張 毅，李 郁，劉 文，孫 裴，魏建忠＊

（1.安徽農(nóng)業(yè)大學動物科技學院，安徽合肥230036；2.合肥華杰畜禽養(yǎng)殖有限公司，安徽合肥230031）

豬圓環(huán)病毒病是斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征（Postweaning multisystemic wasting syndrome，PMWS）、豬皮炎與腎病綜合征（Porcine dermatitis and nephropathy syndrome，PDNS）以及繁殖障礙等豬圓環(huán)病毒相關疾?。≒orcine circovirus associated disease，PCVAD）的總稱。研究表明豬圓環(huán)病毒2型（Porcine circovirus type 2，PCV－2）是引起PCVAD的主要病原體［1］。由于豬群感染 PCV－2后，機體免疫功能受到損害，造成并發(fā)或繼發(fā)感染的現(xiàn)象相當嚴重，給養(yǎng)豬業(yè)造成巨大的經(jīng)濟損失。2007年PCV－2疫苗在國外上市以來，疫苗免疫接種已成為預防PCV－2感染的重要手段，大量田間試驗表明，PCV－2疫苗可誘導母豬產(chǎn)生高滴度的PCV－2抗體，能夠提高母豬的繁殖性能，并且可為仔豬提供良好的免疫保護［2－4］。2010年PCV－2疫苗首次在我國推廣使用，部分養(yǎng)殖企業(yè)對疫苗免疫效果了解不足，且國內沒有較全面的PCV－2疫苗免疫接種母豬田間試驗的相關報道。本研究通過對母豬免疫PCV－2疫苗，旨在了解母豬在接種PCV－2疫苗前后生產(chǎn)性能的差異及仔豬母源抗體的變化規(guī)律，為防控PCV－2的感染，制定科學的免疫程序，尤其是仔豬首免日齡的確定提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗時間及地點 2010年8月至2011年11月，合肥某豬場。

1.1.2 試驗用動物與分組 免疫生產(chǎn)母豬640頭，于其中選取同期分娩的4頭不同胎次的經(jīng)產(chǎn)母豬（編號分別為A、B、C、D），及其所產(chǎn)的仔豬隨機抽取5頭（編號分別為 A1－5，B1－5，C1－5，D1－5）。

1.1.3 主要試劑 2×Taq Master Mix、DNA Marker DL 2 000為北京天根生化科技有限公司產(chǎn)品；蛋白酶K、SDS、Tris、TE緩沖液均為上海生工生物工程技術服務有限公司產(chǎn)品；PCV－2－ELISA抗體檢測試劑盒為深圳康百得生物科技有限公司產(chǎn)品；其他試劑均為國產(chǎn)分析純；PCV－2陽性血清為安徽農(nóng)業(yè)大學動物科技學院動物傳染病研究室保存。

1.1.4 PCV－2特異性引物 參照文獻［5］設計引物，引物由上海生工生物工程技術服務有限公司合成，預期目的片段大小為630 bp。引物序列為P1：5′－GGTTACACGGATATTGTAGTCC－3′（22nt）；P2：5′－CGTTACCGCAG AGAAACAC－3′（21nt）

1.2 方法

1.2.1 疫苗及免疫方案 疫苗：豬圓環(huán)病毒2型油佐劑滅活疫苗，批號：L369579。

免疫方案：2010年8月初首免，間隔3周后加強免疫1次，產(chǎn)前4周進行跟胎免疫。免疫接種方式為耳根后肌肉注射，2 mL／頭。

1.2.2 血清中PCV－2核酸的提取 參照文獻［6］進行。

1.2.3 PCV－2特異性基因片段的擴增 反應體系總體積為25μL，其中包括2×Taq Master Mix 12.5μL，上下游引物各0.5μL，雙蒸水6.5μL，DNA模板5μL；反應條件為94℃5 min；94℃45 s，54℃1 min，72℃1 min，35個循環(huán)；72℃ 延伸10 min。

1.2.4 血清中PCV－2抗體的ELISA檢測 按照PCV－2－ELISA抗體檢測試劑盒說明進行操作。

1.2.5 仔豬PCV－2母源抗體及核酸的檢測 試驗母豬（A、B、C、D）在產(chǎn)前1周，經(jīng)前腔靜脈采血并分離血清，檢測PCV－2抗體。

試驗母豬所產(chǎn)仔豬（A1－5，B1－5，C1－5，D1－5）分別在哺乳前、10、20、30、40、50、60日齡時，經(jīng)前腔靜脈采血并分離血清，檢測PCV－2抗體及其核酸。

