孫曉慧，鄭奎玲，廖莉玲，*，衛(wèi) 鋼

(1.貴州師范大學(xué)化學(xué)與材料科學(xué)學(xué)院，貴州貴陽 550001; 2.聯(lián)邦科學(xué)與工業(yè)研究組織材料科學(xué)與工程分部，林德菲爾德 2070)

八種野菜氨基酸及維生素的含量分析

孫曉慧1，鄭奎玲1，廖莉玲1，*，衛(wèi) 鋼2，*

(1.貴州師范大學(xué)化學(xué)與材料科學(xué)學(xué)院，貴州貴陽 550001; 2.聯(lián)邦科學(xué)與工業(yè)研究組織材料科學(xué)與工程分部，林德菲爾德 2070)

采用柱前衍生反相高效液相色譜法測定貴州8種野菜(鴨兒芹、藍(lán)布正、魚香菜、灰菜、剪刀菜、豆瓣菜、清明菜、水芹)中17種氨基酸含量，并采用高效液相色譜法測定了其中的維生素A、維生素E、維生素B1、維生素B2的含量。結(jié)果表明，在所測定的野菜中，豆瓣菜，灰菜、魚香菜氨基酸總量和必需氨基酸含量較高;清明菜維生素A含量最高，魚香菜、水芹、剪刀菜富含維生素E，藍(lán)布正、豆瓣菜、清明菜富含維生素B1，豆瓣菜維生素B2含量最高。這些野菜具有較高的營養(yǎng)價值。

黔產(chǎn)野菜，氨基酸，維生素

貴州的野菜資源極為豐富，約300種野菜分布在全省各地［1］。這些野菜不但具有豐富的營養(yǎng)價值，還有一定的藥用價值。為此作者選擇其中的8種野菜:鴨兒芹、藍(lán)布正、魚香菜、灰菜、剪刀菜、豆瓣菜、清明菜、水芹作為研究對象，對其中的氨基酸和維生素的含量進(jìn)行分析測定，以期為人們合理膳食提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

8種野菜 洗凈、晾干，60℃左右烘干，粉碎，過篩，貯于干燥器中備用;維生素A標(biāo)準(zhǔn)品、維生素E標(biāo)準(zhǔn)品 均由中國藥品生物制品檢定所提供;氨基酸標(biāo)準(zhǔn)溶液 含17種氨基酸:天門冬氨酸Asp、谷氨酸Glu、絲氨酸Ser、甘氨酸Gly、組氨酸His、精氨酸Arg、蘇氨酸Thr、丙氨酸Ala、脯氨酸Pro、酪氨酸Tyr、纈氨酸Val、蛋氨酸Met、異亮氨酸Ile、亮氨酸Leu、苯丙氨酸Phe、賴氨酸Lyb各2.5μmol/m L，胱氨酸Cys 1.25μmol/m L;內(nèi)標(biāo)物正亮氨酸(Nle)，異硫氰酸苯脂(PITC)，三乙胺(TEA)，乙腈(色譜純)，苯酚(蒸餾)，高純氮?dú)?純度99.99%)，甲醇(色譜純);其余試劑均為分析純。

Agilent1100高效液相色譜儀 美國Agilent公司，帶紫外分光檢測器;島津LC－20A高效液相色譜儀 日本島津公司，帶紫外檢測器。

1.2 實(shí)驗方法

1.2.1 氨基酸的測定 采用柱前衍生反相高效液相色譜法［2－5］，準(zhǔn)確稱取0.05g樣品于氨基酸消化管中，加入10m L含0.1%苯酚的6mol/L鹽酸，振搖使樣品均勻分散于溶液中，置(110±1)℃烘箱中水解24h，取出冷卻，將水解液全部轉(zhuǎn)移到50m L容量瓶中，用去離子水定容至刻度，混勻。準(zhǔn)確量取樣品溶液200μL，置1m L塑料離心管中，準(zhǔn)確加入20μL正亮氨酸內(nèi)標(biāo)液，混勻，加220μL 0.1mol/L鹽酸溶解，加入三乙胺乙腈溶液100μL，異硫氰酸苯酯乙腈溶液100μL，混勻，室溫放置1h，然后加入正己烷400μL，振搖后放置10min，取下層溶液，用0.45μm濾膜過濾，上機(jī)測定。

液相色譜條件:色譜柱:Venusil－AA氨基酸分析專用柱(4.6mm×250mm，5μm);檢測波長:254nm;柱溫:40℃;流動相 A:稱取15.2g無水醋酸鈉，加水1850m L，溶解后用冰醋酸調(diào)pH至6.5，然后加入乙腈140m L，混勻，用0.45μm濾膜過濾;流動相B:80% (V/V)乙腈溶液;流速:1m L/m in;進(jìn)樣量:2μL梯度洗脫見表1。

