劉小芬，楊成梓，黃澤豪，蔡遠(yuǎn)樹，陳明杰

(福建中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，福建福州350108)

福建野生單葉蔓荊子總黃酮與蔓荊子黃素含量分析

劉小芬，楊成梓，黃澤豪，蔡遠(yuǎn)樹，陳明杰

(福建中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，福建福州350108)

對(duì)福建省不同地區(qū)野生單葉蔓荊子總黃酮和蔓荊子黃素含量進(jìn)行測(cè)定，不同地區(qū)含量差異進(jìn)行比較分析，確定福建野生單葉蔓荊子的質(zhì)量水平，為進(jìn)一步開發(fā)福建野生單葉蔓荊子提供基礎(chǔ)研究數(shù)據(jù)。回流提取總黃酮，紫外分光光度法(UV法)測(cè)定總黃酮含量，高效液相色譜法(HPLC法)測(cè)定蔓荊子黃素含量。結(jié)果表明不同產(chǎn)地野生單葉蔓荊子總黃酮含量范圍為7.081%～10.792%，平均含量9.040%;蔓荊子黃素含量范圍為0.06170%～0.12578%，平均含量0.08878%。福建省不同地區(qū)野生單葉蔓荊子質(zhì)量(以蔓荊子黃素含量為指標(biāo))均符合藥典規(guī)定，可進(jìn)一步開發(fā)利用。

蔓荊子;單葉蔓荊;總黃酮;蔓荊子黃素

蔓荊子為我國(guó)重要的藥材之一，以“蔓荊實(shí)”之名始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，列為上品［1］。蔓荊子為辛涼解表常用藥，傳統(tǒng)用于治療風(fēng)熱感冒頭痛、齒齦腫痛、目赤多淚、頭暈?zāi)垦５龋F(xiàn)代藥理研究具有鎮(zhèn)痛、抗炎、降壓、抗菌、祛痰、抗腫瘤等作用［2－3］。其來(lái)源植物為馬鞭草科單葉蔓荊Vitex trifolia L.var.simplifolia Cham.和蔓荊Vitex trifolia L.，主要分布于山東、江西、浙江、安徽、福建、廣西、海南、臺(tái)灣等?。?－5］。黃酮類化合物為蔓荊子藥材的主要藥效成分，主要含有蔓荊子黃素、3，6，7－三甲基槲皮萬(wàn)壽菊素、木犀草素等，鎮(zhèn)痛作用突出，并具有抗菌、消炎等藥理作用［6］，其中蔓荊子黃素含量作為衡量藥材質(zhì)量的重要依據(jù)。2005版《中華人民共和國(guó)藥典》規(guī)定，按干燥品計(jì)算，樣品含蔓荊子黃素不得少于0.030%［7］。本論文對(duì)10個(gè)采自福建沿海砂質(zhì)海岸的野生單葉蔓荊子樣品進(jìn)行總黃酮含量測(cè)定，對(duì)其中8個(gè)樣品進(jìn)行蔓荊子黃素含量測(cè)定，旨在為明確福建野生單葉蔓荊子的總黃酮、蔓荊子黃素含量及不同地區(qū)間的含量差異，為閩產(chǎn)蔓荊子藥材質(zhì)量控制提供黃酮類化合物含量方面的參考數(shù)據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料、儀器與試劑

1.1.1 實(shí)驗(yàn)材料收集與準(zhǔn)備

福建省不同地區(qū)野生單葉蔓荊子生藥材由筆者實(shí)地考察采集所得，利用全球定位系統(tǒng)(global positioning system，GPS)技術(shù)進(jìn)行衛(wèi)星定位，對(duì)分布點(diǎn)周邊環(huán)境詳細(xì)拍照、記錄所在鄉(xiāng)鎮(zhèn)、經(jīng)緯度、海拔等。各樣品來(lái)源地見表1。由福建中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院中藥鑒定教研室楊成梓副教授鑒定為馬鞭草科植物單葉蔓荊 Vitex trifolia L.var.simplifolia Cham.的果實(shí)。采集果枝，先于室內(nèi)堆放3～4 d，發(fā)汗，再攤開，陰干，標(biāo)記，裝袋。

