李長(zhǎng)春， 李光明， 胡 欣， 付 曦， 潘榮強(qiáng)， 郭翠華， 文世明

(川北醫(yī)學(xué)院， 四川 南充 637000)

食管癌是發(fā)生在食管上皮組織的惡性腫瘤，占所有惡性腫瘤的2%，鱗狀細(xì)胞癌是其主要組織學(xué)類型。由于食管癌癥狀不典型，臨床確診病例多數(shù)都已是中晚期，從而失去根治性手術(shù)的機(jī)會(huì)，需要接受放射治療［1］。目前分子生物學(xué)的研究成果已表明，食管癌的發(fā)生與癌基因，表皮生長(zhǎng)因子及其受體(epidermal growth factor receptor，EGFR)的活化以及抑癌基因的失活或丟失密切相關(guān)，70% －80%食管癌患者出現(xiàn)EGFR的過(guò)表達(dá)，同時(shí)其mRNA也顯著高于正常食管粘膜組織，認(rèn)為EGFR基因轉(zhuǎn)錄增強(qiáng)與食管癌發(fā)展有關(guān)［2，3］。本文選取在我院接受治療的160例食管鱗癌患者為研究對(duì)象，分別檢測(cè)他們外周血EGFR基因多態(tài)位點(diǎn)rs763317的基因型，并進(jìn)一步統(tǒng)計(jì)分析EGFR的rs763317位點(diǎn)SNP在食管癌放射治療中的相關(guān)性，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料:選取2008年3月至2011年3月在我院接受放射治療的食管癌患者160例，其中男86例，女74例，年齡30歲－85歲，平均年齡49.5歲，中老年患者多見(jiàn)。患者經(jīng)內(nèi)鏡、胸部CT和組織病理學(xué)確診，組織學(xué)證實(shí)均為鱗癌;病變長(zhǎng)度2－7cm，無(wú)鎖骨上淋巴結(jié)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，治療前肝、腎功能及血常規(guī)正常，X線病理分型:潰瘍型62例、髓質(zhì)型53例、腔內(nèi)型45例。患者的臨床資料具可比性(P＞0.05)。

1.2 治療與療效評(píng)價(jià):患者仰臥位，熱塑體膜固定，CT掃描模擬定位，將數(shù)據(jù)輸入CMS治療計(jì)劃系統(tǒng)，根據(jù)IRCU50、62號(hào)文件規(guī)定勾畫靶區(qū):食管造影和胃鏡顯示病變長(zhǎng)度及CT檢查所示的腫瘤范圍和位置為GTV，CTV包括可顯示的GTV和需要被殺滅的亞臨床病灶的體積，前后左右方向各外放0.5－0.8cm，PTV為CTV外擴(kuò)0.5cm，同時(shí)勾畫脊髓、心臟及雙肺。通過(guò)劑量體積直方圖與平面二維等劑量曲線選擇最佳治療計(jì)劃方案，脊髓心臟受量均在耐受范圍內(nèi)，肺V20＜30%。確認(rèn)后進(jìn)行CT復(fù)位驗(yàn)證。采用西門子直線加速器6MVX 線實(shí)施治療。DT60－66Gy，2Gy/30－33F，共6－7周。治療前取患者外周血，采用RECIST標(biāo)準(zhǔn)評(píng)價(jià)近期療效，治療有效(臨床獲益)者包括完全緩解，部分緩解，病情穩(wěn)定超過(guò)24周，治療無(wú)效為在治療24周內(nèi)出現(xiàn)病情進(jìn)展。

1.3 rs763317基因型分析:采用MassARRAY SNP分型技術(shù)分別檢測(cè)患者外周血EGFR基因多態(tài)位點(diǎn)rs76 3317的基因型，再用PCR－RFLP法檢測(cè)這些基因型的SNP。分別取所有患者抗凝外周靜脈血2mL，苯酚－氯仿法提取模板DNA。采用PCR的方法擴(kuò)增EGFR基因第1內(nèi)含子片段，PCR反應(yīng)的引物分別為:F－5’－AGGGCTGAGAAAGAGAG ACA－3’和 R－5’－ TGGGGAGA AAGTTAAAGCTA－3 ’，產(chǎn)物大小為 240bp，25μL PCR混合液中含0.1μg模板，DNA引物濃度0.4μmol/L。擴(kuò)增條件為:95℃預(yù)變性3min后，于94℃30s、60℃ 30s和72℃ 30s進(jìn)行40個(gè)循環(huán)，最后72℃延伸5min。PCR產(chǎn)物采用限制性內(nèi)切酶TfiI進(jìn)行酶切，酶切溫度60℃，酶切產(chǎn)物經(jīng)凝膠電泳分析，讀取基因型。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理:所有資料應(yīng)用SPSS 16.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，rs763317基因型與放射治療近期療效關(guān)系的分析采用X2檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 rs763317基因分型結(jié)果:對(duì)160例晚期食管癌患者的外周血DNA進(jìn)行rs763317基因分型。其中GA基因型116例，占72.5%;GG基因型24例，AA基因型20例，GG/AA基因型占28.5%，見(jiàn)表1。

