郭繼龍，苗宇船，關(guān) 偉，劉 揚(yáng)，王世軍

（1.山西中醫(yī)學(xué)院，山西太原030024； 2.山東中醫(yī)藥大學(xué)，山東濟(jì)南250014）

祖國醫(yī)學(xué)早在兩千多年前已經(jīng)對(duì)腫瘤有所認(rèn)識(shí)，并在以后的發(fā)展中積累了大量的關(guān)于腫瘤治療的方藥、療法，主要集中在活血化瘀、清熱解毒、補(bǔ)中益氣方面藥物的研究，收澀藥物在這方面僅有個(gè)別報(bào)道。本研究主要采用幾種收澀中藥對(duì)小鼠S180肉瘤抑制作用初步篩選，為中藥抗腫瘤拓寬思路與途徑。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 昆明種小鼠80只，體重（20±2）g，雄性，由山西省中醫(yī)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，清潔級(jí)，動(dòng)物合格證號(hào)：scxk（京）2001-0003；S180肉瘤，由山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物所腫瘤室提供。

1.1.2 實(shí)驗(yàn)藥品 五味子、烏梅、五倍子、椿皮、金櫻子由山西中醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院門診部提供，經(jīng)學(xué)校中藥專家鑒定質(zhì)量符合實(shí)驗(yàn)要求；環(huán)磷酰胺（上海華聯(lián)制藥有限公司，批號(hào)：031002）。

1.1.3 實(shí)驗(yàn)器材 醫(yī)用圖像分析儀（Image-Pro Plus），美國；研究顯微鏡，美國光學(xué)儀器公司；石蠟切片機(jī)；小鼠灌胃器，實(shí)驗(yàn)室自制。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 動(dòng)物模型的制備及給藥 S180腹水瘤小鼠腹部皮膚消毒，使用注射器抽吸腹水，與生理鹽水按1∶4比例稀釋，鏡檢計(jì)數(shù)細(xì)胞濃度調(diào)至約為2×106/L。每只小鼠左側(cè)腋窩消毒后皮下接種0.2 mL腫瘤細(xì)胞懸液［1］。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物接種腫瘤后隨機(jī)分為空白對(duì)照組、烏梅組、椿皮組、五倍子組、五味子組、金櫻子組、環(huán)磷酰胺組7組，每組11只。各組小鼠分別標(biāo)號(hào)，稱重。于第2天開始給藥，空白對(duì)照組灌胃生理鹽水每只0.2 mL/d；環(huán)磷酰胺組給予環(huán)磷酰胺每只40 mg/d，藥物組灌胃量為成人臨床用藥量的10倍，即五味子組給予五味子水煎液75 g/（kg·d）、烏梅組給予烏梅水煎液250 g/（kg·d）、五倍子組給予五倍子水煎液75 g/（kg·d）、椿皮組給予椿皮水煎液62.5 g/（kg·d）、金櫻子組給予金櫻子水煎液225 g/（kg·d）。連續(xù)用藥7 d后處死動(dòng)物。

1.2.2 檢測(cè)指標(biāo)

1.2.2.1 腫瘤重量及抑瘤率（Z）處死動(dòng)物，剝離瘤組織，稱重。

式中Z代表抑瘤率，T代表各藥物實(shí)驗(yàn)組平均瘤重，C代表空白對(duì)照組平均瘤重。

1.2.2.2 胸腺指數(shù)（X）處死動(dòng)物，摘下胸腺，稱重。

1.2.2.3 瘤組織一般形態(tài)學(xué)觀察 常規(guī)HE染色，切片，光鏡下觀察瘤組織結(jié)構(gòu)及壞死面積。

1.2.2.4 細(xì)胞核形態(tài)學(xué)檢測(cè)［1］采用Image-Pro Plus圖像分析系統(tǒng)，物鏡×40，將Feulgen染色片置載物臺(tái)，隨機(jī)選擇視野（盡量在瘤塊的邊緣，以染色為紫色最佳），微機(jī)攝像機(jī)將圖像攝入，選擇不重疊腫瘤細(xì)胞，測(cè)試總數(shù)80～100個(gè)左右，檢測(cè)細(xì)胞核面積（S）、周長(zhǎng)（L）、形狀因子（Y）、異形指數(shù)（X）等四個(gè)指標(biāo)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié) 果

2.1 腫瘤組織形態(tài)學(xué)變化

肉眼觀察，與空白對(duì)照組比較，各實(shí)驗(yàn)組小鼠腫瘤體積較小，顏色蒼白，形態(tài)較為規(guī)則，容易剝離。HE染色鏡下觀察，腫瘤組織有大片的壞死，嚴(yán)重者可占到面積的一半以上，壞死組織周圍有大量的淋巴細(xì)胞浸潤，但各組之間沒有顯著的差異性。在沒有壞死的腫瘤組織中還可見到凋亡細(xì)胞的存在。

