何春榮 沈嘉華

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民藥膠囊中甘草酸含量測定研究

何春榮1沈嘉華2

（1 云南楚雄彝族自治州中醫(yī)院，楚雄 675000；2 楚雄州食品藥品檢驗所，楚雄 675000）

通過高效液相色譜法測定民藥膠囊中甘草酸的含量，摸索質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中的含量測定項，為建立民藥膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)草案提供科學(xué)依據(jù)。用高效液相色譜法測定。確定為民藥膠囊含量測定限度，規(guī)定為本品每粒含甘草以甘草酸計，不得少于1.0mg。高效液相法對民藥膠囊處方中甘草的含量進行分析，認為該方法穩(wěn)定性及重現(xiàn)性較好，可以作為民藥膠囊質(zhì)量控制的可靠方法。

自制制劑；民藥膠囊；質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；高效液相色譜法；含量測定

民藥膠囊為我院彝族藥制劑，處方中藥物組成為羊耳菊、小兒腹痛草、甘草、土木香，是醫(yī)院胃腸道科的?？朴盟?，在醫(yī)院臨床使用二十多年，功能理氣止痛，養(yǎng)胃和中，臨床用于急、慢性胃炎及十二指腸潰瘍，療效確切，質(zhì)量穩(wěn)定，為更好發(fā)展民族藥特色制劑，進一步提高藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，筆者用高效液相色譜法對該制劑進行了研究，通過對制劑處方中甘草（以甘草酸計）含量的分析研究，認為用高效液相法測定處方中甘草的含量，方法可靠，可作為該制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)擬定的依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 儀器及試劑 Angilent-1100液相色譜儀，依利特C18（4.6×250mm）色譜柱，Angilent -1100系列四元泵，VWD可變波長檢測器，自動進樣器。紫外光譜測定用島津2550型雙光束紫外分光光度儀。甘草酸銨對照品：中國藥品生物制品檢定所提供，編號110731-200306，供含量測定用。所用溶劑均為分析純，流動相配制用色譜純?nèi)軇?/p>

1.2 色譜條件及檢測波長的選擇 參照中國藥典2005年版一部中“甘草”項下的含量測定方法。用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈-0.2mol/L醋酸銨溶液-冰醋酸（27 : 73 : 2）為流動相；檢測波長為250nm。理論板數(shù)按甘草酸銨峰計算應(yīng)不低于3500。

以流動相為溶劑配制的對照品溶液，測定其紫外吸收光譜，最大吸收波長為250nm，故以此作為檢測波長。見圖1。

圖1 甘草酸銨對照品紫外吸收光譜圖

在此條件下對甘草酸銨對照品溶液、供試品溶液進行測定，結(jié)果均較為理想，見圖2、3；同法制備缺甘草的空白樣品測定結(jié)果為陰性，說明此方法有一定的專屬性，見圖4。

圖2 甘草酸銨對照品高效液相色譜圖

圖3 民藥膠囊供試品高效液相色譜圖

圖4 缺甘草空白樣品高效液相色譜圖

1.3 對照品溶液的制備 精密稱取P2O5減壓干燥24h的甘草酸銨對照品20.41mg，置20ml量瓶中，加甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻，得對照品溶液A（每1ml中含甘草酸銨1.0205mg），精密量取A 1ml置10ml量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，得對照品溶液B（每1ml中含甘草酸銨0.10205mg），精密量取A 3ml置50ml量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，得對照品溶液C（每1ml中含甘草酸銨0.06123mg），即得。

1.4 供試品溶液的制備方法選擇 取本品內(nèi)容物2g，精密稱定，分別精密加入甲醇、流動相50ml，稱定重量，水浴上回流、超聲處理不同時間，放冷，用相應(yīng)溶劑補足減失的重量，濾過，取續(xù)濾液，即得。結(jié)果見表1。試驗結(jié)果表明以甲醇為溶劑，回流1小時即可使測定結(jié)果穩(wěn)定[1]。

表1 制備方法選擇結(jié)果

2 方法與結(jié)果

2.1 線性關(guān)系考察 精密吸取對照品溶液A（1.0205 mg/ml） 0.1、0.2、0.5、1、2、5、10、20μl；對照品溶液C（0.06123mg/ml） 0.1、0.2、0.5、1、2、5、10、20μl進行色譜測定，按上述條件測定峰面積，結(jié)果見表2，以峰面積積分值對進樣濃度進行回歸處理，甘草酸銨在0.06123～20.41μg范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好線性關(guān)系（圖5）?；貧w方程為Y = 667.98827X + 8.40119，r = 0.99999，理論板數(shù)均超過7000。

表2 線性關(guān)系考察結(jié)果

圖5 甘草酸銨對照品線性關(guān)系圖

2.2 精密度試驗 取同一甘草酸銨對照品溶液（0.10205mg/ml），按上述色譜條件，連續(xù)測定5次，峰面積積分值分別為700.7、699.4、700.9、698.6、702.6，平均值為700.4，RSD=0.22 %。

2.3 穩(wěn)定性試驗 分別取對照品溶液B和供試品溶液按上述色譜條件測定5～7次，每次間隔2～4h，結(jié)果見表3，表明對照品溶液在12h、供試品溶液在10h內(nèi)穩(wěn)定。

2.4 重現(xiàn)性試驗 取同一批號的樣品，按含量測定方法重復(fù)進行9次試驗，結(jié)果見表4，證明此方法重現(xiàn)性良好。

表3 穩(wěn)定性試驗結(jié)果

2.5 回收率試驗 精密取對照品溶液A（1.0205mg/ml）1.0ml、1.5、2.0ml（各雙樣），蒸干，加入重現(xiàn)性試驗的同一批號樣品0.5g，精密稱定，精密加入甲醇25ml，稱定重量，水浴上回流1h，放冷，用甲醇補足減失的重量，濾過，取續(xù)濾液按含量測定方法測定，計算回收率，結(jié)果見表5。

表4 重現(xiàn)性試驗結(jié)果

表5 加樣回收試驗結(jié)果

注：平均回收率為96.69%，RSD=1.77%

2.6 樣品的測定 分別取民藥膠囊十個批次樣品按上述方法進行測定，結(jié)果見表6。

表6 樣品含量測定結(jié)果

以上10批樣品的平均含量為1.374mg/粒，相當(dāng)于甘草酸1.346mg/粒，通過以上樣品的測定可以看出該法穩(wěn)定性及重現(xiàn)性較好，故可確定為民藥膠囊含量測定限度，規(guī)定為本品每粒含甘草以甘草酸計，不得少于1.0mg。

3 討論

民藥膠囊為我院的特色?？朴盟?，臨床用于慢性胃炎、十二指腸球部潰瘍的治療，屬于中醫(yī)“腹痛”、“胃脘痛”等范疇，其治療作用平和，能迅速改善癥狀，療效確切。本文用高效液相法對民藥膠囊處方中甘草的含量進行分析，認為該方法穩(wěn)定性及重現(xiàn)性較好，可以作為民藥膠囊質(zhì)量控制的可靠方法。

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典一部.北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2005:附錄114.

（本文校對：蘇玲 收稿日期：2012-02-05）

10.3969/j.issn.1672-2779.2012.06.102

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