楊建偉

（重慶市綦江縣人民醫(yī)院 401421）

腫瘤細(xì)胞的侵襲與轉(zhuǎn)移極為復(fù)雜，其全過(guò)程受到多種基因表達(dá)的調(diào)控。研究有關(guān)基因表達(dá)變化與其生物學(xué)現(xiàn)象的關(guān)系是腫瘤學(xué)領(lǐng)域的重要課題。轉(zhuǎn)移相關(guān)基因1（metastasis asso－ciated genl 1，MTA1）蛋白是近年來(lái)有關(guān)腫瘤侵襲、轉(zhuǎn)移研究的熱點(diǎn)之一?，F(xiàn)將采用Western Blot法測(cè)定MTA1蛋白在肝癌組織及肝硬化組織中的表達(dá)結(jié)果報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 57例肝癌組織和23例肝硬化組織均取自本院及重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院手術(shù)標(biāo)本，肝癌組織為其腫瘤邊緣組織，肝硬化樣本采自肝癌組織邊緣5cm外質(zhì)地堅(jiān)硬組織，轉(zhuǎn)移性肝癌為有肝內(nèi)或肝周圍淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者，以上樣本均經(jīng)病理檢查確定。肝癌患者年齡32～67歲，平均（43±6.5）歲。按Edmondson法進(jìn)行分級(jí)，根據(jù)腫瘤形態(tài)、功能和分化程度分為Ⅰ～Ⅳ級(jí)，其中20例有轉(zhuǎn)移，37例無(wú)轉(zhuǎn)移。

1.2 試劑與儀器 鼠抗人MTA1蛋白抗體（美國(guó)Santa cruz公司）、電泳試劑盒（武漢博士得公司）、發(fā)光試劑盒（美國(guó)GE公司）、蛋白提取液（武漢博士得公司）、Transwell侵襲小室（美國(guó)Costar公司）、圖像分析系統(tǒng)（美國(guó)BID－RAD公司）等。

1.3 組織蛋白提取 用電子分析天平秤取組織，將該組織置玻璃勻漿管內(nèi)，按1mg∶15μL比例加蛋白提取液，按蛋白提取液說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。用分光光度法測(cè)定蛋白提取液中蛋白含量，并調(diào)節(jié)蛋白含量均為2mg／μL。

1.4 測(cè)定MTA1蛋白表達(dá) 將上述蛋白組織液經(jīng)100g／L SDS－聚丙稀酰胺凝膠電泳，電轉(zhuǎn)于PVDS膜，用50g／L脫脂奶粉的TBST溶液封閉，經(jīng)孵育一抗及二抗后，化學(xué)發(fā)光法顯色，圖像分析系統(tǒng)拍攝并用Quantity One軟件將特異條帶灰度數(shù)字化。MTA1表達(dá)水平的相對(duì)值（MTA1蛋白表達(dá)系數(shù)）為MTA1蛋白條帶灰度與內(nèi)參蛋白（βActin蛋白）條帶灰度比值。MTA1蛋白表達(dá)系數(shù)＝MTA1蛋白積分光密度／βActin蛋白積分光密度。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，結(jié)果以表示，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 MTA1蛋白的表達(dá) MTA1蛋白在20例有轉(zhuǎn)移及37例無(wú)轉(zhuǎn)移肝癌組織和23例肝硬化組織中的表達(dá)系數(shù)分別為1.33±0.21、0.51±0.18、0.21±0.10。MTA1蛋白在有轉(zhuǎn)移的肝癌組織中的表達(dá)量明顯高于無(wú)轉(zhuǎn)移肝癌組織及肝硬化組織中的表達(dá)，三者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；Western Blot法檢測(cè)有轉(zhuǎn)移肝癌組織、無(wú)轉(zhuǎn)移肝癌組織和肝硬化組織中MTA1蛋白表達(dá)的部分結(jié)果見(jiàn)圖1。

圖1 MTA1蛋白表達(dá)情況

2.2 MTA1蛋白表達(dá)與肝癌病理分級(jí)的關(guān)系 57例肝癌組織中MTA1蛋白的表達(dá)與腫瘤的病理分級(jí)的關(guān)系見(jiàn)表1。不同病理級(jí)別在無(wú)轉(zhuǎn)移組之間比較MTA1蛋白的表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.01），在有轉(zhuǎn)移肝癌組織之間比較差異也無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.01）。提示MTA1蛋白表達(dá)與肝癌組織有、無(wú)轉(zhuǎn)移相關(guān)，而與病理分級(jí)不相關(guān)。

