張立群， 閆俊嶺△， 王 真， 張信岳， 李 欽， 陳愛(ài)君

(1.云南白藥研究院， 云南 昆明 650032； 2.浙江省醫(yī)學(xué)科學(xué)院， 浙江 杭州 310013)

利膽止痛片是由柴胡、赤芍、茵陳、延胡索等藥材組成的復(fù)方制劑，該方具有清熱利膽，理氣止痛之功效，用于肝膽濕熱所致的脅痛，黃疸(如急、慢性肝炎，膽囊炎)等癥的治療。臨床應(yīng)用證明，其治療急慢性肝炎、膽囊炎等療效顯著，為驗(yàn)證其臨床療效，本文從解熱、利膽、保肝和鎮(zhèn)痛等多方面進(jìn)行了藥效學(xué)研究。

1 材料與方法

1.1 藥物與試劑 利膽止痛片(浸膏粉)，由云南白藥集團(tuán)麗江藥業(yè)有限公司生產(chǎn)提供，批號(hào)：00708020。阿司匹林(腸溶片)，上海九褔藥業(yè)有限公司產(chǎn)品，批號(hào)：20040810；消炎利膽片，廣州白云山和記黃埔中藥有限公司產(chǎn)品，批號(hào)：E8A004。戊巴比妥鈉，中國(guó)醫(yī)藥(集團(tuán))上?；瘜W(xué)試劑公司進(jìn)口分裝，批號(hào)：20021216；巴豆油合劑，大腸桿菌(標(biāo)準(zhǔn)株)，由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供；四氯化碳，江蘇永華精細(xì)化學(xué)品有限公司產(chǎn)品，批號(hào)：080530；α-萘異硫氰酸酯(ANIT)，北京通縣育才精細(xì)化工廠生產(chǎn)，批號(hào)：081019。

1.2 動(dòng)物 ICR小鼠，SD大鼠，均由浙江省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證：SCXK(浙)2003-0001號(hào)，DHA豚鼠，雌雄兼用，購(gòu)自上海申旺實(shí)驗(yàn)動(dòng)物養(yǎng)殖場(chǎng)，動(dòng)物許可證號(hào)：SCXK(滬)2002-0011。新西蘭家兔，雌雄兼用，由浙江中醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證：SYHK(浙)2003-0003號(hào)。

1.3 儀器 ZRY-2智能熱原儀，天津大學(xué)精密儀器廠生產(chǎn)；AEL-200電子天平，日本SHIMADZU公司生產(chǎn)；721可見(jiàn)分光光度計(jì)，上海分析儀器廠生產(chǎn)；AT-738PLUS半自動(dòng)生化儀，上海安泰分析儀器有限公司生產(chǎn)；MOTIC生物圖像采集分析系統(tǒng)，廈門(mén)麥奧迪克儀器公司生產(chǎn)。

1.4 利膽止痛片對(duì)化膿性膽道感染家兔(膽囊炎)的作用 健康新西蘭家兔50只，體重1.6～2.2 kg，雌雄兼用，隨機(jī)選取8只作為正常對(duì)照組，其余42只家兔參照文獻(xiàn)方法造模[1]：靜脈注射3%戊巴比妥鈉生理鹽水溶液麻醉，在上腹部做 5 cm～6 cm切口，暴露膽囊，抽出膽汁。向膽囊內(nèi)注入0.3 mL生理鹽水菌液，結(jié)扎逐層縫合傷口；正常對(duì)照組也按上述方法行假手術(shù)，但抽出膽汁后不注射菌液，其他同手術(shù)組操作。術(shù)后第3天從造模家兔中篩選40只隨機(jī)分為模型對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照組、利膽止痛片1.4、0.7、0.35 g(浸膏)/kg劑量組，分別灌胃給予相應(yīng)藥物，每天1次，連續(xù)30天。正常對(duì)照組以及模型對(duì)照組給予等體積蒸餾水，每周檢測(cè)體溫，給藥2周、4周時(shí)耳靜脈取血、抗凝處理后進(jìn)行血液學(xué)檢查，末次給藥后次日，取空腹血分離血清，測(cè)定總膽紅素、谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶、膽固醇、甘油三酯。

