張春梅，閆 芳，張亞萍

(河西學(xué)院農(nóng)學(xué)與生物技術(shù)學(xué)院，甘肅張掖734000)

不同激素對銀斑百里香愈傷組織培養(yǎng)的影響

張春梅，閆 芳，張亞萍

(河西學(xué)院農(nóng)學(xué)與生物技術(shù)學(xué)院，甘肅張掖734000)

以銀斑百里香種子為試材，比較了不同濃度的NAA和2，4－D與6－BA對百里香愈傷組織誘導(dǎo)效果的影響。結(jié)果表明：NAA在0.15(mg/L)和2，4－D在0.9(mg/L)是誘導(dǎo)銀斑百里香種子產(chǎn)生愈傷組織的最佳濃度;MS+NAA(0.15mg/L)+6－BA(0.6mg/L)和 MS+2，4 －D(0.9mg/L)+6－BA(0.6mg/L)誘導(dǎo)的效果最佳，建立了百里香愈傷組織培養(yǎng)的實驗體系。

百里香;激素;組織培養(yǎng)

百里香(Thymus mongolicus)，俗稱“地椒、地姜、地花椒、麝香草”，是唇形科半灌木芳香植物。原產(chǎn)于地中海南岸，全球約300～400個種，我國有11個種，2個變種，主要分布于西北高原，包括甘肅、陜西、青海、寧夏、新疆、北京、東北及河北、山西北部、內(nèi)蒙古多石山地、黃土丘陵和沙地上［1］，是世界許多國家承認(rèn)的香辛料之一［2］，不但可以鮮食、做調(diào)味保健品［3］，而且，因含有黃酮類成分而全草入藥，是一種廣譜性藥物，具有行氣止痛、防暑避暑、補(bǔ)肝明目、滋胃潤肺、利尿排水、抗病毒、殺菌、通經(jīng)、抗痙攣、驅(qū)蠕蟲、升血壓、刺激白血球等功效，是強(qiáng)力的天然“抗生素”［4］，在醫(yī)藥、傳統(tǒng)日用化工及精細(xì)化工等領(lǐng)域得到廣泛應(yīng)用，具有極好的開發(fā)利用價值。通過植物組織培養(yǎng)方法快速繁殖百里香，不但加速品種繁殖速度，還可擴(kuò)大種質(zhì)資源，保持優(yōu)良品種的種性。種子是建立植物無菌體系的良好外植體［5］，但百里香結(jié)實量低，種子敗育多［6］。本研究采用銀斑百里香種子做為實驗材料，探討百里香培養(yǎng)基中不同種類、濃度的生長激素配合使用對百里香愈傷組織培養(yǎng)的影響，成功建立了百里香愈傷組織培養(yǎng)的實驗體系。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

銀斑百里香(T.mongolicus)種子，采自張掖市大滿鄉(xiāng)。

1.2 實驗方法

以MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，NAA設(shè)0.1 mg/L、0.15 mg/L、0.2 mg/L、0.25 mg/L 4 個濃度，6－BA 設(shè) 0.4 mg/L、0.6mg/L、0.8 mg/L、1.0 mg/L 4個濃度，2，4 －D 設(shè)0.3 mg/L、0.6mg/L、0.9 mg/L、1.2 mg/L 4個濃度。研究不同種類、濃度的生長激素配比對百里香愈傷組織培養(yǎng)的影響。每處理接種30瓶。接種7 d后檢查，移除被污染培養(yǎng)基，統(tǒng)計生長情況。

1.3 接種條件及培養(yǎng)條件

將百里香種子用紗布包好，至于自來水沖洗10 min，瀝干水分后置于超凈工作臺上。取250粒種子放入三角瓶中，75%酒精消毒45 s，無菌水沖洗3次，再用活性氯含量為8% ～9%的NaClO2消毒4 min，再將包好的種子在無菌水中搖動使與水充分接觸，重復(fù)沖洗5次，瀝干置于接種盤上備用。

在無菌操作室中，將滅菌好的百里香種子，接種到含有不同濃度NAA和6－BA配比的MS培養(yǎng)基中，25個處理，3次重復(fù)。各培養(yǎng)基中蔗糖濃度6%，瓊脂4%，培養(yǎng)基滅菌前pH調(diào)至5.8。培養(yǎng)溫度(25±2)℃，光照時間為24 h/d，光照強(qiáng)度為2 000 lx，培養(yǎng)30 d后調(diào)查其生長狀況。

2 結(jié)果與分析

2.1 NAA與6－BA配比對百里香組培苗生長狀況的影響

以MS為基本培養(yǎng)基，使用不同濃度的NAA和6－BA做比較試驗，15 d后調(diào)查外植體萌發(fā)情況。

表1 NAA對百里香組培苗生長狀況的影響

表2 不同濃度的NAA和6－BA配比對百里香組培苗生長狀況的影響

表3 NAA和6－BA交互作用效果方差分析結(jié)果

如表1、2、3所示，0.15(mg/L)NAA 處理與其他濃度間均達(dá)到極顯著水平，組培苗生長狀況為最好;NAA和6－BA各組合間均達(dá)到極顯著水平，結(jié)果表明，MS+NAA(0.15 mg/L)+6－BA(0.6mg/L)誘導(dǎo)的效果最佳。