1.2.6 試驗母豬PCV－2疫苗免疫接種前后生產(chǎn)性能比較 收集試驗母豬免疫接種PCV－2疫苗前（2009年7月至2010年7月，618頭）的生產(chǎn)數(shù)據(jù)，以及試驗母豬免疫接種PCV－2疫苗后（2010年11月至2011年11月，640頭）的生產(chǎn)數(shù)據(jù)，包括窩產(chǎn)仔數(shù)、窩產(chǎn)活仔數(shù)、窩產(chǎn)死胎數(shù)、窩產(chǎn)木乃伊胎數(shù)、窩產(chǎn)弱仔數(shù)、初生重、返情率等。

1.2.7 數(shù)據(jù)處理 采用 EXCEL及SPSS 13.0軟件進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析處理。

2 結果

2.1 仔豬PCV－2母源抗體消長情況

試驗母豬產(chǎn)前1周PCV－2抗體水平分別為0.635、1.837、2.090、1.528。4個組新生仔豬在哺乳前幾乎檢測不到PCV－2母源抗體，吮初乳后則逐漸上升，其中 A1－5、B1－5和 D1－5在10日齡時母源抗體水平最高，分別與母豬產(chǎn)前1周抗體水平相當，而C1－5的母源抗體至20日齡達到最高值。之后母源抗體水平均隨日齡的增加而逐漸降低，B1－5和C1－5則在40日齡時出現(xiàn)緩慢上升再下降的現(xiàn)象。統(tǒng)計分析顯示A1－5在10、20、40日齡時，平均抗體水平顯著低于其余各組（P＜0.05），且在50日齡時，平均抗體水平降至臨界值（0.168）以下，其余3組在各檢測日齡段PCV－2平均抗體水平均高于臨界值（表1）。

2.2 仔豬血清PCV－2核酸檢測結果

試驗母豬所產(chǎn)仔豬在哺乳前、10、20、30、40、50、60日齡時采集的血清中均未檢測出PCV－2核酸。

表1 不同日齡仔豬PCV－2母源抗體消長變化情況Table1 The PCV－2 maternal antibody dynamics in diferent ages of piglets

2.3 試驗母豬PCV－2疫苗免疫接種前后的繁殖性能比

對試驗母豬PCV－2疫苗免疫接種后與免疫接種前的繁殖性能進行比較，發(fā)現(xiàn)其窩產(chǎn)仔數(shù)和窩產(chǎn)活仔數(shù)分別增加了0.36頭和0.43頭，差異極顯著（P＜0.01）；仔豬初生重增加0.01 kg，差異顯著（P＜0.05）；窩產(chǎn)弱仔數(shù)減少0.11頭，差異顯著（P＜0.05）；但對窩產(chǎn)死胎數(shù)和窩產(chǎn)木乃伊胎數(shù)沒有明顯影響（表2）。

表2 試驗母豬PCV－2疫苗免疫接種前后的繁殖性能比較Table2 Reproduction performance comparision of test sows both before and after inoculation

3 討論

由PCV－2引起的母豬繁殖障礙等相關疾病給各國養(yǎng)豬業(yè)的發(fā)展造成了嚴重威脅，是繼豬繁殖與呼吸綜合征（PRRS）之后又一影響豬繁殖性能的重要疫病［7］。國外大量田間試驗表明，PCV－2在母豬繁殖失敗中發(fā)揮著決定性作用，母豬免疫接種PCV－2疫苗對豬場恢復收益率有著重要經(jīng)濟意義［8］。德國277個豬場接種PCV－2疫苗后生產(chǎn)收益顯著提高，其窩產(chǎn)仔數(shù)提高0.5頭，窩產(chǎn)活仔數(shù)提高0.5頭，窩產(chǎn)死胎數(shù)降低0.1頭；丹麥一個SPF母豬繁育場免疫接種PCV－2疫苗后窩產(chǎn)仔數(shù)提高了0.7頭，窩產(chǎn)活仔數(shù)提高了1.2頭［2］。本試驗中，母豬PCV－2疫苗免疫接種后與免疫接種前相比較，平均窩產(chǎn)仔數(shù)和窩產(chǎn)活仔數(shù)分別增加了0.36頭和0.43頭，窩產(chǎn)死胎數(shù)降低0.04頭，雖與國外報道的數(shù)據(jù)相比有一些差距，這可能與豬場的管理水平、生產(chǎn)設備等因素相關，但母豬免疫接種PCV－2疫苗后能提高其生產(chǎn)性能是顯而易見的。