1.5 利膽止痛片對(duì)大鼠膽汁流量以及總膽紅素的影響 取SD大鼠，體重200～250 g，隨機(jī)分為正常對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照組、利膽止痛片1.0、0.5、0.25 g(浸膏)/kg三劑量組，每組8只，實(shí)驗(yàn)前禁食不禁水12 h。試驗(yàn)按文獻(xiàn)所示方法[2]進(jìn)行：每鼠用烏拉坦麻醉后，仰臥位固定；沿腹正中線切口2cm，在十二指腸降部腸系膜中找到膽管，插入塑料管，見(jiàn)有淡黃色膽汁流出后，結(jié)扎固定，收集膽汁。然后各組大鼠由十二指腸分別按劑量給藥，給藥后每30 min收集膽汁1次，共4次，記錄各時(shí)段累計(jì)膽汁流量，并測(cè)定膽汁中的總膽紅素濃度。

1.6 利膽止痛片對(duì)四氯化碳所致大鼠慢性肝損傷的影響 雄性SD大鼠，體重120～150 g，隨機(jī)留取10只作為正常對(duì)照，其余大鼠按文獻(xiàn)所示方法造模[3]，造模8周后采血測(cè)定血清中ALT、AST，并根據(jù)ALT結(jié)合AST結(jié)果分組并開(kāi)始給藥，設(shè)利膽止痛片1.0、0.5、0.25 g(浸膏)/kg三劑量組、陽(yáng)性對(duì)照組以及模型對(duì)照組，分別灌胃給予相應(yīng)藥物，每天1次，連續(xù)4周，給藥體積均為10 mL/kg，末次給藥后次日股動(dòng)脈取血，測(cè)定血清中生化指標(biāo)；取部分肝臟，然后制備10%組織勻漿液，測(cè)定SOD活性及MDA含量。

1.7 利膽止痛片對(duì)化學(xué)致痛和光熱致痛的影響

1.7.1 利膽止痛片對(duì)醋酸所致小鼠扭體反應(yīng)的影響 雄性ICR小鼠60只，體重18～22 g，隨機(jī)分為對(duì)照組、阿司匹林0.2 g/kg陽(yáng)性對(duì)照組、消炎利膽片12片/kg陽(yáng)性對(duì)照組、利膽止痛片1.5、0.75、0.375 g(浸膏)/kg三劑量組，每組10只，分別灌胃給藥，給藥體積均為20 mL/kg，對(duì)照組給予等容積蒸餾水；給藥后30 min，腹腔注射0.6%醋酸生理鹽水0.2 mL/只，觀察記錄小鼠扭體反應(yīng)潛伏期以及15 min內(nèi)的扭體次數(shù)。

1.7.2 利膽止痛片對(duì)光熱致痛法所致小鼠痛閾值的影響 選用在TF光熱測(cè)痛儀上預(yù)測(cè)甩尾痛閾值在3 s～10 s范圍的ICR雌性小鼠，體重(18～22) g，隨機(jī)分為對(duì)照組、阿司匹林0.2 g/kg陽(yáng)性對(duì)照組、消炎利膽片12片/kg陽(yáng)性對(duì)照組、利膽止痛片1.5、0.75、0.375 g(浸膏)/kg三劑量組，每組11只，分別灌胃給藥，給藥體積均為20 mL/kg，對(duì)照組給予等容積蒸餾水，在TF光熱測(cè)痛儀上測(cè)定給藥后30、60、120 min各組小鼠的甩尾痛閾值[4]。

2 結(jié)果

2.1 利膽止痛片對(duì)化膿性膽道感染(膽囊炎)家兔的影響

表1 利膽止痛片對(duì)化膿性膽道感染家兔體溫的影響( ±s ,n=8)

表1 利膽止痛片對(duì)化膿性膽道感染家兔體溫的影響( ±s ,n=8)

組別劑量(g/kg)體溫(℃)造模前造模后給藥1周給藥2周給藥3周給藥4周正常對(duì)照--39 9±0 639 5±0 139 5±0 439 4±0 239 7±0 439 7±0 4模型對(duì)照--39 7±0 541 2±1 0#40 6±0 7#40 5±0 4#40 2±0 5#39 9±0 8消炎利膽片6片/kg39 8±0 241 0±0 6#39 9±0 5#?39 8±0 3#?39 7±0 5?39 7±0 4利膽止痛片1 439 6±0 341 1±0 2#39 7±0 4?39 4±0 4?39 3±0 3?39 6±0 2利膽止痛片0 739 8±0 241 3±0 8#39 7±0 2?39 5±0 2?39 2±0 7?39 7±0 1利膽止痛片0 3539 7±0 641 1±0 6#39 6±0 4?39 4±0 3?39 8±0 7?40 0±0 6

