油乳劑滅活苗分別做3次加強免疫,劑量同上。此后定期檢測卵黃抗體的水平,待抗IBDV瓊擴效價達1∶128以上,抗IBV的Hl效價達1∶1024以上時開始收集高免蛋,4℃儲存?zhèn)溆?。瓊擴效價降低到1∶64,Hl效價降低到1∶512時停止收蛋,再進行加強免疫。
1.5 卵黃抗體的制備 收集的高免蛋先用自來水將蛋表面沖洗干凈,再放入0.5%新潔爾滅溶液中浸泡消毒,然后取出用酒精棉擦拭蛋殼,打開蛋殼,無菌分離蛋黃,加入滅菌生理鹽水做適量稀釋。再以氯仿為溶劑與卵黃生理鹽水等量混合,室溫下放置6h以上,期間振蕩2~4次,使其充分溶解。2000r/min離心20min,收集上清。最后按每mL加入青霉素1000IU、鏈霉素1000μg,并按總量的0.01%加入硫柳汞防腐,經(jīng)雙層滅菌紗布過濾,即為制備的卵黃抗體。
1.6 無菌檢驗和安全檢驗 取高免卵黃抗體0.2 mL,分別接種于鮮血瓊脂平板、馬丁肉湯和厭氣肉肝湯培養(yǎng)基,37℃培養(yǎng)48h,觀察有無細菌生長。用14日齡健康雛雞10只,各皮下注射本品10mL。觀察10d,記錄雛雞的健康和存活情況。
1.7 效價測定 取待檢卵黃抗體液,以瓊脂擴散法(AGP)檢測抗IBDV抗體效價;以血凝和血凝抑制試驗(HA-HI)檢測抗IBV抗體效價。
1.8 臨床應用試驗 哈爾濱市郊的某養(yǎng)禽場發(fā)生了疫情,死亡幼雞100多只,經(jīng)臨床剖檢和實驗室診斷,結(jié)果為IBDV、IBV混合感染。選取出現(xiàn)發(fā)病癥狀的雞120只,隨機分成兩組。一組用制備的抗IBDV-IBV二聯(lián)卵黃抗體以肌肉注射進行治療,每天2次,連續(xù)治療1周;另一組按照以往的治療方法進行處理,病毒唑加抗生素肌肉注射,每天2次,連續(xù)治療1周。對沒有出現(xiàn)癥狀的雞同時注射該二聯(lián)卵黃抗體進行預防,每天1次,連續(xù)用3d。觀察并記錄雞只的健康狀況和存活情況。
2.1 無菌檢驗和安全檢驗 制備的卵黃抗體接種3種培養(yǎng)基均無細菌生長;接種的10只雛雞健康狀況良好,未見任何不良反應。
2.2 卵黃抗體效價測定 經(jīng)AGP法檢測抗IBDV抗體效價為1∶256,HA-HI法檢測抗IBV抗體效價為1∶1024,滿足生產(chǎn)中對抗體效價的要求。
2.3 臨床應用觀察 對于發(fā)病雞,應用卵黃抗體的效果要明顯高于常規(guī)病毒唑加抗生素的治療效果,具體結(jié)果見表1。沒有出現(xiàn)癥狀的雞注射卵黃抗體后,沒有1只出現(xiàn)感染癥狀,均十分健康,預防有效率達100%。
表1 卵黃抗體治療效果的測定
卵黃抗體產(chǎn)量高,不受地域和時間的限制;生產(chǎn)成本較低,收集和提純方便,大規(guī)模提取抗體的技術(shù)已經(jīng)成熟;因此被廣泛用于動物傳染病的緊急治療和預防中[1-2]。不論雞IBD的卵黃抗體還是IB的卵黃抗體的制備和應用都常有報道,而將兩者結(jié)合制備二聯(lián)抗體卻鮮有報道。本研究制備了抗IBDVIBV二聯(lián)卵黃抗體,主要是針對當?shù)匾恍B(yǎng)殖場多次發(fā)生了IBDV和IBV混合感染的疫情而定的。從當?shù)胤蛛x的病毒株制成滅活疫苗用于加強免疫,這樣獲得的高免卵黃抗體針對性更強,因此在當?shù)匾咔榈念A防和治療上取得了良好的效果。但是如果在其他地區(qū)應用,其預防和治療的有效性還有待驗證。
在臨床試驗中,注意到卵黃抗體治療組中死亡的7只雞主要是處在發(fā)病的晚期或者有繼發(fā)感染,而處于發(fā)病早期的病雞全部恢復。這也驗證了一些學者的研究[3],即證明卵黃抗體在發(fā)病的早期應用通常會收到良好效果,給疾病的中晚期應用效果則不明顯。因此,在實踐中,一定要注意卵黃抗體應用的時機,越早注射越能快速控制疫情發(fā)展。
[1] 李文學,青學剛,劉剛.高免卵黃抗體應用研究現(xiàn)狀及發(fā)展趨勢[J].安徽農(nóng)業(yè)科學,2010,38(24):12981-12982.
[2] 崔桂清,李火舉.卵黃抗體在防治仔豬腹瀉上的應用[J].中國獸醫(yī)雜志,2010,46(3):61-63.
[3] 張鐵,王春光.抗雞新城疫和傳染性法氏囊病高免卵黃抗體的正確應用[J].四川畜牧獸醫(yī),2002,29(2):46.