王沖 白莉

扁平苔蘚(Lichen Plsnus)是一種常見慢性炎癥性皮膚病，目前發(fā)病機(jī)制和原因仍不十分清楚，其組織病理表現(xiàn)為基底細(xì)胞液化變性，真皮淺層以T淋巴細(xì)胞為主的帶狀浸潤(rùn)，提示了免疫細(xì)胞介導(dǎo)的局部反應(yīng)。T淋巴細(xì)胞在許多細(xì)胞因子的產(chǎn)生中起著重要的作用［1］，同時(shí)細(xì)胞免疫反應(yīng)受到各種細(xì)胞因子及其受體的調(diào)節(jié)，因此，這些細(xì)胞因子可能參與了扁平苔蘚的病理過程。大量研究發(fā)現(xiàn)，白介素-6(IL-6)是自身免疫疾病中的關(guān)鍵炎癥因子，而腫瘤壞死因子-α(TNF-α)在體內(nèi)細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)中起著重要的調(diào)節(jié)作用，TNF-α能上調(diào)IL-6及TNF-α自身的表達(dá)。本研究通過觀察TNF-α和IL-6在扁平苔蘚皮損中的表達(dá)變化，進(jìn)一步揭示它們?cè)诒馄教μ\發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮的作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料 病例組30例(男性16例，女性14例)，均為我院皮膚科門診2011年1月至2012年7月經(jīng)臨床和組織病理確診為扁平苔蘚的患者，年齡19～68歲，平均(42±6.42)歲。取材部位為軀干四肢典型皮損，所有病例近3個(gè)月內(nèi)未用激素、免疫調(diào)節(jié)劑，均無全身系統(tǒng)性疾病。對(duì)照組30例(男18例，女12例)來源于我院整形外科和普外科的正常皮膚組織，年齡26～64歲，平均(38±8.64)歲，無任何皮膚病及系統(tǒng)性疾病。兩組性別和年齡差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

1.2 試驗(yàn)試劑 兔抗人IL-6多克隆抗體由北京博奧森生物技術(shù)有限公司提供，兔抗人TNF-α多克隆抗體由武漢博士德生物技術(shù)公司提供，二步法PV-6001免疫組織化學(xué)檢測(cè)試劑盒及DAB顯色試劑盒、PBS緩沖液等試劑均購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)公司。

1.3 試驗(yàn)方法 ① 免疫組化二步法檢測(cè)組織中TNF-α和IL-6的表達(dá):所有標(biāo)本用4%中性緩沖液甲醛固定，常規(guī)乙醇脫水，石蠟包埋和厚4μm連續(xù)切片;用蒸餾水配制新鮮的3%H2O2阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，然后將切片浸入pH6.0、0.01 mol/L的枸櫞酸緩沖液中高壓加熱抗原修復(fù)(兩者均加熱30s);滴加一抗(兔抗人TNF-α濃縮液稀釋為1∶100，兔抗人IL-6濃縮液稀釋為1∶150)，陰性對(duì)照用PBS溶液取代一抗進(jìn)行對(duì)比實(shí)驗(yàn)，37℃孵育1 h，滴加二抗;DAB顯色;37℃孵育15 min后蘇木素復(fù)染，常規(guī)脫水、透明、封片。②免疫組化結(jié)果判定:免疫組化結(jié)果以胞漿和(或)胞核可見棕黃色顆粒為陽性，陰性無著色。由于積分光密度值(IOD)與染色強(qiáng)度成正比，以IOD值代表陽性產(chǎn)物表達(dá)的強(qiáng)度。每張切片隨機(jī)選取5個(gè)高倍視野(×400)，采用MIAS2000圖像分析系統(tǒng)分析陽性區(qū)域IOD值，測(cè)定每個(gè)視野的IOD值，取平均值為該標(biāo)本的IOD值。

2 結(jié)果

免疫組化結(jié)果顯示:在扁平苔蘚皮損中，TNF-α、IL-6兩者的陽性表達(dá)主要分布在表皮角質(zhì)形成細(xì)胞和真皮淺層淋巴細(xì)胞的胞漿中;在正常皮膚組織中呈陰性或弱陽性表達(dá)。兩者在扁平苔蘚皮損處的表達(dá)明顯高于在正常皮膚組織中的表達(dá)。差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.001)。扁平苔蘚皮損中TNF-α、IL-6的表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.804，P ＜0.001)。扁平苔蘚組與正常皮膚組之間TNF-α、IL-6的IOD值比較見表1。

表1 扁平苔蘚與正常皮膚組織中TNF-α、IL-6表達(dá)水平的比較(±s)

表1 扁平苔蘚與正常皮膚組織中TNF-α、IL-6表達(dá)水平的比較(±s)

組別 例數(shù)(n) TNF-αIL-6扁平苔蘚組30 12.354±1.876 13.958±1.787正常皮膚組 30 6.944±1.582 7.348±1.310 t值 - 12.073 16.338 P值-＜0.001 ＜0.001