注：與正常對(duì)照組比較，#P<0.05；與模型對(duì)照組比較，*P<0.05

從表1結(jié)果可見(jiàn)，造模后家兔體溫明顯升高，但其后呈逐漸下降趨勢(shì)，至給藥4周后基本恢復(fù)正常，利膽止痛片用藥后1～3周家兔體溫較模型對(duì)照組明顯降低(P<0.05)，提示對(duì)化膿性膽道感染所致家兔體溫升高有一定的解熱作用。

表2 利膽止痛片對(duì)化膿性膽道感染家兔血液生化的影響( ±s ,n=8)

表2 利膽止痛片對(duì)化膿性膽道感染家兔血液生化的影響( ±s ,n=8)

組別劑量(g/kg)AST(u/L)ALT(u/L)TC(mmol/L)TG(mmol/L)TBIL(umol/L)正常對(duì)照--17 3±4 319 8±4 61 92±0 571 13±0 595 86±1 55模型對(duì)照--37 3±16 4#41 8±13 9#1 14±0 37#1 13±0 428 19±3 85#消炎利膽片6片/kg29 7±12 931 8±8 21 33±0 521 71±1 056 48±2 11利膽止痛片1 431 4±15 532 6±8 81 71±0 46?0 96±0 504 67±0 29?利膽止痛片0 732 4±14 533 2±8 01 84±0 38?1 48±0 585 45±0 76?利膽止痛片0 3530 1±16 537 4±8 81 76±0 37?1 89±1 028 40±3 36

注：與正常對(duì)照組比較，#P<0.05；與模型對(duì)照組比較，*P<0.05

從表2結(jié)果可見(jiàn)，造模后家兔血清ALT、AST、TB明顯升高，TC明顯降低，利膽止痛片各劑量組用藥4周后上述指標(biāo)均有不同程度地改善，與模型對(duì)照組相比，利膽止痛片各劑量組TC明顯升高，中、高劑量組TB明顯降低，ALT、AST也有降低地趨勢(shì)，提示對(duì)該模型的肝損傷有一定的改善作用。

2.2 利膽止痛片對(duì)大鼠膽汁流量以及總膽紅素的影響 見(jiàn)表3、表4。

表3 利膽止痛片對(duì)大鼠膽汁流量的影響( ±s ,n=8)

表3 利膽止痛片對(duì)大鼠膽汁流量的影響( ±s ,n=8)

組別劑量(g/kg)膽汁流量(mL)給藥前藥后30min藥后60min藥后90min藥后120min對(duì)照--0 43±0 190 38±0 160 77±0 281 14±0 411 51±0 51消炎利膽片8片/kg0 46±0 150 44±0 150 89±0 251 28±0 341 69±0 42利膽止痛片1 00 49±0 120 43±0 180 99±0 22?1 48±0 33?1 91±0 41?利膽止痛片0 50 42±0 150 43±0 150 82±0 261 28±0 301 74±0 43利膽止痛片0 250 41±0 180 38±0 130 79±0 271 22±0 411 63±0 53

注：與對(duì)照組比較，*P<0.05

表4 利膽止痛片對(duì)大鼠膽汁中總膽紅素的影響( ±s )

表4 利膽止痛片對(duì)大鼠膽汁中總膽紅素的影響( ±s )

組別劑量(g/kg)總膽紅素(TBI)/(umol/L)給藥前藥后30min藥后60min藥后90min藥后120min對(duì)照--6 42±1 296 41±1 877 38±2 978 80±2 999 82±2 10消炎利膽片8片/kg5 28±1 505 49±1 916 76±2 507 71±2 609 25±2 83利膽止痛片1 05 73±1 196 03±1 257 22±1 867 64±2 158 53±3 28利膽止痛片0 55 21±1 156 11±1 877 01±2 358 49±3 268 82±3 79利膽止痛片0 255 73±1 306 68±1 898 18±2 459 38±2 649 65±3 23

