余 鵬，呂 鵬，王慧忠

（滁州學院 生物與食品工程學院，安徽 滁州 239000）

滁州市瑯琊山明黨參可溶性多糖分析

余 鵬，呂 鵬，王慧忠

（滁州學院 生物與食品工程學院，安徽 滁州 239000）

分別采用苯酚－硫酸法測定了采自滁州市瑯琊山的明黨參根及莖葉、藥房購買的明黨參和參照物黨參中可溶性總糖含量、還原性多糖含量；利用薄層層析法定性分析了瑯琊山明黨參和藥房購買的明黨參多糖組成。結(jié)果表明，瑯琊山明黨參根中的可溶性總糖含量為4.07%，還原性多糖含量為4.58%。而藥房購買的明黨參中可溶性總糖含量達到了8.18%，還原性多糖含量為9.24%。利用優(yōu)化后的展開劑正丁醇－異丙醇－乙酸－水（7：5：2：2）展層測定出瑯琊山明黨參根的樣品中除了半乳糖外應該還含有分子量大于半乳糖的未知的糖，而購買的樣品中除了麥芽糖和半乳糖外還含有分子量大于半乳糖的糖類。

明黨參多糖；明黨參可溶性還原糖；展開劑；薄層層析法

明黨參（ChangiumsmyrnioidesWollf）是我國特有傘形科單種屬植物，其藥用始于明、清時期，主要分布于我國華東地區(qū)，現(xiàn)已被列入我國重點保護的珍稀瀕危植物 。明黨參是多產(chǎn)于江、浙、皖，銷于港澳及東南亞地區(qū)名貴中藥材之一，習作藥膳及滋補強壯劑，享有較高的藥用價值。現(xiàn)為《中國藥典》常用中藥，具有潤肺化痰，養(yǎng)陰和胃，平肝，解毒的功效［1］。

現(xiàn)有的文獻中針對植物藥明黨參中的皂苷類、揮發(fā)油類的活性物質(zhì)研究比較多［2］。對于明黨參中多糖含量檢索到利用紅外光譜和核磁共振波譜的實驗成果［3］。目前，多糖組分鑒別方法多采用紫外－ 可見光譜和薄層層析法［4］，后者對實驗設備和經(jīng)費的要求相對前者很低。而薄層層析法鑒定在其它的植物材料中已有很多報道。不同的實驗材料由于多糖中單糖組成的不同，在方法上存在較大差異［5－7］。由于明黨參作為滁州的地產(chǎn)珍貴藥材，選取滁州市瑯琊山的明黨參作為研究對象具有一定意義。本文通過對滁州市瑯琊山明黨參多糖的提取、純化、水解和薄層層析法分離建立了一種簡便易行的明黨參多糖組分鑒別的薄層層析法，以初步比較準確的鑒定滁州市瑯琊山明黨參中多糖組分。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

1.1.1 明黨參樣品的采集及處理

明黨參采自安徽省滁州市瑯琊山，標本經(jīng)過指導老師鑒定，并用《中國植物志》圖片及網(wǎng)絡圖片做過對比確認，系傘形科明黨參屬的明黨參。采挖的明黨參經(jīng)清洗后在70℃左右烘箱中烘干，部分根系去皮及沸水中0.5h蒸煮初加工。為了作更充分的比較在滁州市大型藥店中購買部分明黨參根作為對照，并購置了炮制過的桔?？泣h參屬黨參（Radix Codonopsis Pilosulae）為參比對照。所有樣品經(jīng)烘干后用植物粉碎機粉碎過60目篩后備用。

1.1.2 單糖標樣及其貯備液配置

葡糖糖 、L－阿拉伯糖、麥芽糖 、半乳糖 均為分析純 。用容量瓶分別配置濃度為10mg／mL標準單糖溶液，放于冰箱中存放、備用。

1.1.3 測糖含量藥品

實驗中采用苯酚、濃硫酸、正丁醇、異丙醇、乙酸、二苯胺、苯胺、磷酸、丙酮等藥品為分析純，均購自試劑商店。水為超純水本校實驗室超純水發(fā)生器自制。

1.1.4 展開劑及其組成

展開劑1：正丁醇－異丙醇－乙酸－水（7－5－2－4）；展開劑2：正丁醇－異丙醇－乙酸－水（7－5－1－4）；展開劑3：正丁醇－異丙醇－乙酸－水（7－5－2－2）。