3 討論

大量研究表明，扁平苔蘚是T淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的局部炎癥反應(yīng)，多種炎癥介質(zhì)參與了扁平苔蘚的發(fā)病［2］。TNF-α基因定位于6號(hào)染色體HLA-DR基因和HLA-B基因位點(diǎn)之間的HLA-III抗原基因簇上，其長(zhǎng)度約2.76 kb，由四個(gè)外顯子和三個(gè)內(nèi)含子組成。皮膚處的TNF-α多由單核巨噬細(xì)胞、角質(zhì)形成細(xì)胞和激活的T淋巴細(xì)胞產(chǎn)生，是一種具有廣泛生物活性的細(xì)胞因子，同時(shí)也是一個(gè)免疫反應(yīng)的關(guān)鍵性細(xì)胞因子，參與機(jī)體炎癥和免疫應(yīng)答的調(diào)節(jié)。TNF-α能增加前炎癥細(xì)胞因子即IL-1，IL-6，IL-8等合成與釋放。TNF-α通過與TNF受體-1結(jié)合而促進(jìn)扁平苔蘚凋亡的發(fā)生［3，4］。有研究發(fā)現(xiàn)扁平苔蘚皮損中TNF-α的表達(dá)程度與基底細(xì)胞液化有一定關(guān)系，表現(xiàn)在有基底細(xì)胞液化處的表皮角質(zhì)形成細(xì)胞和真皮淺層淋巴細(xì)胞的TNF-α表達(dá)明顯增加［5］，而且研究發(fā)現(xiàn)扁平苔蘚皮損中TNF-α與淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)的數(shù)量有一定的相關(guān)性［6］，所以在扁平苔蘚炎癥反應(yīng)中，TNF-α發(fā)揮著重要作用。

IL-6是由淋巴細(xì)胞、單核巨噬細(xì)胞等細(xì)胞激活后合成和分泌的多向性細(xì)胞因子，它主要參與機(jī)體免疫反應(yīng)、炎癥以及腫瘤等病理生理過程。IL-6與IL-6R結(jié)合后導(dǎo)致細(xì)胞漿內(nèi)JAK激酶的活化，通過JAK-STAT信號(hào)傳遞系統(tǒng)發(fā)揮其生物學(xué)效應(yīng)，作為一種促炎癥細(xì)胞因子，主要功能為刺激T細(xì)胞增殖及CTL(細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞)活化，參與炎癥反應(yīng)。機(jī)體在IL-1、TNF-α等細(xì)胞因子的刺激下可以產(chǎn)生IL-6。IL-6可以刺激T淋巴細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞等分泌各種炎癥介質(zhì)，并且有促進(jìn)B淋巴細(xì)胞的成熟分化的作用，這又增加了IL-1和TNF-α的效應(yīng)。在炎癥反應(yīng)中IL-6對(duì)其他炎癥細(xì)胞，如中性粒細(xì)胞、單核巨噬細(xì)胞等也有趨化作用［7］。這些都體現(xiàn)了IL-6在機(jī)體炎癥反應(yīng)中有著重要的作用。

Yamamoto等［8］研究顯示，在口腔扁平苔蘚中，IL-1β 和IL-6可以刺激浸潤(rùn)性單核細(xì)胞產(chǎn)生更多的TNF-α，同時(shí)IL-1β和GM-CSF也可以刺激浸潤(rùn)性單核細(xì)胞產(chǎn)生更多的IL-6。TNF-α 能上調(diào) IL-1、IL-6及 TNF本身的水平［9］，IL-6可增加 T細(xì)胞IL-2產(chǎn)生和IL-2R的表達(dá)，IL-2和IL-2R的結(jié)合誘導(dǎo)殺傷細(xì)胞產(chǎn)生TNF-α。增多的TNF-α介導(dǎo)炎癥連鎖反應(yīng)啟動(dòng)，促進(jìn)其他細(xì)胞因子(如IL-2、IL-6、IL-8)持續(xù)釋放。這些因子又增強(qiáng)了TNF-α的作用。另外，TNF-α可以上調(diào)多種粘附分子的表達(dá)，誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞持續(xù)歸巢，導(dǎo)致淋巴細(xì)胞在皮膚局部的持續(xù)浸潤(rùn)。IL-6多在細(xì)胞受到TNF-α、IL-1β刺激后產(chǎn)生。本研究顯示，TNF-ɑ和IL-6通過介導(dǎo)炎癥反應(yīng)，參與了扁平苔蘚的發(fā)病。

［1］ 劉洋，金建秋，等.2型糖尿病伴口腔扁平苔蘚患者唾液白細(xì)胞介素-6和腫瘤壞死因子-α水平.北京大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版)，2011，43(4):596-599．

［2］ Roopashree M，Gondhalekar RV，Shashikanth M，etal.pathogenesis of oral lichen planus-a review. Joural of Oral pathology＆Medicine，2010(39):729-734．

［3］ 王娟，白莉.扁平苔蘚中TNF-α和TNFRI的表達(dá)及意義.實(shí)用醫(yī)技雜志，2008，15(31):4342-4343．

［4］ Victor FC，Gotdieb AB.TNF-αand apoptosis:implications for the pathogenesis and teatInem of psoriasis.JDrugs Dermatol，2002，1(3):264-275．

［5］ 丁政云，李鑫．腫瘤壞死因子-α在扁平苔蘚皮損中的表達(dá).中華皮膚科雜志，2005，38(12):763．

［6］ 齊艷紅，龐傳超．扁平苔蘚皮損中腫瘤壞死因子α的表達(dá)及其與浸潤(rùn)了淋巴細(xì)胞間的關(guān)系.中華皮膚科雜志，2011，44(10):727-728．

［7］ Luo Q，Ma X，Wah SM，et al.Activation and repression of interleukin-12 p40 transcription by erythroid Kruppel-like factor in macrophages.Biol Chem，2004，279(18):18451-18456．

［8］ Yamamoto T，Osaki T，Yoneda K，et al.Cytokine production by keratinocytes and mononuclear infiltrates in oral lichen planus.JO-ral Pathol Med，1994，23(7):309-315．

［9］ Zhao ZZ，Sugermann PB，Walsh LJ，et al.Expression of RANTES and CCR1 in oral lichen planus and association with mast cellmigration.JOral Pathol Med，2002，31(3):158-162．