1.1.2 實(shí)驗(yàn)主要儀器與試劑

YP202N型數(shù)字分析天平，DHG－9420型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱，H.H.S型電熱恒溫水浴鍋，金葉RE－52型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，SHB－III型循環(huán)式多用真空泵，UV－9100型紫外可見分光光度計(jì)，ZF－2型三用紫外儀，島津LC－10AT高效液相色譜分析儀，索式提取器等。蘆丁對(duì)照品、蔓荊子黃素對(duì)照品由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供，甲醇分析純、色譜純，磷酸分析純。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 樣品取樣

采用四分法。參照2005年版《中國(guó)藥典》一部中的附錄ⅡA藥材取樣法。

1.2.2 總黃酮提取與含量測(cè)定

1.2.2.1 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線制作

蘆丁標(biāo)準(zhǔn)液制備：取一定量蘆丁樣品于105℃恒溫干燥至恒重，精密稱取5.00 mg，甲醇定容至50 mL，得蘆丁樣品標(biāo)準(zhǔn)液，濃度為0.10 mg/mL。

標(biāo)準(zhǔn)曲線制備：精確吸取每毫升含0.10 mg蘆丁的標(biāo)液 0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL 于 6只具塞試管中，各加甲醇成5 mL，加5%NaNO2液0.3 mL，搖勻，放置6min，加10%Al(NO3)3液 0.3 mL，搖勻，放置6min，加1 mol/L NaOH 液4 mL，加甲醇0.4 mL，搖勻，放置15 min。利用紫外分光光度法(05版藥典附錄VA)，于510 nm處測(cè)A值，以空白為對(duì)照，A值對(duì)標(biāo)樣含量mg/mL數(shù)作圖，標(biāo)準(zhǔn)曲線(圖1)為 A=1.0631X+0.0024，其線性范圍為 0 ～0.05 mg，線性關(guān)系 r=0.9994。

圖1 蘆丁對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)曲線

1.2.2.2 樣品總黃酮提取與供試液制備

樣品粉碎，過(guò)三號(hào)篩。精密稱取1 g置索式提取器中，加100 mL石油醚脫脂2 h。取出揮盡石油醚，再加100 mL甲醇，索式提取至黃酮類成分提盡，約6h(提取液加三氯化鋁甲醇溶液至無(wú)熒光為止)。過(guò)濾，濃縮甲醇至10 mL，定量轉(zhuǎn)移至25 mL量瓶中并用甲醇稀釋至刻度，搖勻，即為待測(cè)樣品溶液。

1.2.2.3 樣品總黃酮含量測(cè)定

精確吸取上述各樣液1.0 mL于具塞試管中，按標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)定方法測(cè)定，3次取平均。參照標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算總黃酮含量。

1.2.3 蔓荊子黃素提取與HPLC法測(cè)定含量

按照05版藥典蔓荊子項(xiàng)下，蔓荊子黃素含量測(cè)定方法進(jìn)行。

1.2.3.1 對(duì)照品與供試品液制備

精密稱定蔓荊子黃素對(duì)照品2.000 0 mg，加色譜純甲醇溶解，搖勻，并定容至5 mL，得400 μg/mL對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)液，精密吸取1 mL，置10 mL容量瓶，加甲醇定容至刻度，搖勻，得40 μg/mL對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)液，過(guò) 0.45 μm 濾膜，備用。

取蔓荊子粉末(過(guò)三號(hào)篩)約2 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 mL，稱定重量，加熱回流1 h，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，離心，取上清液 5 mL，定容至 10 mL，過(guò) 0.45 μm 濾膜，備用。

1.2.3.2 實(shí)驗(yàn) HPLC 條件

島津LC－10AT高效液相色譜分析儀;Platisil(鉑金)ODS 5 um C18色譜柱(250 mm×4.6mm)選用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;流動(dòng)相：甲醇－0.4%磷酸(60：40);流速：1 mL/min;檢測(cè)波長(zhǎng)：258 nm;柱溫：室溫;保留時(shí)間約14min。對(duì)照品、供試品HPLC色譜圖見圖2。

圖2 單葉蔓荊子HPLC圖譜

1.2.3.3 線性關(guān)系

分別吸取 1 mL、2 mL、4 mL、6mL、8 mL、10 mL的40 μg/mL樣液，置10 mL容量瓶，加色譜純甲醇精密定容，制成不同濃度梯度標(biāo)準(zhǔn)品溶液，分別為4、8、16、24、32、40 μg/mL，分別吸取 20 μL，進(jìn)樣，標(biāo)準(zhǔn)品含量(μg/mL)為X坐標(biāo)，得峰面積為Y坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(圖3)，得回歸方程Y=845 10X+15650，線性范圍為 0.00 ～0.64 μg，R20=9 999。

