蘇日古格，佟春蘭，包海鷹

（吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)中藥材學(xué)院，吉林 長春 130118）

蒙古口蘑（Tricholoma mongolicum Imai），又稱白蘑、口蘑、草原白蘑、珍珠蘑、查干蘑菇、云盤蘑、銀盤蘑等。由日本真菌學(xué)者今井三子（S.Imai）于1937年定名發(fā)表，并記載其漢語名稱為白蘑菇[1]。隸屬于傘菌目（A-garicales）、口蘑科（Tricholomataceae）、口蘑屬（Tricholoma）真菌。夏秋季尤其在立秋前后大量地產(chǎn)生在草原上群生并形成蘑菇圈。分布于我國東北、河北張家口以北及內(nèi)蒙古中東部,東起呼貝爾盟[2]，西達(dá)包頭地區(qū)[3]，蒙古，俄羅斯的亞洲地區(qū)（阿爾泰）[4，5]。蒙古口蘑子實體較大，菌肉肥厚、質(zhì)地鮮嫩、味鮮香濃，為著名食藥用菌[6]。民間用于消化不良，脘腹脹滿，胃氣痛，泄瀉等癥，在民間也流傳著許多單驗方及食療方[7]。在蒙藥中用于治療外傷及解毒[8]。

蒙古口蘑（Tricholoma mongolicum）是我國寶貴的食藥用菌資源，由于蒙古口蘑自然生長季節(jié)性強(qiáng)，加之生態(tài)環(huán)境惡化、資源銳減，至今尚不能實現(xiàn)人工馴化栽培[9，10]，所以蒙古口蘑的產(chǎn)量和質(zhì)量每況愈下，難以滿足商品化、市場化的要求，導(dǎo)致蒙古口蘑價格上漲,每公斤蒙古口蘑要幾百元甚至上千元。由于價格昂貴市場上出現(xiàn)了大量的蒙古口蘑劣質(zhì)品及偽品。本文從性狀鑒定、薄層色譜鑒定、紅外檢測、石油醚提取物的化學(xué)成分GC－MS分析等化學(xué)檢識方面分別對蒙古口蘑及其混淆品進(jìn)行了系統(tǒng)研究。

1 實驗材料與儀器

1.1 實驗材料

蒙古口蘑子實體于2008年采自內(nèi)蒙古呼倫貝爾市陳巴爾虎旗草原，由吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)菌物研究所圖力古爾教授鑒定。蒙古口蘑樣品1、樣品2、樣品3是2008年購于呼倫貝爾盟海拉爾市新橋市場。

1.2 儀器與試劑

電熱鼓風(fēng)干燥箱，上海實驗儀器廠有限公司；SHB－B95型循環(huán)水式多用真空泵，鄭州長城科工貿(mào)有限公司；FW－200型高速萬能粉碎機(jī)，北京中興偉業(yè)儀器有限公司；紫外燈，AUY220型電子分析天平，日本島津公司；XS－212－201生物學(xué)顯微鏡紅外檢測儀，德國 Bruker WERTREX型紅外檢測儀。

試劑：水合氯醛、稀甘油、氫氧化鉀、濃硝酸。

2 研究方法

2.1 性狀鑒別

通過眼觀、手摸、鼻聞、口嘗及水試的方法對新鮮子實體的形狀、大小、色澤、表面、質(zhì)地、斷面、氣味等特點(diǎn)進(jìn)行鑒別。

2.2 理化檢識鑒別

蒙古口蘑、樣品1、樣品2、樣品3干燥子實體粉碎，各樣稱取品8 g，梯度提取法分別用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、丙酮、甲醇索式提取10 h，減壓濃縮各提取液。

2.2.1 薄層色譜鑒定

將其各個層4種提取液溶于有機(jī)溶劑后在薄層板上分別點(diǎn)樣，以下展開劑條件下薄層展開，如氯仿層以氯仿：石油醚=1∶2；乙酸乙酯層以乙酸乙酯：氯仿=3∶4；丙酮層以乙酸乙酯：氯仿=1∶1。