表1 rs763317基因分型及其與放射治療的相關(guān)性 (n)

2.2 rs763317各基因型與臨床近期療效的關(guān)系:在160例接受放射治療的食管癌患者中，將rs763317不同基因型與的近期療效進(jìn)行分析(見(jiàn)表1)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)攜帶GA基因型的116例患者中，有效76例，臨床獲益率為65.5%;GG基因型的24例患者中有效3例，臨床獲益率僅為12.5%，AA基因型20例患者中有效1例，臨床獲益率僅為5%;攜帶GA/AA基因型患者臨床獲益率為9.1%。rs2293347基因型GA與放射治療的近期療效密切相關(guān)(P＜0.001)，而GG和AA等位基因攜帶者的療效差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。

3 討論

食管癌是一種嚴(yán)重威脅人類生命健康的消化道惡性腫瘤，我國(guó)是食管鱗狀細(xì)胞癌的高發(fā)國(guó)家，其死亡率居第四位。由于患者的早期癥狀不明顯，絕大多數(shù)病人就診時(shí)已屬中晚期，預(yù)后較差。目前，以手術(shù)治療為主，結(jié)合放化療的方案漸已成熟，但五年生存率低［4］。近年來(lái)，隨著腫瘤分子生物學(xué)和細(xì)胞生物學(xué)等基礎(chǔ)學(xué)科的發(fā)展，利用分子靶向治療提高癌癥病人的治療效果已成為新的發(fā)展方向，并漸成為抗腫瘤治療的重要組成部分，尤其針對(duì)表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)的研究已在各類腫瘤的治療中取了重大進(jìn)展［5］。EGFR廣泛分布在人體上皮細(xì)胞膜表面，并在多種上皮性腫瘤中存在高表達(dá)，其介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)效應(yīng)包括腫瘤細(xì)胞的增殖、遷移、凋亡抑制和血管生成等諸多方面，因此，EGFR是目前最有應(yīng)用前景的特異性治療靶點(diǎn)之一［6］。有研究結(jié)果表明EGFR基因的過(guò)表達(dá)與食管癌的惡性程度呈正相關(guān)。已經(jīng)證實(shí)EGFR的第一內(nèi)含子區(qū)rs763317位點(diǎn)單核苷酸多態(tài)性(SNP)與肺癌有相關(guān)性［7］。本組研究通過(guò)對(duì)160例漢族人群的食管癌患者進(jìn)行基因分型顯示rs763317位點(diǎn)的三個(gè)等位基因分別為AA、GA和GG(G＞A)。同時(shí)我們對(duì)這些患者實(shí)施單一的放射治療，并參照RECIST標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行近期療效評(píng)價(jià)，最后的相關(guān)性結(jié)果顯示AA基因攜帶者對(duì)放療敏感，而GA/GG攜帶者對(duì)放療不敏感。

單核苷酸多態(tài)性(SNP)是指在基因組上單個(gè)核苷酸的變異，形成的遺傳標(biāo)記，其數(shù)量很多，多態(tài)性豐富，這種變異包括置換、顛換、缺失和插入等，最終造成不同個(gè)體對(duì)藥物和疾病的易感性不同，所以研究食管癌患者的SNP有助于發(fā)掘新的治療靶點(diǎn)。EGFR作為和食管癌有密切關(guān)系的基因，與之相關(guān)的研究已相當(dāng)深入，但多集中在外顯子部分，對(duì)其內(nèi)含子的研究較少。一般認(rèn)為基因的內(nèi)含子不參與蛋白的表達(dá)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示EGFR的第一內(nèi)含子區(qū)rs763317位點(diǎn)的不同基因型與食管癌的放療敏感性具有相關(guān)性。這為我們的臨床治療提供了一個(gè)理論支撐，即為什么兩個(gè)臨床癥狀、分期都相同的食管鱗癌患者，同時(shí)接受相同強(qiáng)度的放射治療最終的效果卻不同，這可能其中一個(gè)攜帶了對(duì)放療敏感的基因;同時(shí)我們的結(jié)論也為臨床對(duì)食管癌的治療指出了新的方向，我們可以利用基因分型篩選出對(duì)放療敏感的患者，對(duì)其開(kāi)展放射治療，這一方面能提高放療的臨床有益率，另一方面又能減低放療對(duì)不敏感患者帶來(lái)的傷害。

［1］張琴，陳德玉，劉俊，等.食管癌同期放化療的療效分析［J］.江蘇大學(xué)學(xué)報(bào)，2008，18(1):79－81.

［2］張功員，尹磊，李晟磊，等.食管鱗狀細(xì)胞癌組織中核干細(xì)胞因子、表皮生長(zhǎng)因子和表皮生長(zhǎng)因子受體mRNA的表達(dá)［J］.解剖學(xué)報(bào)，2008，39(6):862－866.

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［4］王承偉，胡曙東，程茵.64層螺旋CT灌注成像在食管癌放療中的應(yīng)用［J］.江蘇大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版)，2008，18(5):435－437.

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