從表3結(jié)果可見(jiàn)，利膽止痛片各劑量組給藥后各時(shí)段膽汁流量有不同程度地增加，呈現(xiàn)明顯的劑量依賴關(guān)系，其中高劑量組給藥后60～90 min累計(jì)膽汁流量明顯高于對(duì)照組(P<0.05)，提示利膽止痛片有一定的利膽作用；另從表4結(jié)果可見(jiàn)，利膽止痛片各劑量組給藥后各時(shí)段膽汁中總膽紅素?zé)o明顯改變，表明利膽止痛片對(duì)膽汁成分可能無(wú)明顯影響(見(jiàn)表7)。

2.3 利膽止痛片對(duì)四氯化碳所致慢性肝損傷大鼠的作用 四氯化碳造模8周后，大鼠體重明顯低于正常對(duì)照組(P<0.05)，表明造模因素對(duì)其體重增長(zhǎng)產(chǎn)生明顯影響，利膽止痛片各劑量組用藥后2周、4周體重仍明顯低于正常對(duì)照組，但其增長(zhǎng)速度較模型組有所加快，到給藥4周時(shí)已明顯高于模型對(duì)照組，表明利膽止痛片對(duì)四氯化碳肝損傷大鼠的體重恢復(fù)正常增長(zhǎng)有一定的促進(jìn)作用(見(jiàn)表5)。

表5 利膽止痛片對(duì)四氯化碳致慢性肝損傷大鼠體重的影響( ±s )

表5 利膽止痛片對(duì)四氯化碳致慢性肝損傷大鼠體重的影響( ±s )

組別劑量(g/kg)體重(g)造模前造模8周給藥2周給藥4周正常對(duì)照--136±10548±43581±47624±49模型對(duì)照--134±11472±51#469±57#473±62#消炎利膽片8片/kg136±11503±28#529±30#?555±34#?利膽止痛片1 0132±11491±28#504±31#522±34#?利膽止痛片0 5136±8490±55#511±59#524±65#?利膽止痛片0 25135±8509±54#521±44#?542±38#?

注：正常對(duì)照組n=10，其余n=15。正常對(duì)照組比較#P<0.05，與模型對(duì)照組比較，*P<0.05。

表6 利膽止痛片對(duì)四氯化碳致慢性肝損傷大鼠血清生化的影響( ±s )

表6 利膽止痛片對(duì)四氯化碳致慢性肝損傷大鼠血清生化的影響( ±s )

組別劑量(g/kg)AST(u/L)ALT(u/L)給藥前給藥4周后給藥前給藥4周后正常對(duì)照--191±35136±2718±522±8模型對(duì)照-- 287±52# 403±50# 92±41# 202±70#消炎利膽片8片/kg 302±72# 352±88#? 85±64# 123±55#?利膽止痛片1 0 286±84# 326±78#? 89±44# 126±43#?利膽止痛片0 5 271±58# 337±73#? 76±54# 177±61#利膽止痛片0 25 304±54# 345±53#? 73±39# 197±57#

注：除正常對(duì)照組n=10，其余n=15。與正常對(duì)照組比較，#P<0.05，與模型對(duì)照組比較，*P<0.05

表7 利膽止痛片對(duì)四氯化碳致慢性肝損傷大鼠肝系數(shù)及SOD和MDA的影響( ±s )

表7 利膽止痛片對(duì)四氯化碳致慢性肝損傷大鼠肝系數(shù)及SOD和MDA的影響( ±s )

組別劑量(g/kg)肝系數(shù)(g/100g體重)肝臟MDA(nmol/mg)肝臟SOD(u/mL)正常對(duì)照--2 53±0 202 99±0 51118 7±12 0模型對(duì)照--5 08±0 57#4 92±2 15#85 0±22 8#消炎利膽片8片/kg5 41±0 39#3 68±1 2871 3±21 0利膽止痛片1 05 23±0 61#3 10±1 87?103 6±28 4?利膽止痛片0 55 23±0 58#3 05±0 93?91 1±20 6利膽止痛片0 255 03±0 87#3 62±2 3797 6±31 1

注：除正常對(duì)照組n=10，其余n=15。與正常對(duì)照組比較，#P<0.05；與模型對(duì)照組比較，*P<0.05

從表7結(jié)果可見(jiàn)，四氯化碳造模后，肝系數(shù)增大1倍以上，利膽止痛片各劑量組用藥4周雖然對(duì)肝系數(shù)無(wú)明顯影響，但中、高劑量組明顯降低肝組織MDA水平，高劑量組并能明顯提高肝組織SOD水平，提示利膽止痛片對(duì)肝脂質(zhì)過(guò)氧化也有一定的保護(hù)作用。