2.2 不同濃度的2，4－D和6－BA配比對百里香組培苗生長狀況的影響

以MS為基本培養(yǎng)基，不同濃度的2，4－D和6－BA配比對百里香愈傷組織有不同影響(結(jié)果見表 4、表5)。

表4 2，4－D對百里香組培苗生長狀況的影響

表5 不同濃度的2，4－D和6－BA配比對百里香組培苗生長狀況的影響

表6 NAA和6－BA作用效果方差分析結(jié)果顯示

如表4、5、6所示，2，4 －D(0.9 mg/L)處理與其他濃度間均達(dá)到極顯著水平，誘導(dǎo)效果最佳;2，4－D和6－BA各組合間均達(dá)到極顯著水平，結(jié)果表明，MS+2，4－D(0.9 mg/L)+6－BA(0.6mg/L)誘導(dǎo)的效果最佳。

3 結(jié)論與討論

在 20世紀(jì) 80年代，F(xiàn)urmanowa等對 Th.vulgaris進(jìn)行了百里香的組織培養(yǎng)，并獲得了再生植株。Mendes等［7］研究了百里香的生根。我國的學(xué)者在百里香屬植物的組織培養(yǎng)方面也取得了一定的進(jìn)展［5，8－9］。但與本試驗中配制的培養(yǎng)基不同，說明百里香愈傷組織的誘導(dǎo)對培養(yǎng)基中生長素和細(xì)胞分裂素的含量要求不高，此方法成功建立了一個百里香愈傷組織培養(yǎng)的實驗體系。愈傷組織的形成過程是一個培養(yǎng)基成分、外植體的生理狀態(tài)、光照條件及植物基因型等諸多因素之間相互作用的復(fù)雜過程。其中，生長調(diào)節(jié)物質(zhì)的種類、含量及配比是調(diào)控植物器官產(chǎn)生愈傷組織的主導(dǎo)因素。因此，誘導(dǎo)培養(yǎng)基中生長調(diào)節(jié)劑的種類、濃度與組合對愈傷組織形成起著至關(guān)重要的作用。綜上所述，在NAA為0.1～0.25(mg/L)和2，4－D 為0.3～1.2(mg/L)之間的濃度范圍分別和6－BA互作，銀斑百里香種子均能發(fā)芽，其中MS+NAA(0.15 mg/L+6－BA(0.6mg/L)和MS+2，4－D(0.9 mg/L)+6－BA(0.6mg/L)誘導(dǎo)的效果最佳，NAA 0.15(mg/L)和2，4－D 0.9(mg/L)的濃度為銀斑百里香種子誘導(dǎo)愈傷組織的最佳激素濃度。

而在6－BA對百里香種子萌芽生長的影響分析中并不是很明確，有待進(jìn)一步的研究。

［1］ 劉云斌.百里香天然資源及其園林應(yīng)用［J］.林業(yè)實用技術(shù)，2005(2)：43 －44.

［2］ 樊明濤，陳錦屏.百里香提取物抑菌特性的研究［J］.微生物學(xué)報，2001，41(4)：499 －504.

［3］ 劉軍.亞洲百里香不定芽和愈傷組織的誘導(dǎo)［J］.內(nèi)蒙古科技與經(jīng)濟(jì)，2010(5)：56－57.

［4］ 趙穎，武玲.百里香的組織培養(yǎng)與快速繁殖技術(shù)［J］.內(nèi)蒙古林業(yè)科技，2009(5)：44 －45.

［5］ 魏春雁.百里香研究［M］.長春：吉林科學(xué)技術(shù)出版社，2004.

［6］ 周俊輝，周厚高，劉花全.植物組織培養(yǎng)中的內(nèi)生細(xì)菌污染問題［J］.廣西植物，2003，23(1)：4147.

［7］ Mendes M L.In vitro cloning of Thymus mastichina L.［J］.Fieldgrown Plants Acta Horticulture，1999，502：213.

［8］ 趙慶臻，閻華超，程霜，等.地椒的組織培養(yǎng)及植株再生［J］.植物生理學(xué)通訊，2002，38(4)：357.

［9］ 沙紅.幾種藥用芳香植物組織培養(yǎng)快速繁殖的研究［D］.烏魯木齊：新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)，2004.

Effects on Different Composed Hormones on the Thymus mongolicus Callus Culture

Zhang Chunmei，Yan Fang，Zhang Yaping
(College of Agriculture and Biology Technology，Hexi University，Zhangye 734000，China)

The study compared the effect of various concentration of plant－growing hormones such as NAA，2，4－D and 6－BA on seeds of Thymus mongolicus for inducing and propagating callus.The results showed that MS+NAA 0.15 mg·L－1+6－ BA 0.6mg·L－1and MS+2，4 － D 0.9 mg·L－1+6－ BA 0.6mg·L－1were suitable for inducing and propagating callus .In addition，NAA 0.15 mg·L－1and 2，4 － D 0.9 mg·L－1were optimum concentration for inducing the callus of Thymus mongolicus，We have established the experimental system of the Thymus mongolicus callus culture.

Thymus mongolicus;plant growth hormones;callus culture

S567

A

1006－9690(2012)03－0029－03

10.3969/j.issn.1006－9690.2012.03.009

2011－11－15

甘肅省高校河西走廊特色資源利用省級重點實驗室項目(2010XZ1003)

張春梅(1978－)，女，博士，副教授，主要從事設(shè)施園藝與植物逆境生理和種苗繁育技術(shù)方面的研究。E－mail：zazcm197828@163.com