2.2 抑瘤率

與空白對(duì)照組比較，烏梅組、椿皮組、環(huán)磷酰胺組抑瘤作用較強(qiáng)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05，P<0.01）；而五味子組、五倍子組、金櫻子組也有抑瘤趨勢(shì)，但與空白對(duì)照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果見表1、圖1。

表1 對(duì)S180肉瘤重量及抑瘤率的影響 （±s）

表1 對(duì)S180肉瘤重量及抑瘤率的影響 （±s）

注：與空白對(duì)照組比較，1）P<0.05，2）P<0.01

組別 n 瘤體重量（g）抑瘤率（%）空白對(duì)照組 110.692±0.250 -烏梅組 110.412±0.23640.461）椿皮組 110.321±0.28953.612）五倍子組 110.550±0.23620.52五味子組 110.606±0.45614.30金櫻子組 110.575±0.58416.91環(huán)磷酰胺組 110.350±0.24649.422）

圖1 對(duì)S180肉瘤重量的影響

2.3 胸腺指數(shù)

與空白對(duì)照組比較，烏梅組、椿皮組、五味子組、金櫻子組胸腺指數(shù)偏大，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），結(jié)果見表 2。

表2 對(duì)胸腺指數(shù)的影響 （±s）

表2 對(duì)胸腺指數(shù)的影響 （±s）

注：與空白對(duì)照組比較，1）P<0.05

組別 n 胸腺指數(shù)空白對(duì)照組 111.93±0.018烏梅組 114.62±0.0281）椿皮組 114.33±0.0201）五倍子組 111.94±0.019五味子組 112.02±0.023金櫻子組 114.14±0.0251）環(huán)磷酰胺組 111.65±0.015

2.4 腫瘤細(xì)胞核形態(tài)學(xué)觀察

經(jīng)Feulgen染色的細(xì)胞，核呈現(xiàn)紫紅色，胞質(zhì)和其他成分呈淡綠色［2］。與空白對(duì)照組比較，烏梅組、椿皮組及環(huán)磷酰胺組核面積、形狀因子及異形指數(shù)均降低（P<0.05，P<0.01）。結(jié)果見表 3。

表3 對(duì)S180肉瘤細(xì)胞核形態(tài)的影響 （±s）

表3 對(duì)S180肉瘤細(xì)胞核形態(tài)的影響 （±s）

注：與空白對(duì)照組比較，1）P<0.05，2）P<0.01

組別 n 核面積（mm2）核周長(zhǎng)（mm）形狀因子 異型指數(shù)空白對(duì)照組 113.056±0.8907.796±0.9091.475±0.3574.279±0.491烏梅組 92.459±0.3481） 6.337±0.4371） 1.307±0.0391） 4.051±0.0611）椿皮組 102.561±0.2611） 6.312±0.4141） 1.241±0.0362） 3.947±0.0392）環(huán)磷酰胺組 102.398±0.2582） 5.958±0.3391） 1.182±0.0372） 3.853±0.0602）

3 討 論

腫瘤一直是困擾人類健康的主要疾病，與心血管疾病、中風(fēng)并列為人類疾病的三大殺手。中藥在抗腫瘤方面也有重要貢獻(xiàn)，主要集中在活血化瘀藥、清熱解毒藥、補(bǔ)氣藥等方面藥物的研究。收澀藥，又稱固澀藥，大多性味酸澀，適用于久病體虛、正氣不固所致的自汗、盜汗、久泄、久痢、遺精、滑精、遺尿、尿頻、久咳虛喘，以及崩帶不止等滑脫不禁的證候。這些癥狀與腫瘤惡病質(zhì)有相識(shí)之處，收澀藥物是否也有抑制腫瘤的作用，臨床有個(gè)別報(bào)道［3］。

本實(shí)驗(yàn)證明，選取的幾種收澀中藥對(duì)腫瘤都具有一定的抑制作用。但效果并不是都很顯著，其中椿皮、烏梅效果較為顯著；金櫻子、五味子具有一定趨勢(shì)，效果不是很明顯，很可能與給藥途徑、給藥劑量有關(guān)系［4］，待進(jìn)一步研究。

［1］吳細(xì)丕，錢林法.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與腫瘤研究［M］.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2000：432.

［2］劉育艷.Feulgen 染色改良法［J］.山西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2000，31（4）：397.

［3］吳秋玲，盧宏達(dá)，郭繼龍，等.蟲類中藥抗腫瘤作用研究進(jìn)展［J］.山西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2010，11（5）：71-73.

［4］彭梅.14種多糖對(duì)小鼠S180肉瘤抑制活性篩選［J］.山地農(nóng)業(yè)生物學(xué)報(bào)，2011，30（1）：56-59.