黎國錦

(師宗縣畜牧局，云南 師宗 655700)

試驗以稀釋液營養(yǎng)劑和抗菌素對常溫保存奶山羊精液品質(zhì)的效果試驗。共設(shè)有5個稀釋液配方Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ，其中Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ號稀釋液配方是篩選理想營養(yǎng)劑而設(shè)計的，分別以葡萄糖、檸檬酸鈉等混合物為營養(yǎng)劑。在該試驗中，主要測定了用不同稀釋液稀釋的奶山羊精液在保存不同時間后精子活力、存活率、頂端完整率和畸形率等指標，篩選理想的奶山羊精液常溫保存的稀釋液配方。

1 材料和方法

1.1 試驗時間和地點

2010年3～5月，在云南省石林夢達爾羊場進行。

1.2 試驗動物的選擇

試驗選用發(fā)育正常，性機能良好，生殖機能正常的薩能、關(guān)中奶山羊。在試驗期間，分別隔離飼養(yǎng)。

1.3 稀釋液的成分及配制

1.3.1 稀釋液配方 見表1。

表1 稀釋液的配方

1.3.2 稀釋液配制

把準確稱量的各種成分放在消毒過的干燥容器內(nèi)，按比例加入雙重蒸餾水溶解，如果不易溶解可適當(dāng)加溫溶解;對溶解后的溶劑用濾紙過濾，以去掉雜質(zhì)，加溫的溶劑需待冷卻后再進行過濾;把過濾后的溶劑密封后進行消毒，可以蒸煮消毒，也可以高壓消毒;加入抗生素;攪拌混勻稀釋液，將稀釋液充分混勻。

1.4 精液的采集及稀釋

一般采精最佳時間是在每天上午8:00用假陰道采精一次，將采得精液分裝，然后對精液分別進行常規(guī)檢查，原精活力達0.7以上，pH值在6.4～6.8，色、味正常，精子密度每毫升在15億以上的為合格，并將合格精液做好標記。

將分裝好做好標記的精液與配好的稀釋液分別放在一定溫度的水浴鍋中，待兩者溫度相同時，將各組稀釋液分別沿試管壁緩慢加入精液中，邊加邊輕輕搖動，讓精液與稀釋液混合，稀釋比例為1∶2 ～1∶10。

1.5 測定指標及方法

1.5.1 精子活力的測定

采用平板壓片法。將顯微鏡置于38～40℃的保溫箱中，放大400倍，進行鏡檢，按十級制進行評分。每個樣品三次重復(fù)評定。取其平均數(shù)。

1.5.2 精子存活率測定

用剛果紅－苯胺蘭對精子染色。

(1)染色溶液:1%剛果紅染液(溶液為7%葡萄糖溶液)，5%苯胺蘭染液(溶液為2.9%檸檬酸鈉溶液)。

(2)具體方法:每個精液樣品制兩張抹片、風(fēng)干。立即置于1 000～1 600倍顯微鏡下用油鏡觀察200～600個精子。計算有受精潛力數(shù)占所有計數(shù)的百分率。

(3)評定方法:根據(jù)精子著色、頂體完整、畸形等情況，將精子分為兩類。

有受精潛力的精子:整個精子不著色，形態(tài)正常且頂體完整。

無受精潛力的精子:精子著紅色(包括精子的任何一個部位著色)，不著色的精子但畸形或頂體不完整。

1.5.3 精子頂體完整率和畸形率的觀察

(1)實驗用的染液:姬姆薩染液。

姬姆薩染液是由姬姆薩原液和磷酸緩沖液及蒸餾水配制而成，比例為2∶3∶5，配好立即使用，久置染色效果減退。

(2)其它材料:顯微鏡(1 000倍油鏡)、血球計數(shù)器、載玻片、蓋玻片、滴管。

(3)方法:取精液1滴，滴入含有2滴姬姆薩染液的小瓶中(青霉素瓶)，輕輕搖勻后，從中取出1滴染色的精液滴在清潔的載玻片中央，蓋上蓋玻片即成。同一精樣制作兩張片子，在顯微鏡下觀察精子的頂體。

1.5.4 pH值的測定

用試紙或(pHs－2)酸度計測出不同稀釋液稀釋的奶山羊精液保存不同時間后的pH值。

1.5.5 數(shù)據(jù)處理

試驗數(shù)據(jù)采用方差分析進行顯著性檢驗。

2 結(jié)果與分析

2.1 精子活力的變化

用Ⅲ號稀釋液配方稀釋的奶山羊精液保存12h、24h、36h、48h、60h、72h、84h、96h 后精子活力均高于 Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ、Ⅴ號稀釋液配方稀釋的奶山羊精液。見表1。

