蘇金仁，陳 瑾，黃秀深，張豐華，劉童婷，陳 佳

（1.成都中醫(yī)藥大學，四川成都610075； 2.四川好醫(yī)生攀西藥業(yè)有限責任公司,四川成都615000）

美洲大蠊（peripLaneta americana）俗稱蟑螂、偷油郎等，是蜚蠊的三大優(yōu)勢種之一，隸屬節(jié)肢動物門（phyLum arthropoda）昆蟲綱（insecta）有翅亞綱（pterygota）蜚蠊目（blattaria）。全世界發(fā)現(xiàn)并記載的蟑螂種類約3 000余種，廣泛分布于熱帶、亞熱帶地區(qū)，在我國南方也有廣泛分布，蜚蠊作為藥用最早記載見于《神農(nóng)本草經(jīng)》，被列入中品，“味咸、寒，生川澤，治血瘀 堅、寒熱，破積聚，咽喉痹，內(nèi)寒無子”?！侗静菥V目》中記載，捕捉后用沸水燙死，曬干或烘干，以干燥或新鮮全體入藥，有活血化瘀、解毒消疳、利水消腫等功效［1］。民間有用蟑螂治療肝炎、肝硬化、肝癌者［2］。目前對于美洲大蠊醇提物抗腫瘤的報道甚多，但從全蟲角度的研究甚少，本研究正是從全蟲角度來觀察其對肝癌的治療效果。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

美洲大蠊精粉（未脫脂型、脫脂型），由綿陽好醫(yī)生中藥飲片有限公司提供，批號：101201；環(huán)磷酰胺（CTX），通化茂祥制藥有限公司，批準文號：國藥準字H22022234；氟尿嘧啶注射液，天津金耀氨基酸有限公司，批準文號：H12020959；昆明種雌性清潔級小鼠，體重18 g～22 g，由成都達碩生物科技有限公司提供，SCXK（川）2008-24，質量檢測單位：四川省實驗動物檢測中心；小鼠H22細胞株，由南京凱基生物科技發(fā)展有限公司提供，目錄號KG080。昆明種清潔級雌性小鼠550只，體重18 g～22 g。

1.2 實驗方法

1.2.1 H22細胞懸液的制備 將腹腔接種H22腹水細胞7 d的瘤源鼠脫頸處死，固定于超凈工作臺的蠟板上，腹部消毒處理后，剪開腹部皮膚，用巴氏吸管吸取乳白色腹水于燒杯中（燒杯置于冰袋上），按1∶3添加生理鹽水，吹打均勻；在小鼠體內(nèi)傳2代，調細胞數(shù)濃度為5.0×106個/mL，腫瘤細胞活力在95%以上。

1.2.2 動物分組 按體重將小鼠隨機分為空白組、模型組、5-FU組、CTX組、治療組（美洲大蠊未脫脂粉及脫脂粉各設大、中、小劑量組），每組10只，實體瘤和腹水瘤實驗均重復3批。

1.2.3 動物模型制作 將濃度為5.0×106個/mL的H22細胞懸液接種到健康小鼠右腋皮下，0.2 mL/只，建立實體瘤模型；于小鼠腹腔內(nèi)接種H22細胞懸液，0.2 mL/只，建立腹水瘤模型。

1.2.4 給藥、取材 5-FU組、CTX組隔日腹腔分別注射CTX、5-FU，0.2 mL/只，共5次；治療組按大、中、小劑量分別予以相應藥物灌胃，0.4 mL/只，連續(xù)10 d?？瞻捉M及模型組予以生理鹽水灌胃，0.4 mL/只，連續(xù)10 d。在最后一次給藥結束24 h后，分別稱取小鼠體重，眼眶取血后處死，剝?nèi)∧[瘤并稱重，計算抑瘤率。對于腹水瘤模型實驗，在給藥10 d后，以20 d為限，記錄各組小鼠死亡情況，統(tǒng)計并計算對小鼠生命時間延長率。

