郭宇玲，孫 哲，吳 薇

（南昌大學(xué)第一附屬醫(yī)院腫瘤科，南昌 330006）

肺癌是我國常見的惡性腫瘤之一，嚴(yán)重危害人類健康，目前研究認(rèn)為肺癌的形成是一個多階段、多步驟、多基因參與的過程，腫瘤壞死因子-α（TNF-α）在惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過程中起重要作用，TNF-α可直接殺傷腫瘤細(xì)胞、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡、介導(dǎo)腫瘤溶解，刺激細(xì)胞增殖、促進(jìn)腫瘤血管生成、激活基質(zhì)降解酶，有利于腫瘤浸潤和轉(zhuǎn)移、增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的活性，具有廣泛的誘導(dǎo)炎癥和免疫調(diào)節(jié)功能。腫瘤細(xì)胞可激活單核細(xì)胞且腫瘤細(xì)胞具有自分泌功能從而使惡性腫瘤患者血清TNF-α升高［1-2］。本研究采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）法測定不同分期非小細(xì)胞肺癌患者血清中TNF-α的水平，探討不同分期非小細(xì)胞肺癌患者血清中TNF-α水平的變化及其臨床意義。

1 對象與方法

1.1 研究對象

選擇2008—2009年南昌大學(xué)第一附屬醫(yī)院收治的初治非小細(xì)胞肺癌患者60例（肺癌組），男48例，女 12 例，年齡 38～82 歲，平均（59.2±13.2）歲，均經(jīng)影像學(xué)及病理學(xué)確診，未行放化療及手術(shù)治療，其中鱗癌38例、腺癌22例，Ⅰ＋Ⅱ期 14例、Ⅲa期17例、Ⅲb＋Ⅳ期 29例。選擇同期在本院體檢健康者62例為對照組，男45例，女17例，年齡32～70歲，平均（56.5±9.6）歲，X 線檢查排外肺部疾病。2組一般資料相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），具可比性。

1.2 主要試劑與儀器

人TNF-αELISA試劑盒（北京晶美生物工程有限公司）；JA1003電子天平（上海精科天平廠）、電熱恒溫干燥箱（上海躍進(jìn)醫(yī)療器械廠）、超低溫冰箱（Sanyo，Japan）等。

1.3 研究方法

1）標(biāo)本采集:受試者均于清晨、空腹時采集外周靜脈血標(biāo)本2 mL。

2）標(biāo)本處理:靜脈血自然凝固后，分離血清，-70℃保存待測。

3）ELISA法測定血清TNF-α水平:將試劑盒與標(biāo)本平衡至室溫→配置洗滌液、標(biāo)準(zhǔn)品、生物素化抗體工作液、酶結(jié)合物工作液→取出板條、加樣、孵育→洗板5次→加入生物素化抗體工作液、孵育→洗板5次→加入酶結(jié)合物工作液、孵育→洗板5次→加入顯色劑→加入終止液，混勻后即刻測量OD450值→繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并通過標(biāo)本的OD值在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出濃度。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

2 結(jié)果

2組血清TNF-α水平比較見表1，表1結(jié)果顯示:肺癌組患者血清中TNF-α水平顯著升高,與對照組相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.001）。不同病理類型肺癌患者血清TNF-α水平比較見表2，表2結(jié)果顯示:不同病理類型肺癌患者血清TNF-α水平差異不明顯，腺癌與鱗癌相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。不同臨床分期肺癌患者血清 TNF－α水平比較見表3，表3結(jié)果顯示:隨著病情進(jìn)展,肺癌患者血清TNF－α水平有逐漸增高的趨勢，各臨床分期肺癌患者血清 TNF－α水平相比差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05 或 P＜0.001)。