豬的胎盤屬上皮絨毛膜類型，母源抗體不能經(jīng)胎盤從母體傳遞給胎兒，而是通過吮吸初乳的方式獲得母源抗體［9－10］。仔豬獲得被動免疫保護的時間有限，在疫病流行地區(qū)，如將母源抗體水平很低或無母源抗體的仔豬長期暴露，風險很大。因此仔豬免疫接種PCV－2疫苗十分必要，能使其主動產(chǎn)生免疫保護力，對后期PCV－2的感染具有高度的抵抗力。最佳首免日齡應在母源抗體能保證仔豬抵御病毒感染，且母源抗體能發(fā)揮最大保護作用的時候［11］。本試驗中仔豬哺乳前母源抗體幾乎為零，其中3組試驗仔豬吮初乳后10日齡時具有較高的抗體水平，至30日齡時迅速下降，隨著日齡的增加而逐漸降低。因此可以確定PCV－2疫苗免疫接種母豬所產(chǎn)仔豬首免為20日齡左右。

哺乳仔豬較高的母源抗體水平能夠降低血清中PCV－2病毒血癥的出現(xiàn)，從而抑制PCV－2在機體內的復制，保護仔豬在早期免受PCV－2感染，并且能減少仔豬糞便、血清和免疫器官中的病毒數(shù)量［12－13］。四組試驗仔豬血清中均未檢測到PCV－2核酸，與李郁等［14］對該豬場PCV－2感染情況的研究結果相比，母豬接種PCV－2疫苗后，使該病毒對仔豬的感染下降，但并不代表該場整個仔豬群都得到了完全保護。國外研究證實仔豬早期初乳攝入量少是引起斷奶仔豬綜合征的一個主要因素［15］。因此在生產(chǎn)實踐中，科學地做好母豬PCV－2疫苗免疫接種，保證新生仔豬及時足量吃好初乳是保證仔豬群具有良好免疫力的重要措施。

綜上所述，母豬產(chǎn)前免疫接種PCV－2疫苗不僅能有效預防由PCV－2感染造成的母豬繁殖障礙，提高母豬繁殖性能，而且可以通過母源抗體的傳遞來預防仔豬發(fā)生早期感染。

［1］夏春香，肖 嘯，李志敏.豬圓環(huán)病毒病研究進展［J］.動物醫(yī)學進展，2005，26（1）：35－38.

［2］于師宇.接種PCV2疫苗對母豬繁殖性能的影響［J］.國外畜牧學：豬與禽，2010，30（6）：10－12.

［3］Fachinger V，Bischoff R，Jedidia S B，et a1.The effect of vaccination against porcine circovirus type 2 in pigs sufering from porcine respiratory disese complex［J］.Vaccine，2008，26：1488－1499.

［4］Fort M，Sibila M，Allepuz A，et a1.Porcine circovirus type 2（PCV2）vaccination of conventional pigs prevents viremia against PCV2 isolates of different genotypes and geographic origins［J］.Vaccine，2008，26：1063－1071.

［5］楊世興，魏建忠，范偉興，等.應用PCR技術檢測豬圓環(huán)病毒［J］.中國畜牧獸醫(yī)，2006，33（12）：70－71.

［6］李 超，魏建忠，淩英濟，等.安徽省豬圓環(huán)病毒2型感染的流行病學調查［J］.中國微生態(tài)學雜志，2010，22（4）：330－332.

［7］楊漢春.豬免疫抑制性疾病的流行特點與控制對策［J］.中國畜牧獸醫(yī)，2004，31（5）：41－43.

［8］Siebel K.Global experiences from the field around one－shot vaccination［J］.Pig Progress，2010，26（1）：11－13.

［9］楊秀平.動物生理學［M］.北京：高等教育出版社，2002：350－402.

［10］王炳艷，李藏蘭，呂 剛，等.豬初乳免疫球蛋白研究進展［J］.動物科學與動物醫(yī)學，2004，21（7）：16－18.

［11］清水實嗣，童光志.仔豬的免疫［J］.國外獸醫(yī)學：畜禽傳染病，1998，13（8）：30－32.

［12］邢海云，趙建增，趙亞榮.豬2型圓環(huán)病毒疫苗的研究進展［J］.中國生物制品學雜志，2009，22（3）：305－308.

［13］徐蘇標.豬圓環(huán)病毒病疫苗免疫母豬的生產(chǎn)現(xiàn)場試驗［J］.國外畜牧學：豬與禽，2008，28（4）：20－22.

［14］李 郁，楊世興，魏建忠，等.安徽省部分豬場豬圓環(huán)病毒2型感染情況調查［J］.中國預防獸醫(yī)學報，2007，29（9）：732－734.

［15］Rose N，Larour G，Le Diguerber G.Risk factors for porcine post－weaning multisystemic wasting syndrome （PMWS）in 149 French farrow－to－finish herds［J］.Prev Vet Med ，2003，61（3）：209－225.