孫曙光，李玉潔，張明昊

河南中醫(yī)學院基礎醫(yī)學院實驗教學中心 鄭州 450008

女貞子是傳統(tǒng)的扶正固本藥物，為木犀科植物女貞的成熟果實干燥而成[1-2]。研究[3-4]發(fā)現(xiàn)，女貞子有調(diào)節(jié)免疫功能、抗菌、抗炎、抗腫瘤、保肝、降血糖、降血脂及抗衰老等多種藥理作用，臨床上可用于肝腎陰虛、眩暈耳鳴、咽干鼻燥、腰膝酸痛及月經(jīng)量多等多種疾病的治療。目前，以女貞子為主要處方組成的方劑具有補益肝腎、滋陰止血等功效，能夠緩解久病虛損、氣陰不足，促進手術、放、化療后機體正常功能的恢復，在臨床上被廣泛采用[5-6]。女貞子是植物雌激素含量較高的幾種中藥之一。作者采用經(jīng)典的體內(nèi)實驗方法，分析給予不同劑量女貞子水煎劑的性未成熟雌性小鼠體內(nèi)主要臟器系數(shù)的變化，為中藥產(chǎn)品及保健食品的開發(fā)提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 21 d齡昆明種雌性小鼠60只，體質(zhì)量9～12 g，購自河南省實驗動物中心。實驗期間飼喂于河南中醫(yī)學院動物實驗中心，一級環(huán)境條件下飼養(yǎng)，溫度(25±1)℃，控光(12 h明暗相間)，自由飲水、進食。

1.2 藥物與試劑 女貞子購自鄭州市張仲景大藥房(產(chǎn)自河南)，實驗前用自來水浸泡30 min后煎煮3次，混勻并濃縮至0.88 kg/L。陽性藥物己烯雌酚購自上海通用藥業(yè)股份有限公司(批號009003)，實驗前用吐溫與蒸餾水配成乳濁液。

1.3 實驗分組 小鼠適應性飼養(yǎng)2 d，隨機分為5組，每組12只，分別為陰性對照組、陽性對照組和女貞子低、中、高劑量組。陽性對照組給予己烯雌酚乳濁液(35 mg/kg)，陰性對照組給予等體積的蒸餾水，女貞子低、中、高劑量組分別給予 4.4、6.6和8.8 g/kg(按人給藥量的20倍、30倍、40倍計算)，以蒸餾水稀釋。均灌胃給藥，1次/d，連續(xù)給藥8 d。

1.4 臟器取材與稱量 小鼠給藥8 d后稱質(zhì)量，頸椎脫臼處死，立即剖取子宮、胸腺、心臟、脾臟、腎臟及腎上腺，除去上述器官周圍的脂肪結締組織，吸盡臟器表面血液，用電子天平稱量。計算各臟器質(zhì)量占體質(zhì)量的百分比，即臟器系數(shù)[7]。

1.5 統(tǒng)計學處理 采用SPSS 17.0進行分析，應用單因素方差分析和LSD-t檢驗分析各組間主要臟器系數(shù)的差異，檢驗水準α=0.05。

2 結果

2.1 一般狀態(tài)觀察結果 陰性對照組小鼠狀態(tài)良好，反應靈敏，皮毛有光澤;陽性對照組小鼠反應略顯遲鈍;女貞子低劑量組小鼠反應略顯遲鈍，但狀態(tài)比陽性組稍好;女貞子中、高劑量組動物狀態(tài)良好，無死亡現(xiàn)象。

2.2 5組小鼠主要臟器系數(shù)比較 見表1。

表1 5組小鼠主要臟器系數(shù)的比較 %

3 討論

植物雌激素可以與哺乳類動物及人體雌激素受體相結合并將其激活，在體內(nèi)發(fā)揮雙向調(diào)節(jié)作用[8]。長期以來，許多中草藥及其復方被廣泛應用于婦科病的治療和保健，其中所含的植物雌激素的藥效作用不容忽視[9-11]。為了盡量減少內(nèi)源性雌激素分泌對實驗結果產(chǎn)生的影響，作者選用了性未成熟雌性小鼠作為樣本，并以己烯雌酚作為陽性對照藥，以使檢測到的臟器系數(shù)更為準確。該實驗選用蒸餾水作為陰性對照品，主要是考慮實驗藥物女貞子煎劑為水煎劑，而實驗過程中將吐溫加入到陽性對照藥中主要是為了增加其水溶性，便于實驗給藥。以往的研究[12]顯示，吐溫毒性小，親水性強，低劑量時對小鼠體質(zhì)量及臟器系數(shù)無明顯影響。人口服吐溫4.5 ～6.0 g/d，連續(xù)28 d，甚至4 a之久亦無病態(tài)反應[13]。實驗中陽性對照組和女貞子低劑量組小鼠出現(xiàn)了反應遲鈍的現(xiàn)象，導致這種現(xiàn)象的原因尚不清楚，有待深入研究。該實驗結果顯示女貞子中、高劑量組子宮系數(shù)與陰性對照組相比明顯增高，且隨給藥劑量的增大而增強，但女貞子低、中、高劑量組小鼠子宮系數(shù)都明顯低于陽性對照組，提示女貞子的植物雌激素樣調(diào)節(jié)作用在一定范圍內(nèi)隨劑量的增大而增強。

