解放軍302醫(yī)院（100024）鄭緋

北京軍區(qū)總醫(yī)院（100700）徐娟△

黃芪(Radix astragali)是多年生草本豆科植物蒙古黃芪Astragalus membranceus（Fisch.）Bge. var. mongholicus(Bge.)Hsiao或膜夾黃芪Astragalus membranaceus (Fisch.)Bge.的干燥根[1]。含有多種化學(xué)成分，如皂苷類、黃酮類、多糖類等，黃芪甲苷(AS I)為黃芪中10多種皂甙的主要成分，為黃芪制劑質(zhì)量檢定的指標(biāo)成分，結(jié)構(gòu)為三萜皂甙。其中皂苷類是黃芪的主要活性成分，具有降血壓、鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛等作用。目前，關(guān)于黃芪皂苷的定量測定多采用比色法、薄層掃描法、HPLC-UV法、HPLC-示差折光檢測器法。

川黃醒腦口服液是由黃芪、川芎、當(dāng)歸等五味藥材組成的純中藥復(fù)方制劑，具有益氣活血、化瘀通絡(luò)之功效，主要用于腦梗塞急性期的治療[2]。本文采用高效液相色譜法對其中的主要成分黃芪中的黃芪甲甙進(jìn)行了定量測定，實驗表明，測定方法回收率及精密度都較好，實驗結(jié)果準(zhǔn)確可靠。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 日本島津液相色譜儀，LC-6A泵，SIL-6A自動進(jìn)樣器，SPD-6AV紫外檢測器及C-R3A數(shù)據(jù)處理裝置。

1.2 藥品 黃芪甲甙對照品，購自中國藥品生物制品檢定所(批號110781-200512；規(guī)格：20 mg，供含量測定用）；川黃醒腦口服液:沈陽市康元制藥廠生產(chǎn)。

1.3 試劑：甲醇和乙腈均為色譜純，水為雙蒸水；其他試劑均為分析純。

2 實驗方法和結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：YWG-C18柱（4.6mm×250mm)，流動相：乙腈:水（1:2），磷酸調(diào)pH值=3；流速：0.8ml/m i n；檢測波長：2 0 5 n m；靈敏度：0.1AUFS。在該色譜條件下，黃芪甲甙的保留時間約為18分鐘。[3～5]

2.2 對照品溶液的制備 精密稱取黃芪甲甙對照品適量，加甲醇溶解并定容至每1ml含0.5mg的溶液作為對照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備 精密量取樣品20ml，用水飽和的正丁醇振搖提取4次，每次25ml，合并正丁醇提取液，用水洗滌2次，每次15ml，棄去水液，正丁醇溶液用無水硫酸鈉脫水，濾過，濾液置水浴上蒸干，殘渣加甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至2ml的量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

2.4 陰性對照樣品溶液的制備 取不含黃芪藥材的處方其他藥材，按相同工藝制得陰性對照樣品，再按上述供試品溶液制備方法，制得陰性對照樣品溶液。

2.5 線性關(guān)系考察 分別精密吸取標(biāo)準(zhǔn)品溶液5、10、15、20、25ul，按上述色譜條件測定，以峰面積的對數(shù)為縱坐標(biāo)，黃芪甲苷進(jìn)樣量的對數(shù)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果表明，黃芪甲苷在2.5～12.5ug范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，其線性回歸方程為Y=1.0097X+5.9010，r =0.9998。

2.6 精密度實驗 分別精密吸取黃芪甲甙標(biāo)準(zhǔn)溶液15ul，按色譜條件連續(xù)進(jìn)樣5次，測定峰面積，結(jié)果RSD為1.78%（n=5）,精密度良好。

2.7 加樣回收率試驗 精密稱取已測黃芪甲甙含量的川黃醒腦口服液樣品20ml，5份（已知含量為34.0ug/ml）。分別精密加入黃芪甲甙對照品，按樣品測定項下供試品溶液制備方法操作，進(jìn)樣測定，計算平均回收率為95.32%，RSD=1.69%，結(jié)果見附表。

2.8 穩(wěn)定性實驗 樣品溶液在室溫放置，每隔0.5h測定一次，共測定4次，測定峰面積，計算黃芪甲苷的含量(ug/ml)，分別是0.0341、0.0349、0.0345、0.0342，RSD為1.04%，證明樣品溶液中黃芪甲甙含量至少在2h內(nèi)穩(wěn)定。

2.9 重復(fù)性試驗 分別平行取同一批號樣品6份，依法處理后，進(jìn)樣10ul測定，計算黃芪甲甙的含量，平均值為34ug/ml，RSD=1.98%。

3 討論

3.1 黃芪中有十幾種皂甙，以黃芪甲甙含量最高，為主要有效成分，我們參照中國藥典（95版）的提取方法，有效的去除了其他皂甙的干擾。

3.2 測定波長的選擇 黃芪甲甙在紫外區(qū)僅在200nm左右有末端吸收，因此在200～210nm范圍內(nèi)選擇測定波長，實驗表明，波長越長，噪音越小，但靈敏度也隨之降低，綜合這兩個因素，我們選205nm為測定波長。

附表 加樣回收率試驗結(jié)果