2.2.2 紅外檢測

4個蘑菇的氯仿提取物、丙酮提取物、甲醇提取物分別減壓濃縮至完全晾干之后分別加5 ml甲醇溶解。

2.2.3 石油醚提取物的化學(xué)成分GC－MS分析

4種蘑菇石油醚提取物通過GC－MS分析，其色譜條件為：HP－5 型毛細(xì)管柱（30 m×0.25 mm×0.25 μm），汽化室溫度 270℃，流速 1.0 mL·min－1，柱溫 80℃（3 min）→150℃→270℃（5 min），接口280℃。質(zhì)譜條件為：離子源溫230℃，采集方式全掃描，掃描范圍45 amu～460 amu，不分流，四極桿150℃，溶劑延遲2.0 min，閥值150。各組分的相對含量是從總離子流色譜圖中用封面積歸一化方法計算而得，采用WILEY.L譜庫檢索，并結(jié)合質(zhì)譜圖中基峰、負(fù)荷比以及相對豐度與標(biāo)準(zhǔn)圖譜的比較，鑒定其化合物。

3 實驗結(jié)果

3.1 來源鑒定及性狀鑒定

蒙古口蘑鮮品：子實體中等至較大；菌蓋直徑5 cm～17 cm，半球形、扁半球形至近平展，白色，光滑，初期邊緣內(nèi)卷；菌肉白色，厚，具香氣；菌肉肥厚，質(zhì)地細(xì)嫩；菌褶白色，彎生，稠密，不等長；菌柄粗壯至肥大，長3.5 cm～7 cm，粗1.5 cm～4.6 cm，基部稍膨大，白色，內(nèi)實；孢子印白色。干品：蒙古口蘑子實體干后，質(zhì)脆，易碎；菌蓋成乳白色；菌褶白色至土黃色；菌柄長度與菌蓋直徑比例不超過1；表面光滑有網(wǎng)狀紋理，質(zhì)地疏松，易折斷，斷面純白色呈粉性，有濃郁的蘑菇香氣（圖2）。蒙古口蘑（Tricholoma mongolicum）又稱白蘑、口蘑、草原白蘑、珍珠蘑、查干蘑菇、云盤蘑、銀盤蘑等。屬傘菌目（Agaricales）、口 蘑 科（Tricholomataceae）、口 蘑 屬（Tricholoma）真菌。夏秋季尤其在立秋前后大量地產(chǎn)生在草原上群生并形成蘑菇圈。

圖2 蒙古口蘑子實體

劣質(zhì)品：某些商家為使蒙古口蘑增重，把新鮮蒙古口蘑子實體泡入水中。泡過水的蒙古口蘑子實體顏色會迅速變褐，甚至變黑，尤其是菌蓋邊緣，并且菌蓋掰開就能看到吸收的水分（圖3）。

圖3 蒙古口蘑劣質(zhì)品圖片

樣品1鮮品：子實體中等，菌蓋2 cm～8 cm，常常顏色多變化，呈現(xiàn)為灰褐、煙灰色至近淡黃色；菌蓋邊緣平滑無條棱，但有時成波浪狀或近似花瓣狀；菌褶窄而密，污白色，稍延生；菌柄長5 cm～9 cm，粗達(dá)3 cm；表面白色，基部往往膨大，中空；孢子印白色。干品：子實體干后，質(zhì)脆，易碎；菌蓋成黃色至褐色；菌褶土黃色；菌柄長度與菌蓋直徑比例超過1.5；表面粗糙、皺褶狀，質(zhì)地疏松，易折斷，斷面純白色至土黃色呈粉性，有濃郁的蘑菇香氣（圖4）。根據(jù)以上特征鑒定樣品1為水粉傘菌（Clitocybe nebularis），又稱水粉蕈、煙云杯傘，當(dāng)?shù)啬撩穹Q之為二白蘑、灰頂二白蘑。屬傘菌目（Agaricales）、口蘑科（Tricholomataceae）、杯傘屬（Clitocybe）真菌。 通常在晚秋季出現(xiàn)在林地上形成大的蘑菇圈。