圖3 蔓荊子黃素對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)曲線

1.2.3.4 精密度測(cè)試

取40 μg/mL樣液連續(xù)進(jìn)樣5次，測(cè)每次峰面積，計(jì)算平均值，RSD=0.5%。

1.2.3.5 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)

按照樣品測(cè)定方法，對(duì)同一產(chǎn)地樣品進(jìn)行5次平行實(shí)驗(yàn)，測(cè)定含量(進(jìn)樣3次，取平均)，平均含量為0.089 98%，RSD=1.3%。

1.2.3.6 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

取某一產(chǎn)地樣品，放置 0、2、4、8、24、48h，測(cè)定峰面積，RSD=1.6%，說(shuō)明樣品在48h內(nèi)穩(wěn)定。

1.2.3.7 回收率實(shí)驗(yàn)

精密稱取某一產(chǎn)地樣品(已知含量)1 g，共5份，分別加入40 μg/mL 樣液各1 mL(含量40 μg)，按照樣品提取與測(cè)定方法，測(cè)定含量，計(jì)算回收率，RSD=1.4%。

1.2.3.8 HPLC法測(cè)定樣品蔓荊子黃素含量

按照上述色譜條件，測(cè)定樣品，計(jì)算蔓荊子黃素含量。

2 結(jié)果與分析

2.1 福建省不同地區(qū)單葉蔓荊子樣品來(lái)源

見表1。

表1 福建省不同地區(qū)單葉蔓荊子采集資料表

在本輪對(duì)福建野生單葉蔓荊分布的實(shí)地考察中，共考察了詔安、漳浦、龍海、莆田、福州、寧德、霞浦、福鼎等8個(gè)沿海縣市。寧德及往北沿海較少砂質(zhì)海岸，常見石頭灘與灘涂，故單葉蔓荊少見，在實(shí)地考察的3地市海岸中，僅于霞浦見零星分布。閩江口以南的海岸較多出現(xiàn)沙灘，單葉蔓荊分布廣泛，生長(zhǎng)良好。因其植株具匐蔓性，故在沙質(zhì)海岸常成片分布，成為沙岸灌叢群落的優(yōu)勢(shì)物種，或分布于防護(hù)林下。具體福建野生單葉蔓荊子蘊(yùn)藏量有待進(jìn)一步深入考察與測(cè)算。

2.2 不同地區(qū)野生單葉蔓荊子總黃酮含量

實(shí)驗(yàn)結(jié)果見圖4。

圖4 福建野生單葉蔓荊子總黃酮含量

福建省10個(gè)不同產(chǎn)地野生單葉蔓荊子樣品總黃酮含量范圍為7.081% ～10.792%，平均含量9.040%。其中于詔安洪洲村樣品總黃酮含量最高，為10.792%;詔安南門向陽(yáng)沙波地采集樣品、詔安南門防護(hù)林下采集的熟果樣品、龍海采集的青果與黃果樣品、莆田采集樣品，總黃酮含量均高于平均值;漳浦采集帶霉果?？傸S酮含量最低，為7.081%。

不同果實(shí)成熟期總黃酮含量存在一定差異，從實(shí)驗(yàn)結(jié)果看，單葉蔓荊子青、黃、熟、霉4個(gè)果熟期總黃酮含量大致呈現(xiàn)上升再略呈下降趨勢(shì)。在黃、熟果期，含量均較高，可作為采收時(shí)間的依據(jù)。

2.3 不同地區(qū)野生單葉蔓荊子蔓荊子黃素含量

實(shí)驗(yàn)結(jié)果見圖5。

圖5 福建野生單葉蔓荊子中蔓荊子黃素含量

福建省8份不同產(chǎn)地野生單葉蔓荊子樣品蔓荊子黃素含量范圍為0.061 70% ～0.125 78%，平均含量0.088 78%。其中于漳浦采集的樣品蔓荊子黃素含量最高，為0.125 78%;龍海采集的成熟果實(shí)樣品含量次之，為0.09645%。