表1 不同稀釋液稀釋后精子活力的變化

將不同稀釋液稀釋的奶山羊精液保存48h后精子活力進行多重比較，結(jié)果見表2。

表2 不同稀釋液稀釋后精子活力比較

由表2可知:Ⅲ號稀釋液配方優(yōu)于Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ、Ⅴ號稀釋液配方。Ⅴ號稀釋液配方優(yōu)于Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ。

2.2 精子存活率的變化

用Ⅲ號稀釋液配方稀釋的奶山羊精液保存24h、48h、60h、72h后精子存活率均高于用Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ、Ⅴ號稀釋液配方稀釋的奶山羊精液的精子存活率。見表3和圖1。

表3 不同稀釋液稀釋后精子存活率變化 %

將不同稀釋液稀釋的奶山羊精液保存48h后精子存活率進行多重比較，結(jié)果見表4。

表4 保存48h后精子存活率的多重比較

由表4可知:Ⅲ號稀釋液配方優(yōu)于Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ、Ⅴ號稀釋液配方處理，且差異顯著(P＜0.05);但在Ⅳ、Ⅴ號配方處理的稀釋液之間進行相互比較，差異不顯著(P＞0.05)。

2.3 頂體完整率和畸形率的測定結(jié)果

用Ⅲ號稀釋液配方稀釋的奶山羊精液保存24h、48h、72h后，精子頂體完整率和畸形率的測定結(jié)果均優(yōu)于Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ、Ⅴ號稀釋液配方稀釋的奶山羊精液的精子頂體完整率和畸形率。結(jié)果見表5。

表5 不同稀釋液稀釋后精子頂體完整率和畸形率的變化%

由表5可知:以任何一種稀釋液稀釋奶山羊精液，其精子頂體完整率均下降，畸形率均上升，但他們的變化情況不同。

2.4 pH值的測定

將用不同稀釋液配方稀釋的奶山羊精液在保存24 h、48 h、72 h后的精液pH值進行比較。結(jié)果見表6和圖2。

表6 不同稀釋液配方稀釋后精液pH值的變化

圖2 pH值的變化

由表5可知:不同稀釋液稀釋的奶山羊精液pH值均有先上升后下降的趨勢，上升和下降幅度不同。Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ號稀釋的精液pH值間進行比較，Ⅲ號稀釋液配方稀釋的精液pH值變化幅度最小，但差異不顯著;Ⅳ、Ⅴ號稀釋液配方稀釋的精液pH值間進行比較，Ⅳ號稀釋液配方稀釋的精液pH值變化幅度較大，差異極顯著(P＜0.01)。

3 結(jié)論

(1)由表1可知:Ⅲ號稀釋液配方稀釋的奶山羊精液保存 12 h、24 h、36 h、48 h、60 h、72 h、84 h、96 h 后精子活力均高于Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ、Ⅴ號稀釋液配方稀釋的奶山羊精液。表2可知:保存48 h后對精子活力進行多重比較，Ⅲ號稀釋液配方優(yōu)于Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ、Ⅴ號稀釋液配方。由表3可知:Ⅲ號稀釋液配方稀釋的奶山羊精液保存24 h、48 h、72 h后精子存活率均高于Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ、Ⅴ號。由表5可知:Ⅲ號稀釋液配方稀釋的奶山羊精液保存24 h、48 h、72 h后的精子頂體完整率和畸形率的測定結(jié)果均優(yōu)于Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ、Ⅴ號稀釋液配方稀釋的奶山羊精液的精子頂體完整率和畸形率。由表6和圖2可知:用5種稀釋液配方稀釋的奶山羊精液保存24 h、48 h、72 h后的精液pH值進行比較，不同稀釋液稀釋的奶山羊精液pH值均有先上升后下降的趨勢，上升和下降幅度不同，Ⅲ稀釋液配方稀釋的精液pH值變化幅度最小。經(jīng)過試驗比較精子活力、頂體完整率和畸形率、pH值的變化，可以看出Ⅲ號稀釋液是最佳的稀釋配方。在奶山羊人工授精生產(chǎn)中，建議使用Ⅲ號稀釋液配方稀釋的保存48 h的奶山羊精液。

(2)不同的稀釋液營養(yǎng)劑和抗菌素對常溫保存奶山羊精液品質(zhì)之間存在差異。