胡正余，徐以亮

(江陰天江藥業(yè)有限公司,江蘇 江陰 214434)

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徐以亮，Tel：(0510)86408091，E-mail：xyl009@126.com

不同等級白芍藥材中芍藥苷含量的分析

胡正余，徐以亮*

(江陰天江藥業(yè)有限公司,江蘇 江陰 214434)

目的測定不同等級白芍中芍藥苷的含量。方法采用反相HPLC法，色譜柱：Kromasil C18(150 mm×4.6 mm，5 μm)；流動相：乙腈-0.1%磷酸溶液(14∶86)；柱溫：30 ℃；流速：1.0 mL·min-1；檢測波長：230 nm。結果芍藥苷進樣量在0.201 6～1.008 μg線性關系良好(r=0.999 9)，平均回收率為97.36%(RSD=1.27%)。19批樣品測定結果表明，一等品中芍藥苷的含量在2.88%～3.54%，二等品中芍藥苷的含量在2.46%～2.78%，三等品中芍藥苷的含量在2.04%～2.32%，四等品中芍藥苷的含量在1.34%～1.97%。結論白芍現(xiàn)有的劃分等級的方法較好地體現(xiàn)了白芍的質(zhì)量差異，為白芍的臨床使用和制藥企業(yè)選擇原料提供了依據(jù)。

白芍；芍藥苷；HPLC；含量測定

白芍[1]為毛茛科植物芍藥PaeonialactitloraPall.的根經(jīng)過水煮去皮的干燥品，性微寒，具有養(yǎng)血調(diào)經(jīng)，斂陰止汗，柔肝止痛，平抑肝陽的功能，用于血虛萎黃，月經(jīng)不調(diào)，自汗，盜汗，脅痛，腹痛，四肢攣痛，頭痛眩暈。白芍中含有芍藥苷、牡丹酚、芍藥花苷、芍藥內(nèi)酯以及揮發(fā)油和三萜類等化學成分，其中芍藥苷為其主要藥效成分，具有鎮(zhèn)靜、解痙、抗炎、抗應激性潰瘍等多方面的作用[2]，是白芍質(zhì)量評價的指標成分。白芍主產(chǎn)浙江、安徽、四川等地，分別被稱為杭白芍、毫白芍以及川白芍。在長期實踐中，人們根據(jù)藥材傳統(tǒng)外觀、規(guī)格，將白芍劃分為杭白芍1～7等、白芍1～4等進行銷售。筆者以芍藥苷為指標，參考《中國藥典》2010版一部白芍【含量測定】項下相關規(guī)定，采用HPLC法對4個等級白芍樣品[3]的芍藥苷含量進行考察，為白芍的質(zhì)量評價及臨床用藥提供參考依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilent12000高效液相色譜儀、Agilent-G1311A四元泵、Agilent-G1322A真空脫氣器、Agilent-G1314B可變波長檢測器、CHEMSTATION B.04.01化學工作站(美國安捷倫公司)；超聲清洗機(無錫超聲電子設備廠)；電子天平(瑞士Mettler公司)；KQ-250B型超聲波清洗器(昆山市超聲波儀器公司)；SD101-2電熱鼓風干燥箱(南通金石實驗儀器有限公司)。

1.2 試藥

芍藥苷對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號：110736-200527，供含量測定用)；乙腈為色譜純(上海凌峰化學試劑有限公司)，水為重蒸水，其余試劑為分析純。

白芍樣品產(chǎn)自安徽亳州，按照現(xiàn)行標準劃分為：一等1～4號，二等1～6號，三等1～5號，四等1～4號(一等：長8 cm以上，中部直徑1.7 cm以上，無蘆頭、花麻點、破皮、裂口、夾生；二等：長6 cm以上，中部直徑1.3 cm以上，間有花麻點；三等：長4 cm以上，中部直徑8 mm以上，間有花麻點；四等：長短粗細不分，間有夾生、破條、花麻點、頭尾、碎節(jié)或未去凈栓皮)。以上白芍藥材經(jīng)江陰天江藥業(yè)有限公司唐波執(zhí)業(yè)藥師鑒定為毛茛科植物芍藥PaeonialactitloraPall.的去外皮干燥根。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：Kromasil C18(150 mm×4.6 mm，5 μm)；流動相：乙腈-0.1% 磷酸溶液(14∶86)；柱溫：30 ℃；檢測波長：230 nm；理論塔板數(shù)按芍藥苷計算應不低于1 000。

2.2 對照品溶液的制備

精密稱取經(jīng)五氧化二磷減壓干燥器中干燥36 h的芍藥苷對照品適量，加甲醇制成1 mL含芍藥苷100.8 μg的溶液，搖勻，即得。HPLC圖見圖1。

2.3 供試品溶液的制備

本品切片干燥，取適量打粉，稱取約0.1 g，精密稱定，置50 mL量瓶中，加稀乙醇35 mL，超聲處理(功率240 W，頻率45 kHz)30 min，放冷，加稀乙醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，過微孔濾膜(0.45 μm)，即得。HPLC圖見圖2。