1.1.5 顯色劑配置

在200ml燒杯中加入2g二苯胺、2mL苯胺、10mL磷酸和100ml丙酮，攪拌混勻，如果出現(xiàn)白色不溶物質(zhì)可通過加熱使其溶解。

1.1.6 硅膠板

薄層層析硅膠GF254（10cm×5cm×10mm）板均為安徽良臣硅源材料有限公司產(chǎn)品，用前將硅膠板活化，即放入105℃烘箱中干燥2h，取出在干燥器中冷卻至室溫。

1.2 儀器與設備

F8AN22253AF8AN28超純水發(fā)生器（美國密理博），上海光譜Spectrum752紫光－可見光分光光度計，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 ，KQ2200B型超聲波發(fā)生器。

1.3 方法

1.3.1 可溶性總糖的測定

（1）樣品中可溶性總糖物質(zhì)的提取。分別稱取瑯琊山產(chǎn)明黨參、市售明黨參和黨參的5種樣品5g，按文獻8提取，溶劑為30%乙醇，濃縮至10ml備用［8］。

（2）可溶性總糖的純化。可溶性總糖的制備和純化參照文獻9方法進行［9］。

（3）標準曲線及其制定。標準曲線制定及線性方程的獲得參照文獻10進行［10］。

（4）樣品中可溶性總糖含量的測定。取上述樣品1ml于試管，加入1ml9%苯酚溶液，再在試管中迅速加入5ml濃硫酸，使混合液混勻，沸水浴0.5h，在室溫下放置20min在波長290nm進行比色測定。根據(jù)不同濃度葡糖糖吸收值A，再換算得到可溶性總糖的含量。

（5）樣品中可溶性還原糖含量的測定。分別取至試管中加入6mol／L HCl 0.5ml，攪勻后沸水浴0.5h，冷卻后用NaCO3中和至中性，得可溶性還原糖樣品備用?？扇苄赃€原糖的測定與可溶性總糖含量一樣采取了苯酚硫酸法。

1.3.2 明黨參樣品中多糖板層析方法初探

1.3.2.1 樣品中多糖的獲取

1.3.2.1.1 樣品的獲取

將提取的可溶性總糖濃縮并且純化后定容在20ml容量瓶中備用。

1.3.2.1.2 樣品的酸解

取10ml可溶性總糖樣品至試管中加入6mol／L HCl 5ml，攪勻后沸水浴0.5h，冷卻后用Na2CO3中和至中性，即得到多糖樣品。

1.3.2.2 TCL法分析多糖組分

點樣：在活化后的薄層板上點樣，點樣時用微量注射器將10μL樣品液或標準單糖液點到活化的板上，在每塊板上點樣6～7個樣品，樣點間隔2.5cm左右。

展層：將選定的展開劑倒入層析缸中進行，待缸內(nèi)被展開劑蒸汽飽和，然后將點好樣的薄層板底邊向下迅速斜置缸內(nèi)溶劑中，密封好層析缸即可。3種不同展開劑進行優(yōu)化時展開環(huán)境都一樣。