圖4 樣品1子實體

樣品2鮮品：菌蓋半圓形，中凸，后期微平展，徑6 cm～8 cm，蓋表光滑，干；后期微有龜裂，蓋中央或具不明顯的小鱗片；白色、乳白色或乳黃色，緊壓后微呈黃色；菌肉白色；菌褶密而離生，初白色，成熟后呈粉紅色、深咖啡色；菌柄柱狀，近等粗；中端與蓋緣銜接處層外具絮狀環(huán)膜，白色或乳黃色，脆而易碎；氣香，味特異。干品：子實體干后，質(zhì)脆，易碎；菌蓋白色至微黃色，微有龜裂；菌蓋邊緣與菌柄銜接處具絮狀環(huán)膜；菌柄長度與菌蓋直徑比例超過1.5；菌褶初白色，成熟后呈粉紅色、深咖啡黃色；表面白色至微黃色，粗糙，質(zhì)地疏松，易折斷，斷面白色至土黃色呈粉性，有濃郁的蘑菇香氣（圖5）。根據(jù)以上特征鑒定樣品2為野蘑菇（Agaricus arvensis），也叫田蘑菇、雜蘑、哈日蘑菇，當(dāng)?shù)啬撩穹Q之為雷窩子，長在白蘑蘑菇圈上的二茬白蘑。屬傘菌目（A-garicales）、蘑菇科（Agaricaceae）、蘑菇屬（Agaricus）真菌。夏季生于曠野、肥土、林旁、草原及草地。

圖5 樣品2子實體

樣品3鮮品：子實體中等至較大；菌蓋直徑4 cm～12cm，扁半球形至平展，邊緣內(nèi)卷變至平展和波狀，粘，淺紅褐色，趨向邊緣色淺，被棕褐色細(xì)小鱗片；氣味香；菌肉較厚，污白色，傷處變暗；菌褶密，較窄，污白色帶淺紅褐色，不等長，傷處色變暗；菌柄比較粗壯，內(nèi)實至松軟，長3 cm～8 cm，粗1 cm～3 cm，有的下部膨大，白色擦傷處帶紅褐色；孢子印白色。干品：子實體干后，質(zhì)脆，易碎；菌蓋黃色至褐色，被棕褐色細(xì)小鱗片；菌褶黃色；表面紫褐色附有白色粉狀小顆粒，質(zhì)地疏松，易折斷，斷面白色至土黃色呈粉性，有濃郁的蘑菇香氣（圖6）。根據(jù)以上特征鑒定樣品3為楊樹口蘑（Tricholoma populinum），又稱楊林口蘑，楊口蘑，當(dāng)?shù)啬撩穹Q之為油蘑、土豆蘑。 屬傘菌目（Agaricales）、口蘑科（Tricholomataceae）、口蘑屬（Tricholoma）真菌。秋季在楊樹林中沙質(zhì)的土地上群生、散生。

3.3 4種樣品的理化鑒定

圖6 樣品3子實體

3.3.1 薄層色譜鑒定

丙酮層Rf=0.712和Rf=0.76處，4種菌物都有粉色斑點(diǎn)，Rf=0.712處樣品3和蒙古口蘑色深。Rf=0.76處樣品2和蒙古口蘑色比較深。乙酸乙酯層Rf=0.677處四種菌物都有灰色斑點(diǎn)，顏色都比較深。Rf=0.74處樣品2、樣品3和蒙古口蘑有藍(lán)色斑點(diǎn)，樣品2色深。Rf=0.84處只有蒙古口蘑有紫粉色斑點(diǎn)，具有鑒定意義。氯仿層Rf=0.46處4個菌物都有粉色斑點(diǎn)，顏色都比較深。Rf=0.58處樣品2和蒙古口蘑色有粉色斑點(diǎn)，樣品2顏色都比較深。