胸腺是機體的重要淋巴器官，能夠分泌胸腺激素及激素類物質(zhì)，其功能與免疫密切相關;脾臟是機體最大的免疫器官，占全身淋巴組織總量的25%，含有大量的淋巴細胞和巨噬細胞，是機體細胞免疫和體液免疫的中心[14]。該實驗結果顯示，陽性對照組小鼠胸腺、脾臟系數(shù)與陰性對照組相比分別有降低和升高的趨勢，但差異無統(tǒng)計學意義，提示陽性藥物對小鼠免疫系統(tǒng)有一定的影響，但對胸腺和脾臟的作用不一樣，原因尚不清楚，有待研究。女貞子低、中劑量組小鼠胸腺系數(shù)與陽性對照組相比差異有統(tǒng)計學意義;女貞子高劑量組小鼠胸腺系數(shù)與陰、陽性對照組相比差異無統(tǒng)計學意義;女貞子低劑量組小鼠胸腺系數(shù)較陰性對照組增高，提示女貞子能夠在一定劑量范圍內(nèi)影響小鼠機體的免疫功能，其作用可能隨給藥量變化而變化。

為了進一步考察女貞子在發(fā)揮藥理作用的同時是否還表現(xiàn)出一定的毒副作用，作者還記錄了各劑量組小鼠的腎臟、腎上腺、心臟、肝臟等臟器系數(shù)，結果顯示女貞子高劑量組小鼠心臟系數(shù)與陰性對照組相比明顯降低，提示女貞子隨給藥量的增大對性未成熟小鼠的心臟會產(chǎn)生一定的影響，這種影響可能與女貞子的毒副作用有關，具體作用還有待進一步的研究證實。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(第一部)[M].2005年版.北京:化學工業(yè)出版社，2005:229

[2]戚世媛，熊正英.女貞子提取物對大鼠骨骼肌抗氧化作用和運動能力的影響[J].西安交通大學學報:醫(yī)學版，2011，32(2):187

[3]羅世煒.女貞子的研究與開發(fā)[J].農(nóng)村經(jīng)濟與科技，2010，21(5):140

[4]金芝貴，金劍，肖忠革，等.女貞子的藥理作用及其臨床應用進展[J].藥學服務與研究，2011，11(3):189

[5]Collins BM，Mclachlan JA，Arnold SF.The estrogenic and antiestrogenic activities of phytechemicals with the human estrogen receptor expressed in yeast[J].Steroids，1997，62(4):365

[6]Tinwell H，Ashby J.Sensitivity of the immature rat uterotrophic assay to mixtures of estrogens[J].Environ Health Perspect，2004，112(5):575

[7]章金濤，朱奎成，杜春燕，等.豫醫(yī)卷毛大鼠與SD大鼠主要臟器系數(shù)及生長發(fā)育情況比較[J].鄭州大學學報:醫(yī)學版，2007，42(4):634

[8]郝慶秀，王繼峰，牛建昭，等.熟地等4味中藥的植物雌激素作用的實驗研究[J].中國中醫(yī)雜志，2009，34(5):620

[9]陳春，張淑麗.紅花等10種中藥的雌激素活性研究分析[J].中醫(yī)中藥，2011，9(14):296

[10]王玉梅，陳前鋒，楊莉娟，等.女貞子對大鼠成骨細胞增殖與分化的影響[J].天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，2011，23(2):232

[11]王大偉，牛建昭，王繼峰，等.中藥植物雌激素受體調(diào)節(jié)劑篩選研究中的問題與對策[J].中草藥，2009，40(5):825

[12]張述禹，劉惠惠，云彩麟.吐溫-80的藥理與應用[J].中國醫(yī)院藥學雜志，1992，12(10):459

[13]馬鴻雁，叢英，張明令，等.中藥注射劑中吐溫80用量解析[J].亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥，2010，6(8):17

[14]高美華.醫(yī)學免疫學[M].北京:人民軍醫(yī)出版社，1999:74