劉海霞，楊志偉，鄒文斌

（松原市藥品檢驗(yàn)所，吉林 松原138000）

利膽片由大黃、金銀花等11味中藥組成，具有舒肝止痛、清熱利濕之功效，是治療肝膽濕熱所致的脅痛的常用中成藥，收載于《中國藥典》2010年版一部，無金銀花主要成分綠原酸含量測定檢驗(yàn)項(xiàng)目。本文采用高效液相色譜法，一次進(jìn)樣分離測定利膽片中綠原酸的含量。

1 儀器與藥品

1.1 高效液相色譜儀

北京普析通用儀器公司L6－AS6。檢測器：紫外檢測器。色譜工作站：LCwin1.0（采用自動進(jìn)樣、自動記錄）。

1.2 試藥

甲醇：色譜純；其它均為分析純。

1.3 對照品

綠原酸對照品，購自中國藥品生物制品檢定所。

1.4 藥品

利膽片，市場購買。樣1：青島國風(fēng)藥業(yè)股份有限公司，100106；樣2：青島國風(fēng)藥業(yè)股份有限公司，100922；樣3：蕪湖張恒春藥業(yè)有限公司，110203；樣4：蕪湖張恒春藥業(yè)有限公司，110827；樣5：吉林真元制藥有限公司，101104。

2 色譜條件與分離結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜樣：Kromasil C18柱，4.6mm×250mm；流動相：甲醇－冰醋酸－水（15∶1∶85）；流速1.0mL／min；檢測波長324nm；柱溫30℃。

2.2 分離結(jié)果

綠原酸對照品及利膽片樣品色譜，見圖1、圖2。

圖1 對照品液相色譜

圖2 供試品液相色譜

3 方法與結(jié)果

3.1 對照品溶液的制備

取綠原酸對照品約10mg，精密稱量，置250mL容量瓶中，加40%甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻即得。對照品溶液濃度39.94μg／mL。

3.2 供試品溶液的制備

取供試品10片，除去包衣，精密稱定重量，研細(xì)，精密稱取適量（藥相當(dāng)于6片），置具塞錐形瓶中，精密加入40%甲醇150mL，稱定重量，超聲處理30min，放冷，再稱定重量，用40%甲醇補(bǔ)足減失的重量，取上清液以0.45μm濾膜濾過，作為供試品溶液。

3.3 線性關(guān)系考察

分別精密吸取上述對照品溶液2、4、6、8、10mL，置于10mL容量瓶中，加40%甲醇至刻度，分別進(jìn)樣10μL，按上述色譜條件分離測定，以對照品溶液濃度為橫坐標(biāo)、以綠原酸峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程、相關(guān)系數(shù)及線性范圍分別為Y＝18261.15X＋863.9，r＝0.9998，結(jié)果表明當(dāng)濃度為7.99～39.94μg／mL時(shí)呈良好的線性關(guān)系。

3.4 精密度考察

取對照品溶液5mL，加40%甲醇稀釋至10mL，進(jìn)樣10μL，分離測定綠原酸對照品的峰面積值，重復(fù)進(jìn)行樣5次，峰面積分別為818857，819288，816224，823410，819703，RSD＝0.31%（n＝5）。

3.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密稱取供試品適量（約相當(dāng)于6片），按供試品溶液制備方法制成供試品溶液，精密量取該溶液5mL，置10mL容量瓶中，加40%甲醇稀釋至刻度，每小時(shí)進(jìn)樣1次，每次10μL，連續(xù)進(jìn)樣8次，測得綠原酸的峰面積分別為：872812、868288、870899、869083、868908、870236、868087、869180。結(jié)果7h內(nèi)表明綠原酸的40%甲醇溶液較穩(wěn)定，RSD＝0.18（n＝8）。

3.6 重復(fù)性試驗(yàn)

精密稱取同一生產(chǎn)企業(yè)同一批號的利膽片（吉林真元制藥有限公司，批號：101104）樣品5份，按供試品溶液制備的方法制得供試品溶液，取各份供試品溶液5mL，分別置于10mL容量瓶中，加40%甲醇稀釋至刻度，分別進(jìn)樣10μL，按外標(biāo)法測定每份含量，結(jié)果每份含量分別為（每片含綠原酸 mg數(shù)）：0.964、0.961、0.963、0.959、0.956mg，RSD＝0.33%（n＝5）

3.7 加樣回收率試驗(yàn)

取利膽片（吉林真元制藥有限公司，批號：101104，已測得含量為0.956mg／片）約6片，共5份，精密稱量，分別精密加入綠原酸對照品溶液10mL（濃度為39.94μg／mL），再分別加入40%甲醇溶液140mL，照供試品溶液的制備方法制成供試品溶液。分別吸取供試品溶液5mL，置10mL容量瓶中，加40%甲醇稀釋至刻度，進(jìn)樣20μL測定，按外標(biāo)法計(jì)算含量，結(jié)果見表1。

表1 加樣回收率試驗(yàn)

3.8 樣品測定

取不同生產(chǎn)企業(yè)不同批號的利膽片各10片，除去包衣，精密稱定重量，研細(xì)，精密稱取適量（約相當(dāng)于6片），置具塞錐形瓶中，照供試品溶液制備方法制成供試品溶液。精密量取各供試品溶液5mL，置10mL容量瓶中，加40%甲醇稀釋至刻度，搖勻，分別進(jìn)樣10μL，分離測定，按外標(biāo)法測定含量，測得每片含綠原酸量見表2。

4 討論

采用高效液相色譜法，一次進(jìn)樣分離測定利膽片中綠原酸的含量，方法簡便、快速、結(jié)果可靠。本實(shí)驗(yàn)經(jīng)多種流動相選擇，比較綠原酸對照品的保留時(shí)間、分離度及理論塔板數(shù)，認(rèn)為甲醇－冰醋酸－水（15∶1∶85）分離效果較好。對樣品提取條件考察時(shí)，采用甲醇、70%甲醇、40%甲醇、水分別經(jīng)15、30、60min的超聲提取，經(jīng)測定比較，結(jié)果表明采用40%甲醇超聲提取30min可提取完全，效果最佳。根據(jù)《中國藥典》有關(guān)規(guī)定及處方組成，測定結(jié)果表明采用高效液相色譜法測定利膽片中綠原酸的含量，誤差小，方法可行，可為質(zhì)量控制提供科學(xué)依據(jù)。

表2 利膽片中綠原酸的含量