2.4 利膽止痛片對(duì)化學(xué)致痛和光熱致痛的影響

2.4.1 利膽止痛片對(duì)醋酸所致小鼠扭體反應(yīng)的作用 從表8結(jié)果可見(jiàn)，利膽止痛片各劑量組扭體反應(yīng)潛伏期略有延長(zhǎng)，但與對(duì)照組均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)，扭體反應(yīng)次數(shù)較對(duì)照組有不同程度減少，其中高劑量組與對(duì)照組存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)，提示利膽止痛片較高劑量有一定的鎮(zhèn)痛作用；此外，陽(yáng)性藥物消炎利膽片也能明顯降低扭體反應(yīng)次數(shù)，但對(duì)扭體反應(yīng)潛伏期無(wú)明顯延長(zhǎng)作用(見(jiàn)表8)。

表8 利膽止痛片對(duì)醋酸所致小鼠扭體反應(yīng)的影響( ±s )

表8 利膽止痛片對(duì)醋酸所致小鼠扭體反應(yīng)的影響( ±s )

組別劑量(g/kg)動(dòng)物數(shù)(只)扭體反應(yīng)潛伏期(sec )扭體次數(shù)(次/15min)對(duì)照-10192±2444±12消炎利膽片12片/kg10194±3134±5?阿司匹林0 210 238±43?23±7?利膽止痛片1 510211±45 34±10?利膽止痛片0 7510207±5138±15利膽止痛片0 37510200±3535±16

注：與對(duì)照組比較，*P<0.05

2.4.2 利膽止痛片對(duì)光熱致痛法所致小鼠痛閾值的作用 從表9結(jié)果可見(jiàn)，利膽止痛片中劑量組給藥后各時(shí)段小鼠甩尾痛域值較給藥前或?qū)φ战M都有明顯提高(P<0.05)，最大提高約40%，高劑量組給藥后各時(shí)段小鼠甩尾痛域值較給藥前也有明顯提高(P<0.05)，提示利膽止痛片對(duì)光熱致痛小鼠有鎮(zhèn)痛作用。陽(yáng)性對(duì)照藥消炎利膽片鎮(zhèn)痛作用較弱(見(jiàn)表9)。

表9 利膽止痛片對(duì)小鼠光熱致痛法痛閾值的影響( ±s ,n=11)

表9 利膽止痛片對(duì)小鼠光熱致痛法痛閾值的影響( ±s ,n=11)

組別劑量(g/kg)不同時(shí)間痛閾值(sec)藥前藥后30min藥后60min藥后120min對(duì)照--6 9±2 27 6±1 97 1±1 17 4±2 2消炎利膽片12片/kg7 5±2 87 7±2 38 1±2 79 1±2 5阿司匹林0 27 0±2 08 4±3 38 2±2 39 4±3 2利膽止痛片1 56 0±2 08 2±1 4#8 7±2 1#8 9±1 3#利膽止痛片0 757 2±1 69 7±2 2#?8 7±1 6#?10 1±3 5#?利膽止痛片0 3756 9±3 07 5±2 97 0±2 67 3±1 8

注：與給藥前比較,#P<0.05；與對(duì)照組比較,*P<0.05

3 結(jié)論

利膽止痛片1.4、0.7、0.35 g(浸膏)/kg劑量灌胃給藥可明顯抑制化膿性膽道感染家兔的體溫以及白細(xì)胞的升高，改善血清中ALT、AST、TB、TC等生化指標(biāo)，并能明顯減輕膽囊病變程度；1.0、0.5、0.25 g(浸膏)/kg劑量能不同程度地增加在體插管法大鼠膽汁流量，并對(duì)四氯化碳肝損傷大鼠的體重增長(zhǎng)、血清生化ALT、AST指標(biāo)、肝脂質(zhì)過(guò)氧化SOD、MDA指標(biāo)產(chǎn)生有益的影響，提示利膽止痛片有一定的保肝利膽作用；此外，利膽止痛片1.5、0.75、0.375 g(浸膏)/kg劑量能使醋酸所致小鼠扭體反應(yīng)潛伏期略有延長(zhǎng)，扭體次數(shù)明顯減少，中、高劑量并能提高給藥后30～120 min時(shí)段光熱測(cè)痛法小鼠甩尾痛閾值，提示具有鎮(zhèn)痛作用。

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