表1 2組血清TNF－α水平比較 ，ρ／（ng·L-1）

表1 2組血清TNF－α水平比較 ，ρ／（ng·L-1）

*P＜0.001與對照組相比。

組別 n TNF－α 水平對照組 62 75.39±35.45肺癌組 60 242.21±116.97*

表2 不同病理類型肺癌患者血清TNF－α水平比較 ，ρ／（ng·L-1）

表2 不同病理類型肺癌患者血清TNF－α水平比較 ，ρ／（ng·L-1）

病理類型 n TNF－α水平腺癌 22 266.11±130.00鱗癌 38 228.49±109.61

表3 不同臨床分期肺癌患者血清TNF－α水平比較 ，ρ／（ng·L-1）

表3 不同臨床分期肺癌患者血清TNF－α水平比較 ，ρ／（ng·L-1）

*P＜0.001與Ⅰ＋Ⅱ 期相比；﹟P＜0.05與Ⅲa期相比。

臨床分期 n TNF－α水平Ⅰ＋Ⅱ 期 14 125.48±48.92Ⅲa期 17 236.84±89.05*Ⅲb ＋Ⅳ期 29 308.08±116.80*﹟

3 討論

TNF-α是迄今發(fā)現(xiàn)抗腫瘤作用最強(qiáng)的細(xì)胞因子。TNF-α生物學(xué)作用與其水平的關(guān)系密切，低水平TNF-α可增強(qiáng)機(jī)體免疫力，TNF-α水平升高可致免疫力降低，內(nèi)穩(wěn)態(tài)失衡，并引起一系列病理損傷［3-4］。TNF-α水平與惡性腫瘤有相關(guān)性，正常情況下人體分泌少量TNF-α；當(dāng)機(jī)體患惡性腫瘤時，血清TNF-α水平明顯升高，而腫瘤得到有效控制后TNF-α水平則呈下降趨勢；TNF-α高表達(dá)與某些腫瘤晚期惡病質(zhì)有關(guān)；TNF-α表達(dá)水平的高低與某些惡性腫瘤臨床分期及某些腫瘤細(xì)胞分化程度有關(guān)［5-7］。

本研究結(jié)果顯示，肺癌患者血清TNF-α水平明顯高于對照組，且隨分期發(fā)展，其水平逐漸升高，這表明，血清TNF-α水平檢測對肺癌的輔助診斷、疾病分期及活動情況有重要意義；不同病理類型間相比，血清 TNF-α 水平無明顯差異，這與文獻(xiàn)［7］報道一致。肺癌患者體內(nèi)高水平的TNF-α并沒有表現(xiàn)出抑制或殺滅腫瘤的效應(yīng),這可能與TNF-α影響機(jī)體免疫力、促進(jìn)腫瘤血管生成及腫瘤轉(zhuǎn)移有關(guān)；另一個可能的原因是腫瘤細(xì)胞表面缺乏與TNF-α相結(jié)合的TNF受體。

［1］Bastürk B,Yavascaoglu I,Vuruskan H,et al.Cytokine gene polymorphism as potential risk and protective factors in renal cell carcinoma［J］.Cytokine，2005,30（1）:41-45.

［2］余壽益，田華琴，黃志慶.肺癌患者血清sIL-2R、IL-6和TNF-α 水平的測定及其臨床意義［J］.癌癥，2000，19（10）:945.

［3］Locksley R M,Killeen N,Lenardo M J.The TNF receptor superfamilies［J］.Cell，2001,104（4）:487-501.

［4］王俊杰，李忠鋼，楊建良，等.腫瘤患者血清TNF-α變化的臨床意義［J］.中國腫瘤臨床與康復(fù)，1999，6（3）:15.

［5］Seynhaeve A L，de Wilh J H，van Tiel S T，et al.Isolated limb perfusion with actinomycin D and THF-alpha results in improved tumor reponse in soft tissue sarcomabearing rats but is accompanied by sever local toxicity［J］.Br J Cancer，2002，86（7）:1174-1179.

［6］李剛，李珊珊，郝樹凡，等.白細(xì)胞介素-6及腫瘤壞死因子在食道癌組織表達(dá)和預(yù)后的關(guān)系［J］.中國腫瘤臨床與康復(fù)，1998，5（6）:27-28.

［7］呂俊杰，戴天陽，詹福生，等.食管癌患者血清 CEA和TNF-α 的水平和意義［J］. 放射免疫學(xué)雜志，2004，17（5）:350-351.