3.3.2 紅外檢測

圖7 樣品1氯仿層紅外圖譜

圖8 樣品2氯仿層紅外圖譜

圖9 樣品3氯仿層紅外圖譜

圖10 蒙古口蘑氯仿層紅外圖譜

圖11 樣品1丙酮層紅外圖譜

圖12 樣品2丙酮層紅外圖譜

圖13 樣品3丙酮層紅外圖譜

圖14 蒙古口蘑丙酮層紅外圖譜

圖15 樣品1甲醇層紅外圖譜

圖16 樣品2甲醇層紅外圖譜

圖17 樣品3甲醇層紅外圖譜

圖18 蒙古口蘑甲醇層紅外圖譜

用移液槍吸取50 μL樣品，均勻涂在溴化鉀片上，將涂好的片子置于光路中，用電子計算機(jī)程序控制進(jìn)行測定400 cm－1～4 000 cm－1間的光譜。 結(jié)果分析見圖 7 至圖18。蒙古口蘑、樣品1、樣品2、樣品3的氯仿、丙酮和甲醇提取物的紅外光譜表明，在官能團(tuán)區(qū)（1 300 cm－1～4 000 cm－1），樣品 1、樣品 2、樣品 3 氯仿層在 1 651 cm－1～1 384 cm－1處有相同的吸收峰。而蒙古口蘑氯仿層在1 627 cm－1～1 665 cm－1處有個強(qiáng)吸收峰，1 732 cm－1處有較強(qiáng)吸收峰，其他3種無。類似這樣的小特征峰可做為鑒別蒙古口蘑及以上3種混淆品的依據(jù)。

指紋區(qū)（1 300 cm－1～910 cm－1），樣品 1、樣品 2、樣品 3 氯仿層在 1 012 cm－1～1 031 cm－1處有相同的強(qiáng)吸收峰，而蒙古口蘑氯仿層沒有這個吸收峰。蒙古口蘑氯仿層在1 172 cm－1處有吸收峰，其他3種無。4種樣品丙酮層提取物和甲醇提取物中，樣品1、樣品2、樣品3在1 018 cm－1～1 053 cm－1處有1個相同的強(qiáng)吸收峰。這些差異鑒別蒙古口蘑及其混淆品具有一定的鑒定意義。

芳香區(qū)（910 cm－1～650 cm－1）的吸收峰比較小，也有較大差異，如蒙古口蘑氯仿層提取物在723 cm－1處有1個小尖峰，其他3種都無。蒙古口蘑丙酮和甲醇層提取物在783 cm－1、721 cm－1、680 cm－1處有小尖峰，其他 3 種都無。這對用紅外方法鑒別蒙古口蘑有輔助意義。

3.3.3 4種樣品的石油醚提取物的GC－MS分析結(jié)果

4種樣品石油醚提取物的GC－MS總離子流色譜結(jié)果見圖19至圖22。

圖19 樣品1石油醚提取物GC-MS總離子流圖

圖20 樣品2石油醚提取物GC-MS總離子流圖

圖21 樣品3石油醚提取物GC-MS總離子流

圖22 蒙古口蘑石油醚提取物GC-MS總離子流圖

4種樣品的石油醚提取物各組分的相對含量是從總離子流色譜圖中用峰面積歸一化方法計算而得，結(jié)果見表1至表4。

采用WILEY.L譜庫檢索結(jié)果，并結(jié)合質(zhì)譜圖中基鋒、負(fù)荷比以及相對豐度與標(biāo)準(zhǔn)圖譜的比較，以上4種樣品分別鑒定出樣品1有5個化合物、樣品2鑒定出2個化合物、樣品3鑒定出3個化合物、蒙古口蘑鑒定出10個化合物。其中正－十六烷酸是四者共有的化學(xué)成分（表1～表4）。除蒙古口蘑外，其他3種蘑菇石油醚提取物都含有(Z,Z)－9,12－十八碳二烯酸。

表1 樣品1石油醚提取物GC-MS聯(lián)機(jī)分析結(jié)果

表2 樣品2石油醚提取物GC-MS聯(lián)機(jī)分析結(jié)果

表3 樣品3石油醚提取物GC-MS聯(lián)機(jī)分析結(jié)果

表4 蒙古口蘑石油醚提取物GC-MS聯(lián)機(jī)分析結(jié)果

4 討論

本論文通過來源鑒定和性狀鑒定方法相結(jié)合，鑒定樣品1為水粉傘菌（C.nebularis）、樣品2為野蘑菇（A.arvensis）、樣品3為楊樹口蘑（T.populinum）。并且將三者和蒙古口蘑進(jìn)行性狀特征和薄層色譜、紅外檢測、石油醚提取物GC－MS等理化特征進(jìn)行對比鑒定，結(jié)果顯示四者具有不同程度的差異性。