顯色：將展開好的板置于105℃的烘箱中烘烤0.5h后拿出，將顯色劑均勻噴灑到硅膠板上，再將硅膠板置于105℃的烘箱中烘烤0.5h。取出觀察樣斑。

如果需要兩次展開時即在一次展開后將硅膠板置于烘箱中烘烤0.5h后置于層析缸中展開，待二次層析后再顯色烘烤。

2 結(jié)果與分析

2.1 明黨參和黨參中可溶性總糖含量

經(jīng)試驗獲得葡萄糖標準曲線為y＝3.6498x－0.0229（R2＝0.9936）。

從測定的幾種樣品中可溶性總糖含量看，明黨參中莖葉樣品中含量較低，根系中含量較高。其中瑯琊山上采集到的明黨參根系中可溶性總糖含量達到4.07%，通過簡單加工的明黨參中可溶性總糖的含量為3.08%，明黨參莖葉中可溶性總糖含量僅2.19%，但是藥房購買的黨參中可溶性總糖含量高達7.23%，藥房購買的明黨參中可溶性總糖含量達到了8.18%。明黨參及黨參中可溶性總糖含量見表1。

表1 五種不同樣品中可溶性總糖和還原糖的含量

實驗中測定的藥房購買的明黨參和黨參中可溶性總糖含量明顯高于瑯琊山明黨參，出現(xiàn)這一結(jié)果的原因可能是由于明黨參在藥材炮制過程中有添加了蜂蜜等物質(zhì)。而明黨參根系與莖葉中可溶性總糖含量可以看出根系中的可溶性總糖含量遠高于莖葉中的含量，其原因是根系為植物重要的營養(yǎng)物質(zhì)貯存器官，基礎代謝與次生代謝的產(chǎn)物基本上都積累在貯存器官中。市場購買的明黨參和黨參中可溶性總糖含量比較接近，其中原因是因加工炮制所致還是植物本身含量上的差異較小，有待進一步分析。

2.2 明黨參和黨參中可溶性還原糖含量

由于可溶性還原糖是由樣品中可溶性總糖分解而來，所以各種樣品中的可溶性還原糖含量大小關系與總糖含量大小關系一致?，樼鹕缴厦鼽h參可溶性還原糖含量為4.59%，通過簡單加工的明黨參樣品中可溶性還原糖的含量為4.23%，明黨參莖葉中可溶性還原糖含量僅2.87%，而藥房購買的黨參中可溶性還原糖含量高達9.96%，藥房購買的明黨參中可溶性還原糖含量也有9.24%。

2.3 明黨參中多糖組分

為進一步分析明黨參多糖的組成成分，通過薄層析方法定性分析了明黨參中的多糖組分。

2.3.1 展開劑的優(yōu)化

為使分析效果及結(jié)果達到理想水平，結(jié)合資料，先進行薄層分析的優(yōu)化實驗。薄層層析分離效果的好壞，很大程度上取決于展開劑的組成和配比。利用展開劑1正丁醇－異丙醇－乙酸－水（7－5－2－4）進行展開，發(fā)現(xiàn)樣斑并不清晰，而展開劑2正丁醇－異丙醇－乙酸－水（7－5－1－4）獲得的樣斑同樣渾濁，只有展開劑3正丁醇－異丙醇－乙酸－水（7－5－2－2）得到的樣斑十分圓潤光滑，樣斑還呈現(xiàn)不同的光鮮的顏色。說明該展開劑3可以得到滿意的分析結(jié)果，展開劑優(yōu)化結(jié)果見圖1。

圖1三種展開劑對于明黨參根系中多糖組成薄層析結(jié)果

2.3.2 明黨參根系中多糖組分分析

（1）瑯琊山采集明黨參根中多糖組分薄層析。利用薄層析優(yōu)化獲得的方法對瑯琊山明黨參根中的多糖組分的分析結(jié)果見如圖2。

圖2 明黨參根系中多糖組成薄層析結(jié)果

明黨參樣品進行薄層析分析發(fā)現(xiàn)滁州市瑯琊山上明黨參樣品中除了半乳糖外應該還含有分子量大于半乳糖的未知的糖類。圖中酸解樣會跑出很多個樣斑，這一現(xiàn)象主要是采用二次展開導致的結(jié)果。對照標樣的遷移率，可知瑯琊山明黨參多糖至少有兩種以上的組分，其中組分一是半乳糖，另一組分有待進一步鑒定。

