★ 魏惠珍 胡景婷 饒毅＊ 金浩鑫 劉玲 王躍生 (.中藥固體制劑制造技術(shù)國家工程研究中心 南昌330006;.江西中醫(yī)學(xué)院 南昌330004)

大承氣湯，源于漢代張仲景所著的中醫(yī)經(jīng)典古籍《傷寒論》和《金匱要略》［1］，由大黃、厚樸、枳實(shí)、芒硝四味藥材組成，為瀉法的代表方劑之一，廣泛應(yīng)用于治療腸梗阻，胃排空障礙等疾?。?］中。

大黃作為君藥，瀉熱通便，蕩滌腸胃［3］，其藥效物質(zhì)主要為蒽醌類成分(包括蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、蘆薈大黃素)，分為結(jié)合型蒽醌和游離型蒽醌［4］，且其中結(jié)合蒽醌對(duì)大承氣湯的瀉下作用至為重要。大承氣湯常用煎煮方法為“水煎服，大黃后下，芒硝溶服”，煎煮過程一般主張大黃后下［5］，本文在此基礎(chǔ)上考察大黃加入時(shí)間不同的大承氣湯在40－80min時(shí)中蒽醌類成分的變化情況，為大承氣湯的臨床用藥提供參考依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 儀器

Waters高效液相色譜儀(Waters2695分離單元，Waters2996二極管陣列檢測(cè)器，Empower色譜工作站);Millipore-Q純水器(美國MILLIPORE公司);KDM型2000ml調(diào)溫電熱套(山東鄄城華魯電熱儀器有限公司)，HH-4型數(shù)顯恒溫水浴鍋(常州國華電器有限公司)。

1.2 材料

對(duì)照品:蘆薈大黃素，大黃酸，大黃酚，大黃素，大黃素甲醚，均由中國藥品生物制品檢定所提供;

大黃、厚樸、枳實(shí)、芒硝飲片購于北京市雙橋燕京飲片廠，經(jīng)江西中醫(yī)學(xué)院付曉梅教授鑒定為真品;

甲醇為色譜純，氯仿、硫酸、磷酸為分析純，水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 大承氣湯的制備方法

本文考察四種煎煮方案(分別于其他飲片煎煮0、10、20、30 min時(shí)加入大黃)的大承氣湯中蒽醌類成分的含量變化情況。

具體煎煮方案:稱取同一批次厚樸27 g、枳實(shí)27 g、芒硝13.5 g四份，加入8倍量水，浸泡30 min，加熱至沸騰，開始計(jì)時(shí)為0 min并改用小火煎煮，分別于0、10、20、30 min 加入浸泡好的大黃 36 g，煎煮至40、50、60、70、80 min 時(shí)取樣，共采集20 份樣品。

2.2 供試品溶液的制備方法

取上述采集的20份樣品，按照供試品溶液的制備方法，分別制備游離蒽醌供試品溶液和總蒽醌供試品溶液，具體方法如下:

游離蒽醌供試品溶液的制備:精密量取樣品溶液2 ml，加入氯仿10 ml，加熱回流1 h，冷卻，移至分液漏斗中分取氯仿層，水層用氯仿提取2次，每次約10 ml，合并氯仿液，蒸干，殘?jiān)蛹状际谷芙猓D(zhuǎn)移至10 ml容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，經(jīng)0.45 μm的微孔濾膜濾過，即得。

總蒽醌供試品溶液的制備:精密量取樣品溶液2 ml，加入 2.5 mol/l的硫酸溶液 10 ml、氯仿 10 ml，加熱回流1 h，冷卻，移至分液漏斗中分取氯仿層，酸水層用氯仿提取2次，每次約10 ml，合并氯仿液，蒸干，殘?jiān)蛹状际谷芙?，轉(zhuǎn)移至10 ml容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，經(jīng)0.45 μm的微孔濾膜濾過，即得總蒽醌的含量。

蒽醌類成分以游離形式及與糖結(jié)合成苷兩種形式存在于植物體內(nèi)［6］，大承氣湯中蒽醌類成分為結(jié)合蒽醌與游離蒽醌之和。通過高效液相色譜儀，計(jì)算2.2項(xiàng)下供試品中總蒽醌及游離蒽醌的含量，總蒽醌與游離蒽醌的差值極為結(jié)合蒽醌的量。

2.3 色譜條件

色譜柱:Diamonsil C18色譜柱(250 mm×4.6 mm，5 μm);柱溫:25℃;流速:1 mL/min;檢測(cè)波長:294 nm;流動(dòng)相:A:甲醇，B:0.1%磷酸水溶液，梯度洗脫，洗脫程序見表1;進(jìn)樣體積:20 μL;分析時(shí)間:55 min。所得色譜圖如圖1所示。

表1 梯度洗脫程序

大承氣湯色譜圖如下:

圖1 大承氣湯含量測(cè)定色譜圖

2.4 對(duì)照品溶液的配置

精密稱取蘆薈大黃素對(duì)照品，大黃酸對(duì)照品，大黃素對(duì)照品，大黃酚對(duì)照品，大黃素甲醚對(duì)照品，加甲醇分別制成每1 ml含蘆薈大黃素0.044 mg，大黃酸0.0868 mg，大黃素 0.1036 mg，大黃酚 0.1408 mg，大黃素甲醚0.0242 mg。分別精密吸取上述對(duì)照品溶液各2 ml，置10 ml容量瓶中，搖勻即得大黃蒽醌類成分的混合對(duì)照品溶液(蘆薈大黃素0.00880 mg/ml，大黃酸 0.01736 mg/ml，大黃素 0.02072 mg/ml，大黃酚 0.02816 mg/ml，大黃素甲醚0.00484 mg/ml)。