表1 氨基酸梯度洗脫Table 1 Gradient elution of amino acids

分離測定:取濾液2μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。

1.2.2 脂溶性維生素(維生素A、維生素E)的測定［6］

稱取混合均勻的試樣10.000g于250m L三角燒瓶中，加入50%KOH溶液10m L，沸水浴上回流30m in，使皂化完全，冷卻后將皂化液移入分液漏斗中，用50m L水分2～3次洗三角燒瓶，向分液漏斗中加入乙醚萃取三次，合并乙醚三次乙醚相。用50m L蒸餾水洗滌分液漏斗中的乙醚層至中性，將乙醚提取液通過無水硫酸鈉濾入與旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器配套的球形蒸發(fā)瓶內(nèi)，于65℃水浴中減壓蒸餾并回收乙醚，待瓶中剩下約2m L乙醚時，取下蒸發(fā)瓶，立即用氮?dú)獯档粢颐?，立即加?.00m L甲醇溶解，充分混勻，用0.45μm濾膜過濾，上機(jī)測定。

液相色譜條件:色譜柱:Zorbax SB－C185μm，250mm×4.6mm;流動相為甲醇∶異丙醇=90∶10;流速:1m L/m in，柱溫:室溫，檢測波長:280nm，進(jìn)樣量:20μL。

1.2.3 水溶性維生素(維生素 B1、維生素 B2)的測定［6－8］稱取10g試樣置于100m L三角燒瓶中，加入50m L 0.1mol/L HCl溶液作提取劑，沸水浴中加熱水解30min，保證提取完全。過濾，放冷后定容至100m L，經(jīng)微孔濾膜過濾后，上機(jī)測定。

液相色譜條件:色譜柱:Zorbax SB－C185μm，250mm×4.6mm;流動相:維生素B1為甲醇∶磷酸二氫鉀溶液(0.05mol/L)=10∶90;維生素B2為甲醇∶磷酸二氫鉀溶液(0.05mol/L)=30∶70;流速:1m L/m in，柱溫:室溫，檢測波長:280nm，進(jìn)樣量:20μL。

2 結(jié)果與分析

2.1 野菜中氨基酸的含量

依照上述方法測定樣品中的氨基酸含量，樣品中的氨基酸含量如表2所示。

合成蛋白質(zhì)是氨基酸的重要生理功能之一，從表2測定結(jié)果看，野菜中均含有17種氨基酸(除色氨酸因采用鹽酸水解幾乎全部被破壞外)，氨基酸總量在 12.23%～30.35%之間，必需氨基酸含量在4.28%～9.7%之間，豆瓣菜的氨基酸總量和必需氨基酸含量均為最高，魚香菜、灰菜的氨基酸總量和必需氨基酸含量也較高。谷氨酸在人體內(nèi)與血氨結(jié)合形成對身體有益的谷氨酰胺，能夠有效解除機(jī)體新陳代謝過程中產(chǎn)生的氨毒害作用;其次，谷氨酸還能進(jìn)一步參與大腦組織的代謝，在人體內(nèi)具有促進(jìn)紅細(xì)胞生成，改善腦細(xì)胞營養(yǎng)等作用。8種野菜中豆瓣菜和魚香菜谷氨酸的含量較高。另外，這8種野菜中還含有多種藥效氨基酸，說明其具有很好的營養(yǎng)和藥用價值。

表2 8種野菜中氨基酸含量(%)Table 2 Contents of amino acids in 8 wild vegetables(%)

2.2 野菜中維生素的含量

依據(jù)之前所述方法測得野菜中維生素，其結(jié)果見表3。

維生素A具有維持視覺、促進(jìn)生長發(fā)育、加強(qiáng)免疫能力的作用，此外還有一定的抗氧化作用，可以中和有害自由基。維生素E是強(qiáng)抗氧化劑，能抵抗機(jī)體代謝產(chǎn)生的有害自由基，此外，還參與抗體的形成。維生素B1能增進(jìn)食欲，維持神經(jīng)正?；顒拥?。通過對測定黔產(chǎn)8種野菜中維生素的結(jié)果比較可知，8種野菜維生素A的含量在0.0085～0.14mg/100g，清明菜維生素A含量最高;維生素E的含量在0.27～7.02mg/100g，魚香菜、水芹、剪刀菜維生素E含量較高;維生素B1的含量范圍為6.4～40.9mg/100g，藍(lán)布正、豆瓣菜、清明菜、鴨兒芹中維生素B1的含量都在30mg/100g以上;而維生素B2除幾種野菜未檢測出外，其余4種野菜中的維生素B2的含量范圍在0.17～3.4mg/100g，豆瓣菜中維生素B2含量最高，為3.4mg/100g。這些野菜可以經(jīng)常食用作為日常補(bǔ)充維生素的良好來源。