2 結果

2.1 美洲大蠊對小鼠肝癌H22（實體型）生長的抑制作用

結果見表1。表1選用方差分析進行統(tǒng)計學分析，與對照組兩兩比較時，方差齊性選用LSD法，方差不齊時選用Tamhane法。末次體重指含瘤體重。實驗結果表明，與模型組比較，美洲大蠊精粉脫脂及未脫脂型中、小劑量組、CTX組、5-FU組小鼠瘤重降低，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.01）。第二、三批與第一批結果顯示趨勢一致。

2.2 美洲大蠊對H22（腹水型）小鼠生存時間的影響

結果見表2。表2選用非參數(shù)法KruskaL-WaLLis H法進行顯著性檢驗，兩兩比較時，進行Nemenyi秩和檢驗。實驗結果表明，與模型組比較，美洲大蠊精粉脫脂型中劑量組、5-FU組小鼠生存天數(shù)延長，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05，P<0.01）。與第二、三批實驗結果顯示趨勢一致。

表1 美洲大蠊對小鼠肝癌H22（實體型）生長的抑制作用（第一批）（±s）

表1 美洲大蠊對小鼠肝癌H22（實體型）生長的抑制作用（第一批）（±s）

注：與模型組比較，1）P<0.0 1

抑瘤率（%）-52.48 5-FU組 25 口服給藥×5 10 20.28±1.54 24.76±1.28 60.11美洲大蠊（?。? 125 腹腔給藥×10 10 21.95±2.35 22.73±1.17 41.03美洲大蠊（中）2 250 腹腔給藥×10 10 20.37±1.16 23.39±0.71 37.71美洲大蠊（大）4 500 腹腔給藥×10 10 21.81±2.08 21.23±1.16 1.35脫脂大蠊（?。? 125 腹腔給藥×10 10 20.84±1.54 22.14±1.22 15.85脫脂大蠊（中）2 250 腹腔給藥×10 10 21.80±1.57 23.80±0.87 28.93脫脂大蠊（大）4 500 腹腔給藥×10 10 21.58±0.97 24.25±0.76 4.37 10 10 10 10 10 10 10 0.55±0.121）0.82±0.131）0.87±0.211）1.37±0.19 1.17±0.151）0.99±0.111）1.33±0.18 0.00 0.00 0.00 0.81 0.01 0.00 0.42

表2 美洲大蠊對H22（腹水型）小鼠生存時間的影響（第一批）（±s）

表2 美洲大蠊對H22（腹水型）小鼠生存時間的影響（第一批）（±s）

注：與模型組比較，1）P<0.0 5，2）P<0.0 1

生存天數(shù)（d）P值 ILS（%）始 末模型組 — 腹腔給藥×10 10 0 21.61±1.77 17.10±3.00 - -CTX組 20 口服給藥×5 10 0 22.28±1.02 20.90±4.23 0.08 22.22 5-FU組 25 口服給藥×5 10 0 22.85±1.67 23.10±5.002）0.01 35.09美洲大蠊（大）4 500 腹腔給藥×10 10 0 21.88±1.04 14.80±4.24 0.72 -13.45美洲大蠊（中）2 250 腹腔給藥×10 10 0 22.62±1.26 19.50±4.43 0.39 14.04美洲大蠊（?。? 125 腹腔給藥×10 10 0 22.87±1.27 20.40±1.71 0.10 19.30脫脂大蠊（大）4 500 腹腔給藥×10 10 0 22.20±1.78 19.50±2.37 0.35 14.04脫脂大蠊（中）2 250 腹腔給藥×10 10 0 22.69±1.42 21.71±1.981）0.02 26.98脫脂大蠊（?。? 125 腹腔給藥×10 10 0 23.03±1.56 17.11±2.03 1.00 0.06組別 劑量（mg/kg）給藥途徑×次數(shù)n 初始體重（g）

2.3 美洲大蠊對H22（實體型）小鼠血常規(guī)的影響

結果見表3。表3選用方差分析進行顯著性檢驗，與對照組兩兩比較時，方差齊性選用LSD法，方差不齊時選用Tamhane法。結果表明，與空白組比較，各組小鼠單核細胞和紅細胞水平均呈下降趨勢，淋巴細胞除美洲大蠊精粉末脫脂型大劑量組外均呈下降趨勢，而白細胞水平除5-FU組外均呈上升趨勢，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05，P<0.01，P<0.001）。

