楊 玉(福建省福清市質(zhì)量計(jì)量檢測(cè)所，福建 福清 350300)

HPLC-UV法快速檢測(cè)食品中的環(huán)己基氨基磺酸鈉

楊 玉(福建省福清市質(zhì)量計(jì)量檢測(cè)所，福建 福清 350300)

探討了采用HPLC法快速檢測(cè)食品中的環(huán)己基氨基磺酸鈉的條件和方法。結(jié)果表明，采用XB-C18柱(5μm,25mm×4.6mm)，紫外檢測(cè)器，檢測(cè)波長(zhǎng)為314nm，流動(dòng)相為甲醇∶水為95∶5，流速為1ml/min，柱溫25℃，進(jìn)樣量為20μl,在樣品中環(huán)己基氨基磺酸鈉含量為 2.0～50.0μg/ml的范圍內(nèi)，峰面積與環(huán)己基氨基磺酸鈉具有良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)為0.9994，加標(biāo)回收率為95.6%～99.4% ,相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為3.45%。該方法準(zhǔn)確、快速。

高效液相色譜法；食品；快速；環(huán)己基氨基磺酸鈉

環(huán)己基胺基磺酸鈉又名甜蜜素，是賦予食品甜味的食品添加劑,屬于人工合成的磺胺類無(wú)營(yíng)養(yǎng)性食品甜味劑。近年來(lái)隨著對(duì)甜蜜素的毒理學(xué)研究的深入,表明其代謝產(chǎn)物環(huán)己胺可能具有潛在的致癌性。許多國(guó)家禁止或限制使用，我國(guó)目前允許環(huán)己基胺基磺酸鈉的使用，但列入限制使用的食品添加劑，在GB2760-2011中規(guī)定冷凍飲品、糕點(diǎn)、飲料中添加量最多不超過0.65g/kg[1]。目前我國(guó)食品中環(huán)己基氨基磺酸鈉檢測(cè)采用的3種方法即氣相色譜法、比色法和薄層層析法[2]。但是采用氣相色譜法檢測(cè)要使用冰浴進(jìn)行溫度控制，很容易因?yàn)榧竟?jié)和環(huán)境溫度的影響導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗，而且這些方法操作過于繁瑣、費(fèi)時(shí)，不利于快速分析測(cè)定。為此，本研究參考國(guó)內(nèi)外的相關(guān)文獻(xiàn)[3-4]，探討了采用HPLC法對(duì)食品中的甜蜜素進(jìn)行快速分離和檢測(cè)的方法。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

L-2000日立液相色譜儀及紫外檢測(cè)器(自動(dòng)進(jìn)樣)；艾科浦超純水機(jī)；上海精科渦旋混合器；BS224S賽多利斯電子分析天平(感量0.1mg)；湖南湘儀實(shí)驗(yàn)室儀器開發(fā)有限公司H1650臺(tái)式高速離心機(jī)；溶劑過濾器(帶0.45μm有機(jī)系過濾膜和真空泵)。

甲醇(色譜純)；重蒸水；乙腈(色譜純)；乙酸胺；1∶1硫酸溶液；1∶1次氯酸鈉溶液；正己烷；5%碳酸氫鈉溶液。其余試劑均為分析純。

1.2 色譜分析條件

色譜柱：XB-C18柱(5μm,250mm×4.6mm)；柱溫25℃；流動(dòng)相：乙腈∶水(70∶30)，甲醇∶水(95∶5)，0.02mol/L的乙酸胺∶甲醇(90∶10)；流速：1ml/min；進(jìn)樣量：20μl；檢測(cè)波長(zhǎng)：314nm。

1.3 標(biāo)準(zhǔn)品的制備

準(zhǔn)確稱取0.1000g甜蜜素(環(huán)己基氨基磺酸鈉)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(中國(guó)計(jì)量科學(xué)研究院，含量≥99.0%)，加水溶解并定容至100ml，得濃度為1.00mg/ml的儲(chǔ)備液,置于-4℃的冰箱中備用。

分別準(zhǔn)確吸取0.2、0.5、1.0、2.0、5.0ml標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液于100ml容量瓶中用蒸餾水定容至100ml，得分別含有甜蜜素2、5、10、20、50μg/ml的甜蜜素的標(biāo)準(zhǔn)工作液。

分別用離心管稱取標(biāo)準(zhǔn)溶液各10ml，加1∶1硫酸溶液2ml和正己烷10ml，再加入1ml 1∶1次氯酸鈉溶液，渦旋震蕩提取2min，然后離心4000r/min,10min，稱取正己烷層至另一離心管中，加入25ml 5%的碳酸氫鈉溶液，震蕩離心，分層后，用一次性注射器吸取上清液經(jīng)0.22μm有機(jī)濾膜過濾后，作為高效液相色譜分析用試樣。

1.4 試樣的制備

若是固體，稱取固體試樣10g稀釋10倍，處理成液體樣品，用離心管稱取液體樣品10ml，樣品處理過程同1.3標(biāo)樣衍生化處理方法。

1.5 回收率和精密度測(cè)定

實(shí)驗(yàn)室稱取6個(gè)不含環(huán)己基氨基磺酸鈉的樣品，作為加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)的樣品，用移液管分別加入2.00mg/ml標(biāo)準(zhǔn)溶液2、5、10、20、40、50ml，按上述樣品前處理和液相色譜操作條件測(cè)定回收率。從同一樣品中稱取6個(gè)試樣，按樣品衍生方法進(jìn)行處理后，按上述液相色譜操作條件測(cè)定環(huán)己基氨基氨基磺酸鈉含量。