（2）市場購買明黨參根中的多糖組分薄層析。利用薄層析優(yōu)化獲得的方法對市場購買明黨參根中的多糖組分的分析結(jié)果見圖3。

圖3 市場購買的黨參根系中多糖組成薄層析結(jié)果

通過圖3中兩個圖顯示的結(jié)果，發(fā)現(xiàn)在購買的明黨參樣品中除了麥芽糖、半乳糖外還含有一種分子量大于半乳糖的糖類。

綜合以上對在瑯琊山上采集的明黨參樣品和購買的明黨參樣品進行薄層析分析后，發(fā)現(xiàn)明黨參樣品中除了半乳糖外應該還含有分子量大于半乳糖的未知的糖，而購買的樣品中除了麥芽糖和半乳糖外還含有種分子量大于半乳糖的糖類。這些糖類應該是來自對于成藥的加工炮制過程中添加的例如蜂蜜類等物質(zhì)。

3 討論與結(jié)論

（1）多糖是構(gòu)成中藥材中大分子物質(zhì)的主要成分之一，多糖類物質(zhì)不僅能夠作為能量資源和結(jié)構(gòu)材料，更重要的是可以參與生命現(xiàn)象中細胞的各種活動，植物多糖抗腫瘤、抗感染、降血糖、降血脂、抗病毒以及抗衰老等方面具有獨特的功效，有些可作為或已經(jīng)成為治療疾病的藥物和保健食品。

（2）實驗測定瑯琊山上采集到的明黨參可溶性總糖含量達到4.07%，簡單加工的明黨參樣品中可溶性總糖的含量為3.08%。而可溶性還原糖含量分別為4.59%、4.23%?？梢姮樼鹕矫鼽h參中可溶性總糖以及還原性糖含量較豐富，具有較高的開發(fā)價值 。

（3）利用層析方法優(yōu)化結(jié)果知展開劑用正丁醇－異丙醇－乙酸－水（7－5－2－2），顯示劑用二苯胺2g，苯胺2mL，磷酸10mL，丙酮100mL可以獲得較好分析結(jié)果。

（4）研究結(jié)果可知瑯琊山明黨參多糖組分中有半乳糖，以及分子量大于半乳糖的其他成分，研究結(jié)果與張林維等對藥用植物明黨參多糖的研究中指出的其組成為葡糖糖、半乳糖、阿拉伯糖等單糖和各種多糖成分與本實驗結(jié)果一致。

［1］李 祥，陳建偉，方泰惠.中國特有植物明黨參化學成分和藥理研究進展［J］.中國野生植物資源，1998，17（2），13－16.

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Analysis of Extraction Process of SolublePolysaccharides in Changium Smyrnioides in Chuzhou Langya Mountains

Yu Peng， Lv Peng， Wang Huizhong

Phenol hydrate－sulfuric was used to determine the soluble polysaccharide and reductive polysaccharides in the root and stem of Changium smyrnioide collected from the Langya mountains in chuzhou and Changium smyrnioides and Radix Codonopsis bought from pharmacy.By using thin chromatography to analyse polysaccharide component quantitative in the Langya mountains and Changium smyrnioides from pharmacy，the results showed that the content of soluble polysaccharides of Changium smyrnioides from Langya mountains is 3.075%，the content of reductive polysaccharide is 4.585%.The same content of the Changium smyrnioides from pharmacy respectively is 8.18%and 9.24%.Quantitative determination results showed that the polysaccharides mainly composed of the polysaccharide maltose，half lactose and some unknown sugar exist in Changium Smyrnioides from Langya mountains and the ones bought from pharmacy.

soluble polysaccharides of Changium smyrnioides；reductive polysaccharides of Changium smyrnioides；developing solvents；thin－layer chromatography（TCL）

Q949.9

A

1673-1794（2012）05-0053-04

余 鵬（1991－），女，安徽宣城人，滁州學院生物與食品工程學院學生；通訊作者：王慧忠，教授，Wanghuizhong＠126.com。

滁州學院大學生科研項目（2011xs002），滁州學院人才引進項目資助

2012-01-12