水粉傘菌與蒙古口蘑干品鑒別要點(diǎn)：蒙古口蘑菌柄粗短、肥大、白色、光滑，水粉傘菌菌柄較長基部膨大、褐黃色、條狀紋理；蒙古口蘑菌柄長度與菌蓋直徑比例不超過1，而水粉傘菌菌柄長度與菌蓋直徑比例超過1.5。

野蘑菇與蒙古口蘑干品鑒別要點(diǎn)：蒙古口蘑菌柄長度與菌蓋直徑比例不超過1，而野蘑菇菌柄長度與菌蓋直徑比例超過1.5；蒙古口蘑菌褶白色，而野蘑菇菌褶初白色，成熟后呈粉紅色、深咖啡色；蒙古口蘑菌蓋白色、光滑，而野蘑菇菌蓋白色粗糙、微有龜裂；野蘑菇菌蓋邊緣與菌柄銜接處具絮狀環(huán)膜，白色或乳黃色，脆而易碎，而蒙古口蘑沒有。

楊樹口蘑與蒙古口蘑干品鑒別要點(diǎn)：蒙古口蘑菌褶白色，而楊樹口蘑菌褶污白色帶淺紅褐色；蒙古口蘑菌蓋白色、光滑，而楊樹口蘑菌蓋紅褐色、被棕褐色細(xì)小鱗片；蒙古口蘑有濃郁的鮮味而楊樹口蘑有股略發(fā)咸的香氣。

從紅外圖譜上蒙古口蘑氯仿層在1 627 cm－1～1 665 cm－1處有個強(qiáng)吸收峰，1 732 cm－1處有較強(qiáng)吸收峰，其它3種無；在1 172 cm－1處有吸收峰；在723 cm－1處有1個小尖峰，其他3種都無。蒙古口蘑丙酮和甲醇層提取物在783 cm－1、721 cm－1、680 cm－1處有小尖峰，其他 3 種都無。 薄層色譜鑒別，蒙古口蘑乙酸乙酯層Rf=0.84處有紫粉色斑點(diǎn)，其他3種均沒有。石油醚提取物GC－MS分析，水粉杯傘石油醚層鑒定出5個化合物；野蘑菇石油醚層鑒定出2個化合物；楊樹口蘑石油醚層鑒定出3個化合物而蒙古口蘑石油醚層鑒定出10個化合物。其中正－十六烷酸（n－Hexadecanoic Acid）是四者共有的化學(xué)成分。除了蒙古口蘑外，其他3種菌物石油醚提取物都含有 (Z,Z)－9,12－十八碳二烯酸。這些差異在鑒別蒙古口蘑及其混淆品方面具有一定的鑒定意義。

[1]Imai S.On an edible Mongolian fungus “Pai－moku”[J].Pro Imp Acad(Japan),1937,13(7)：280－282.

[2]Akaishi Y.The Survery of the “Pai－mo－mo” in Hu－lun－peierh[J].Research Bull Agr Exp Stat S Manch Rsilw Co,1937(20)：145－157.

[3]楊文勝.包頭地區(qū)的食用和藥用真菌[J].食用菌，1990，12(6)：4.

[4]戴芳瀾.中國真菌總匯[M].北京：科學(xué)出版社，1979.

[5]Singer R.Notes sur quelques basidiomycetes[J].RevMcol,1939(4)：64－72.

[6]宋超，圖力古爾.蘑菇圈形成機(jī)理及其生態(tài)學(xué)意義[J].中國食用菌，2007，26(6)：9－10.

[7]吳恩奇，圖力古爾.蒙古口蘑研究進(jìn)展[J].中國食用菌，2007，26(4)：3－5.

[8]占布拉·道爾吉.蒙藥正典[M].呼和浩特：內(nèi)蒙古人民出版社，2007.

[9]田紹義，黃文勝.河北壩上蒙古口蘑生態(tài)觀察[J].真菌學(xué)報，1992，11(2)：163－166.

[10]溫云，韓進(jìn)業(yè).河北壩上口蘑的商業(yè)開發(fā)與人工馴化初[J].食用菌，2002(6)：3－4.