3討 論

原發(fā)性肝癌（primary Liver cancer，PLC，簡稱肝癌）是原發(fā)于肝細胞或膽管細胞的癌癥，是臨床上最常見的惡性腫瘤之一。大量的臨床實踐證明肝癌是中醫(yī)藥治療最常見到效果的腫瘤之一［3］，因此，不斷加強對中醫(yī)藥治療肝癌的探索倍顯重要。蜚蠊作為一個龐大的昆蟲家族在地球上已經(jīng)存在了3.2億年，與恐龍屬同一時代出現(xiàn)的生物，它是世界上生命力最強、最古老、至今繁衍最成功的昆蟲類群之一［4］。美洲大蠊為其屬中入藥最廣泛的一種，近年來對其研究日益深入，并且開發(fā)出一系列療效確切的新藥，如“康復新滴劑”、“金克膠囊”、“肝龍膠囊”、“消 益肝片”等。美洲大蠊蟲粉有助于提高肉雞體內(nèi)抗氧化酶的活性，清除自由基，增強抗氧化能力。機體抗氧化作用增強，可減少自由基和脂質過氧化產(chǎn)物對機體細胞膜完整性的破壞，從而增強機體免疫力和抗病力［5］。美洲大蠊提取物（APA）具有較好的抑制細胞外基質的合成以及促進其降解的作用［6］。張成桂等［7］對采取新工藝提取的美洲大蠊抗癌活性成分做了體外抗氧化實驗，研究顯示，該混合物主要由一系列小分子多肽組成，占抗癌活性成分的62.7%，總成分清除DPPH·自由基、·OH自由基和總還原能力均表現(xiàn)出量效依賴關系。本實驗研究結果顯示，美洲大蠊對肝癌治療作用確切，未脫脂型美洲大蠊的抑瘤效果隨劑量倍增而遞減，脫脂型美洲大蠊抑瘤效果以中劑量為佳，且能延長荷瘤小鼠的生存時間。白細胞升高對組織損傷是全身的炎癥反應過程［8］，血常規(guī)檢測顯示美洲大蠊小劑量、脫脂型中劑量能在一定程度上控制腫瘤局部炎癥的擴散。美洲大蠊對淋巴細胞、紅細胞、單核細胞亦有影響，所蘊含的意義尚待進一步研究。

表3 美洲大蠊對H22（實體型）小鼠血常規(guī)的影響（±s）

表3 美洲大蠊對H22（實體型）小鼠血常規(guī)的影響（±s）

注：與空白組比較，1）P<0.05，2）P＜0.001；與模型組比較，3）P<0.05，4）P<0.01，5）P＜0.001

組別 樣本量（n） 白細胞（109/L） 淋巴細胞（109/L）單核細胞（109/L）紅細胞（1012/L）空白組 10 2.60±0.14 2.24±0.08 0.87±0.01 2.8±0.08腫瘤對照組 10 4.38±0.452）2.25±0.122）0.50±0.142）2.41±0.192）CTX 組 10 3.18±0.405）1.63±0.192）5）0.61±0.102）2.30±0.082）3）5-FU 組 10 1.49±0.102）5）0.82±0.062）5）0.32±0.022）2.53±0.072）3）美洲大蠊（小）10 3.23±0.152）5）1.62±0.192）5）0.61±0.132）2.15±0.072）5）美洲大蠊（中）10 3.51±0.182）3）1.96±0.062）4）0.58±0.022）2.24±0.092）4）美洲大蠊（大）10 4.10±0.072）2.39±0.11 0.48±0.122）2.21±0.062）5）脫脂大蠊（?。?0 3.80±0.292）1.81±0.261）3）0.54±0.872）2.28±0.092）3）脫脂大蠊（中）10 3.10±0.291）5）1.37±0.132）5）0.48±0.082）2.17±0.172）5）脫脂大蠊（大）10 4.12±0.352）1.89±0.142）5）0.46±0.102）2.15±0.062）5）

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