2 結(jié)果與分析

2.1 色譜條件的選擇

2.1.1 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇

經(jīng)試驗(yàn)，檢測(cè)波長(zhǎng)選擇在314nm時(shí)，檢測(cè)雜峰少，檢測(cè)結(jié)果滿意。

2.1.2 流動(dòng)相的選擇

通過試驗(yàn)比較發(fā)現(xiàn)，甲醇和乙酸胺水溶液作為流動(dòng)相時(shí)，基線噪聲較大且倒峰離甜蜜素較近，影響積分；甲醇和水作為流動(dòng)相與乙腈和水作為流動(dòng)相比例為80∶20、90∶10和95∶5時(shí)，分離情況基本是相同的。但考慮到乙腈對(duì)人身安全存在更大威脅，故本研究選擇采用對(duì)人體影響更小、更為便宜的甲醇和水作為流動(dòng)相。同時(shí)比較可知，流動(dòng)相甲醇∶水為95∶5為最佳出峰時(shí)間。

2.1.3 色譜柱和檢測(cè)器的選擇

圖1 環(huán)己基氨基磺酸鈉標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖

圖2 環(huán)己基氨基磺酸鈉加標(biāo)樣品色譜圖

采用XB-C18柱( 5μm,250mm×4.6mm)，柱溫25℃，紫外檢測(cè)器，檢測(cè)波長(zhǎng)為314nm，流動(dòng)相甲醇為水為95∶5，流速為1ml/min，進(jìn)樣量為20μl,經(jīng)試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，保留時(shí)間在5.45min左右，標(biāo)準(zhǔn)與加標(biāo)樣品分離效果很好(圖1、圖2)。

圖3 環(huán)己基氨基氨基磺酸鈉標(biāo)準(zhǔn)校正曲線

2.2 標(biāo)準(zhǔn)校正曲線的線性范圍

按所選擇的色譜條件進(jìn)樣不同質(zhì)量濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液20μl，獲得不同質(zhì)量濃度下各組分的峰面積，以標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為橫坐標(biāo)x，以環(huán)己基氨基磺酸鈉響應(yīng)值峰面積為縱坐標(biāo)y,以質(zhì)量濃度和峰面積繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，如圖3所示。由圖3可知，在樣品中環(huán)己基氨基磺酸鈉含量為 2.0～50.0μg/ml的范圍內(nèi)，峰面積與環(huán)己基氨基磺酸鈉具有良好的線性關(guān)系，回歸方程為y=2007x-559.39,相關(guān)系數(shù)R2=0.9994。

2.3 回收率的測(cè)定

實(shí)驗(yàn)室稱取6個(gè)不含環(huán)己基氨基磺酸鈉的樣品，作為加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)的樣品，用移液管分別加入2.00mg/ml標(biāo)準(zhǔn)溶液2、5、10、20、40、50ml，按上述樣品前處理和液相色譜操作條件測(cè)定回收率。結(jié)果表明，其回收率在 95.6%～99.4%之間(表1)。

2.4 精密度的測(cè)定

從同一樣品中稱取6個(gè)試樣，按樣品衍生方法進(jìn)行處理后，按上述液相色譜操作條件測(cè)定環(huán)己基氨基氨基磺酸鈉含量，得到RSD(相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差)為3.45%。

表1 環(huán)己基氨基磺酸鈉的回收率

2.5 檢測(cè)限的確定

將環(huán)己基氨基氨基磺酸鈉標(biāo)準(zhǔn)系列的最小濃度溶液逐步稀釋，衍生處理后進(jìn)樣分析，以檢測(cè)結(jié)果中色譜峰高3倍相對(duì)應(yīng)的濃度為檢出限，結(jié)果表明，此分析方法的檢測(cè)限為0.5g/kg。

3 小結(jié)

本研究結(jié)果表明，HPLC-UV法可簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、快速地測(cè)定食品中環(huán)己基氨基氨基磺酸鈉的含量，精密度和準(zhǔn)確度高，干擾少，且投入成本低，是食品中環(huán)己基氨基氨基磺酸鈉檢測(cè)的良好方法。

[1]GB2760-2011食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)[S].

[2]GB/T5009.97-2003食品中環(huán)己基氨基磺酸鈉的測(cè)定[S].

[3]王凱云.食品中甜蜜素的高效液相色譜法[J].福建分析測(cè)試，2004,13(3-4)：2041-2043.

[4]王 坤，唐 洪，年 娟，等.衍生HPLC法快速檢測(cè)食品中微量甜蜜素含量[J].中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志,2009,(12)：2813-2814.

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A

1673-1409(2012)05-S032-03

2012-05-05

楊 玉(1975-)，女，福建福清人，碩士生，工程師，主要從事食品、飼料等檢測(cè)分析與研究。

10.3969/j.issn.1673-1409(S).2012.05.009