表1 MTA1蛋白表達(dá)與肝癌病理分級(jí)和有、無(wú)轉(zhuǎn)移的關(guān)系（）

表1 MTA1蛋白表達(dá)與肝癌病理分級(jí)和有、無(wú)轉(zhuǎn)移的關(guān)系（）

△△:P＞0.01，與Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ級(jí)無(wú)轉(zhuǎn)移比較；θθ:P＞0.01，與Ⅲ、Ⅳ級(jí)有轉(zhuǎn)移比較。

組別 n MTA1蛋白表達(dá)系數(shù)Ⅰ級(jí)無(wú)轉(zhuǎn)移 5 0.49±0.16△△Ⅱ級(jí)有轉(zhuǎn)移 4 1.29±0.20θθ無(wú)轉(zhuǎn)移 12 0.50±0.17Ⅲ級(jí)有轉(zhuǎn)移 10 1.34±0.22無(wú)轉(zhuǎn)移 19 0.51±0.18Ⅳ級(jí)有轉(zhuǎn)移 6 1.25±0.20無(wú)轉(zhuǎn)移1 0.52

3 討 論

MTA1是由Pencil等［1］于1993年在鼠乳腺癌細(xì)胞13762中發(fā)現(xiàn)，隨后由Toh等［2］在人乳腺癌細(xì)胞株中找到相對(duì)應(yīng)的同源基因。其編碼蛋白質(zhì)含715個(gè)氨基酸殘基，相對(duì)分子質(zhì)量為82kD［3］。MTA1蛋白能與組蛋白去乙?；福╤istone deacethlases，HDACs）結(jié)合，募集HDACs到目標(biāo)基因的啟動(dòng)子區(qū)域，通過(guò)去除組蛋白的乙?；?，重塑染色質(zhì)結(jié)構(gòu)而不利于轉(zhuǎn)錄［4］，從而直接或間接下調(diào)某些抑制腫瘤浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移的基因轉(zhuǎn)錄。還可以改變細(xì)胞角蛋白絲的組裝及細(xì)胞骨架蛋白的定位，使細(xì)胞更具侵襲與轉(zhuǎn)移的表型［5］。

本研究通過(guò)測(cè)定肝癌及肝硬化組織中MTA1蛋白的表達(dá)發(fā)現(xiàn)，MTA1蛋白在有轉(zhuǎn)移的肝癌組織中表達(dá)明顯高于無(wú)轉(zhuǎn)移肝癌及肝硬化組織，但與病理分級(jí)無(wú)顯著相關(guān)，這可能與本實(shí)驗(yàn)樣本數(shù)不夠大有關(guān)，有待進(jìn)一步加大樣本量進(jìn)行研究。本研究結(jié)果顯示，MTA1蛋白在肝癌組織中的高表達(dá)與肝癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。國(guó)內(nèi)外亦有文獻(xiàn)報(bào)道，MTA1蛋白在肝癌及其他腫瘤組織中表達(dá)增高，與腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移相關(guān)。Moon等［6］研究發(fā)現(xiàn)，肝癌中 MTAl基因的表達(dá)可促進(jìn)微血管的形成。蔣璐岑等［7］證實(shí)，MTA1蛋白在高轉(zhuǎn)移潛能肝癌細(xì)胞株的表達(dá)明顯高于低轉(zhuǎn)移潛能肝癌細(xì)胞株。MTA1能促進(jìn)食管癌細(xì)胞的侵襲、黏附和運(yùn)動(dòng)［8］。MTA1mRNA表達(dá)上調(diào)與胃腺癌細(xì)胞的浸潤(rùn)及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)［9］。Lguchi等［10］證實(shí)，在胰腺癌組織中MTA1mRNA的過(guò)表達(dá)者，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率高。在卵巢癌組織中有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移則MTA1mRNA表達(dá)亦高［11］。MTA1mRNA在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的喉癌組織中明顯高于無(wú)轉(zhuǎn)移者，提示 MTA1是喉癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵因素［12－14］。

綜上所述，MTA1蛋白表達(dá)的上調(diào)與包括肝癌在內(nèi)的腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移相關(guān)，推測(cè)MTA1蛋白可能成為包括肝癌在內(nèi)的腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移的標(biāo)志物，亦提示MTA1蛋白可能成為治療腫瘤轉(zhuǎn)移的靶點(diǎn)［15］。

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