圖1 芍藥苷對照品HPLC圖

圖2 白芍藥材HPLC圖

2.4 線性關系考察

分別精密吸取芍藥苷對照品溶液(100.8 μg·mL-1)2，4，6，8 mL置10 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，制成濃度分別為20.16,40.32,60.48,80.64 μg·mL-1的系列對照品溶液。分別精密吸取上述不同濃度的對照品溶液各10 μL，按上述色譜條件進樣，以芍藥苷峰面積積分值為縱坐標(Y)，芍藥苷進樣濃度為橫坐標(X)，計算得回歸方程Y=12.057X-5.45，r=0.999 9。結果表明芍藥苷進樣量在0.201 6～1.008 μg進樣濃度與峰面積積分值呈良好的線性關系。

2.5 精密度考察

精密吸取芍藥苷對照品溶液(100.8 μg·mL-1)5 μL，注入液相色譜儀分析，測定峰面積積分值，重復6次，計算其RSD=0.99%。結果表明精密度良好。

2.6 重復性試驗

精密稱取白芍藥材(二等1號樣品)0.1 g，6份，按供試品溶液的制備方法制成供試液，分別進樣10 μL，測定。結果表明白芍藥材(二等1號樣品)中芍藥苷的平均含量為2.54%，RSD=1.27%。

2.7 穩(wěn)定性試驗

取白芍二等1號樣品的供試品溶液，于0，1，2，4，6，8 h分別進樣10 μL，測定樣品中芍藥苷峰面積積分值，計算其RSD=1.14%。結果表明供試品溶液在8 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 回收率試驗

取已知含量的樣品(白芍二等1號樣品)0.05 g，精密稱定，分別加入芍藥苷對照品適量，按正文供試品溶液制備方法和色譜條件，制備加樣回收供試品溶液，分別進樣10 μL，注入液相色譜儀，測定。結果平均加樣回收率為97.36%，RSD=1.34%(n=6)，結果見表1。

2.9 樣品測定

分別取各樣品約0.1 g，精密稱定，按供試品溶液制備方法分別制成供試品溶液，分別進樣10 μL，測定，計算含量，結果見表2。

表1 芍藥苷加樣回收率試驗

表2 樣品測定結果 /%

3 結果與討論

不同等級的19批樣品測定結果表明，一等品中芍藥苷的含量在2.88%～3.54%，二等品中芍藥苷的含量在2.46%～2.78%，三等品中芍藥苷的含量在2.04%～2.32%，四等品中芍藥苷的含量在1.34%～1.97%。以芍藥苷的含量為指標，現(xiàn)有的規(guī)格等級劃分方法能較好地體現(xiàn)了白芍的質(zhì)量差異，為白芍藥材的原料采購及制劑生產(chǎn)和臨床使用提供了依據(jù)。

以上測定所用白芍樣品均為4年生當年采收產(chǎn)白芍，且均為亳州產(chǎn)。白芍為藥材中的大宗商品，庫存量較大，在產(chǎn)量高時，入庫封存量較大，有的貯存期較長，在存放過程中，芍藥苷可能會降低。貯藏時間對白芍中芍藥苷含量的影響沒見報道，有待進一步研究。

[1] 國家藥典委員會.中國藥典[S].一部.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：96-97.

[2] 吳菡子，熊南山．白芍的藥理研究與臨床應用[J]．中國醫(yī)院藥學雜志，1998，18(4)：172-173．

[3] 徐國鈞.中國藥材學[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，1996：178-179.

DeterminationofPaeoniflorininPaeoniaeRadixAlbaofDifferentGradesbyHPLC

HU Zheng-yu， XU Yi-liang

(JiangyinTianjiangPharmaceuticalCo.,Ltd,Jiangyin214434，China)

Objective:To established a method for the determination of paeoniflorin in Paeoniae Radix Alba.MethodsRP-HPLC method was on Kromasil C18column (150 mm×4.6 mm, 5μm), with acetonitrile-0.1% phosphoric acid (14∶86) as mobile phase and detection wavelength at 230 nm. The flow rate was 1.0 mL·min-1and column temperature was 25 ℃.ResultsThe calibration curves of paeoniflorin were in good linearity at the range of 0.201 6～1.008 μg (r=0.999 9). The average recovery was 97.36% (n=6, RSD=1.27%). The results from 19 samples showed that the content of paeoniflorin was between 2.88% to 3.54% in first rank sample, 2.46% to 2.78% in second rank sample, 2.04% to 2.32% in third rank sample, 1.34% to 1.97% in fourth rank sample, respectively.ConclusionThe classification properly reflects the quality of Paeoniae Radix Alba according to content of paeoniflorin, and provides quality information for clinical use.

Paeoniae Radix Alba;Paeoniflorin; HPLC;Determination

2012-05-23)