所有樣品蔓荊子黃素含量均超過(guò)藥典規(guī)定之干燥品含量不少于0.030%，符合藥典標(biāo)準(zhǔn)。

龍海采集的不同果熟期樣品，蔓荊子黃素含量總體呈現(xiàn)上升趨勢(shì)。藥材采收期以黃、熟期為好。

3 結(jié)論與建議

3.1 蔓荊子黃素含量是蔓荊子藥材質(zhì)量評(píng)價(jià)的重要指標(biāo)之一，迄今為止，對(duì)福建野生單葉蔓荊子中蔓荊子黃素的含量研究尚屬空白。本研究表明，福建野生單葉蔓荊子中蔓荊子黃素含量符合國(guó)家藥典規(guī)定，且為藥典規(guī)定含量的2～4倍，具有較高的藥用價(jià)值?？蛇M(jìn)一步開發(fā)利用野生品，擴(kuò)大福建野生單葉蔓荊子在藥材市場(chǎng)的占有率。

3.2 單葉蔓荊為福建沿海砂質(zhì)海岸常見藥用植物資源，常于沙灘、沙岸或沿海防護(hù)林下成片分布，對(duì)生長(zhǎng)條件要求不高，具有良好的海岸固沙、涵養(yǎng)水源等生態(tài)效益，作為海西沿海岸線生態(tài)綠化物種之一，兼具經(jīng)濟(jì)與生態(tài)雙重效益，具有較大的開發(fā)前景。

［1］ 劉紅燕，彭艷麗，萬(wàn)鵬.蔓荊子本草學(xué)考證［J］.山東中醫(yī)雜志，2006，25(2)：126－128.

［2］ 國(guó)家中藥管理局《中華本草》編委會(huì).中華本草：第十八卷第六冊(cè)［M］.上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，1999.

［3］ 南京中醫(yī)藥大學(xué).中藥大辭典：下冊(cè)［M］.2版.上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，2006：3552 －3555.

［4］ 中國(guó)科學(xué)院中國(guó)植物志編寫委員會(huì).中國(guó)植物志：第五十三卷第一分冊(cè)［M］.北京：科學(xué)出版社，1984：91 －92.

［5］ 福建省科學(xué)技術(shù)委員會(huì)《福建植物志》編寫組.福建植物志：第四卷［M］.福州：福建科學(xué)技術(shù)出版社，1989：538 －542.

［6］ 王冬，李秋紅，周凱.蔓荊子的化學(xué)、藥理與炮制研究進(jìn)展［J］.中醫(yī)藥學(xué)報(bào)，2008，36(1)：69 －71.

［7］ 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(一部)［M］.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：253.

Contents Analysis on Total Flavones and Vitexicarpin of Fructus Viticis of Vitex trifolia L.var.simplifolia from Different Wild Areas in Fujian

Liu Xiaofen ，Yang Chengzi，Huang Zehao，Cai Yuanshu，Chen Mingjie
(College of Pharmacy，F(xiàn)ujian University of Traditional Chinese Medicine，F(xiàn)uzhou 350818，China)

To analyze the contents of the total flavones and vitexicarpin，in order to compare the quality stand of fructus viticis from Vitex trifolia L.var.simplifolia Cham.harvested from different wild areas of Fujian.Total flavones was obtained by Soxhlet extraction，contents were analyzed by UV.Contents of vitexicarpin were analyzed by HPLC.The content of total flavonids was from 7.081%to 10.792%，the average content was 9.040%.The content of vitexicarpin was 0.06170%to 0.12578%，the average content was 0.08878%.So，the quality stand of fructus viticis from Vitex trifolia L.var.simplifolia Cham.harvested from different wild areas of Fujian can accord with China Pharmacopoeia，provides reference for further development and use.

Fructus Viticis;Vitex trifolia L.var.simplifolia Cham;total flavones;vitexicarpin

R284

A

1006－9690(2012)03－0032－04

10.3969/j.issn.1006－9690.2012.03.010

2011－10－18

福建中醫(yī)學(xué)院服務(wù)海西重點(diǎn)建設(shè)項(xiàng)目之五(No.5)福建省藥用植物資源普查

劉小芬(1977－)，女，福建東山人，講師，碩士，主要從事中草藥種質(zhì)資源與化學(xué)研究。