表3 8種野菜中維生素的含量(mg/100g)Table 3 Contents of vitamins in 8 wild vegetables(mg/100g)

3 結(jié)論

3.1 8種野菜中的氨基酸種類齊全，豆瓣菜的氨基酸總量和必需氨基酸含量均為最高，魚香菜、灰菜的氨基酸總量和必需氨基酸含量也較高。必需氨基酸與非必需氨基酸的比值在44.67%～58.28%之間，且以灰菜最高(58.28%)。另外，這8種野菜中還含有多種藥效氨基酸，說明其具有很好的營養(yǎng)和藥用價值。

3.2 8種野菜中清明菜維生素A含量最高，魚香菜、水芹、剪刀菜富含維生素E，藍(lán)布正、豆瓣菜、清明菜富含維生素VB1，豆瓣菜維生素VB2含量最高，可以作為日常補(bǔ)充維生素的良好來源。

［1］朱富壽.貴州野菜資源及其開發(fā)利用［J］.貴州科學(xué)，2000，18(3):234－237.

［2］朱曙東，趙昇皓.氨基酸的高效液相色譜分析［J］.色譜，1994，12(1):20－24.

［3］程顯隆，肖新月，鄒秦文，等.柱前衍生化HPLC法同時測定阿膠中4種主要氨基酸的含量［J］.藥物分析雜志，2008，28 (12):1997－2000.

［4］楊菁，孫黎光，白秀珍，等.異硫氰酸苯酯柱前衍生化反相高效液相色譜法同時測定18種氨基酸［J］.色譜，2002，20 (4):369－371.

［5］申大衛(wèi)，段輝，田瑄，西北地區(qū)6種衛(wèi)矛科植物種子氨基酸和20種重要元素分析［J］.蘭州大學(xué)學(xué)報:自然科學(xué)版，2008，44(6):83－86.

［6］裘立群，高艾英，張昊，等.高效液相色譜法測定水果中脂溶性維生素含量的研究［J］.廣州化工，2010，38(10):151－153.

［7］羅玉明，鄢貴龍，徐迎春，等.蒲菜中礦質(zhì)元素和水溶性維生素的檢測與分析［J］.南京師范大學(xué)學(xué)報:自然科學(xué)版，2006，29(2):95－98.

［8］王雪梅，高素蓮，等.HPLC法測定新鮮草莓中水溶性維生素［J］.食品科學(xué)，1999(5):52－53.

Determ ination the contents of am ino acids and vitam ins in eight kinds of w ild vegetables

SUN Xiao－h(huán)ui1，ZHENG Kui－ling1，LIAO Li－ling1，*，WEIGang2，*
(1.School of Chemistry and Material Science，Guizhou Normal University，Guiyang 550001，China; 2.CSIRO Materials Science and Engineering，Lindfield NSW2070，Australia)

The contents of Am ino acids in eight kinds ofwild vegetab les collec ted in Guizhou had been determ ined by RP－HPLC with p recolumn derivatization and the contents of Vitam ins in these wild vegetab les had been determ ined by using HPLC.The results showed that the contents of total and essential am ino acids were richer in Nasturtium officinale R.Br，Chenopod ium album，Mentha sp icata Linn，the content of VAwas the highest in Gnaphalium affine D.Don，the contents of VEwere richer in Mentha spicata Linn，Oenanthe javanica(B1um e.)DC，Aster sub latus Michx，the contents of VB1were richer in Geum japonicum Thunb.var.chinese F.Bolle，Nasturtium officinale R.Br，Gnaphalium affine D.Don，the content of VB2was the highest in Nasturtium officinale R.Br.These w ild vegetab les had a generalhigher nutrition value.

w ild vegetab le，am ino acid，vitam in

TS255.7

A

1002－0306(2012)12－0061－03

2011－10－09 *通訊聯(lián)系人

孫曉慧(1987－)，女，碩士研究生，研究方向:分析化學(xué)。

貴州省優(yōu)秀科技教育人才省長專項資舍項目(黔省專合字201021號);貴州省科技廳科技基金(黔科合 J字［2007］2021)。