2.5 線性關(guān)系考察

精密吸取上述對(duì)照品溶液，于上述色譜條件下分別進(jìn)樣1，3，5，10，15，20 μL，以峰面積(A)對(duì)對(duì)照品量(mg)進(jìn)行線性回歸處理，結(jié)果如下:

表2 線性關(guān)系及回歸方程

2.6 樣品溶液的測(cè)定

取2.2項(xiàng)下供試品溶液各20 μL，注入液相色譜儀中，總蒽醌、結(jié)合蒽醌和游離蒽醌的含量結(jié)果見表3。

表3 大承氣湯中蒽醌類成分的含量

2.7 不同方案煎煮所得大承氣湯中蒽醌類成分隨時(shí)間的變化趨勢(shì)

考察四種不同煎煮方案所得大承氣湯在40－80 min時(shí)游離蒽醌、結(jié)合蒽醌含量的變化趨勢(shì)如下:

圖2 不同煎煮方法大承氣湯中結(jié)合蒽醌的含量變化

從上圖看出，不同方案煎煮所得大承氣湯在相同煎煮時(shí)間內(nèi)結(jié)合蒽醌的含量相差較大;同一方案的大承氣湯隨煎煮時(shí)間不同，其結(jié)合蒽醌的含量也呈逐漸變化的趨勢(shì)。其他飲片煎煮0、10 min加大黃所得大承氣湯中結(jié)合蒽醌的含量在40－80 min的時(shí)間范圍內(nèi)呈上升趨勢(shì);其他飲片煎煮20、30min加大黃所得大承氣湯中結(jié)合蒽醌的含量則先上升至平緩，然后下降。由于大承氣湯的致瀉作用與大黃的結(jié)合蒽醌含量有關(guān)，其他飲片煎煮20min后加大黃煎煮大承氣湯的結(jié)合蒽醌的含量較高，此時(shí)的致瀉作用較強(qiáng)［7］。

圖3 不同煎煮方法大承氣湯中游離蒽醌的含量變化

不同方案煎煮所得大承氣湯在相同煎煮時(shí)間內(nèi)游離蒽醌的含量相差很大;同一方案的大承氣湯隨煎煮時(shí)間不同，在40－80 min的時(shí)間范圍內(nèi)其游離蒽醌的含量也呈逐漸升高的趨勢(shì)。

大承氣湯隨煎煮時(shí)間不同，其總蒽醌、游離蒽醌及結(jié)合蒽醌的含量變化顯著。因此，大承氣湯的臨床煎煮過程中應(yīng)控制好煎煮時(shí)間。

2.8 大黃煎煮時(shí)間相同時(shí)蒽醌類成分的變化情況

考察四種不同煎煮方法在大黃煎煮時(shí)間相同(即大黃煎煮時(shí)間為40、50 min)時(shí)游離蒽醌、結(jié)合蒽醌含量的變化趨勢(shì)如下:

表4 大黃煎煮時(shí)間相同的大承氣湯中蒽醌類成分的含量(mg/ml)

表4可以看出，大黃煎煮時(shí)間相同時(shí)(即煎煮40、50 min)，0、20、30 min 下大黃煎煮所得大承氣湯總蒽醌的含量相差較小(在0.15－0.16 mg/ml范圍內(nèi))，而10 min下大黃煎煮所得大承氣湯總蒽醌的含量則較另三種方案偏低(約0.12 mg/ml)。

大黃煎煮時(shí)間相同時(shí)，0、10、30 min下大黃煎煮所得大承氣湯中游離蒽醌與結(jié)合蒽醌的含量基本持平，而20 min下大黃煎煮所得大承氣湯中結(jié)合蒽醌的含量約為游離蒽醌含量的2倍。

大黃加入時(shí)間不同，煎煮時(shí)間相同不僅對(duì)大承氣湯中總蒽醌的含量有影響，對(duì)游離蒽醌及結(jié)合蒽醌類成分的含量之比同樣影響較大，因此，大承氣湯的臨床煎煮過程中應(yīng)控制大黃的加入時(shí)間。

3 討論

本實(shí)驗(yàn)以臨床常用的煎煮條件為基礎(chǔ)，由于大承氣湯臨床煎煮時(shí)間至少為40 min，因此以40 min為起始考察時(shí)間，分別考察了其他飲片煎煮0、10、20、30 min后加入大黃的大承氣湯中蒽醌類成分在40－80 min隨煎煮時(shí)間的變化情況。其他飲片煎煮20min后加入大黃所得大承氣湯結(jié)合蒽醌含量較高，由于結(jié)合蒽醌的瀉下效應(yīng)較強(qiáng)，則此法所得大承氣湯療效較好，為大承氣湯的臨床使用提供參考依據(jù)。

［1］解培勛.大承氣湯與燥屎宿食關(guān)系初探［J］.中國中醫(yī)急癥，2001，10(3):152，155

［2］王繼弟，李濱，張素君.大承氣湯研究進(jìn)展［J］.山東中醫(yī)雜志，2004，23(9):571 －573

［3］曾 玲.淺析大承氣湯［J］.光明中醫(yī)，2009，24(11):2199

［4］李秀才.大黃的研究進(jìn)展［J］.中國藥學(xué)雜志，1988，33(10):581

［5］薛芳，許占民.中國藥物大全(中藥卷)［M］.北京:人民衛(wèi)生出版社，1988:95.

［6］吳立軍.天然藥物化學(xué)［M］.北京:人民衛(wèi)生出版社，2007:147

［7］林永秀，宋淑華.大黃煎煮時(shí)間對(duì)藥理作用的影響［J］.藥學(xué)服務(wù)與研究，2004，4(4):341，344，351.