溫琰

高效液相色譜法測定熱毒平顆粒中梔子苷的含量

溫琰

目的建立以高效液相色譜法測定熱毒平顆粒中梔子苷的含量測定方法。方法 用C18柱，流動相為乙腈-水(13∶87)，檢測波長為238nm，流速為1.0 ml/min，柱溫：30℃。結(jié)果梔子苷進(jìn)樣量在0.221μg～4.420μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(r=0.9994)，回收率為100.6%(RSD=0.6%)。結(jié)論本方法簡便、快速、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，可用于熱毒平顆粒中梔子苷的含量測定。

高效液相色譜法;熱毒平顆粒;梔子苷;含量測定

熱毒平顆粒是由生石膏、金銀花、玄參、地黃、連翹、梔子、甜地丁、黃芩、龍膽、板藍(lán)根、知母和麥冬十二味藥材組成的中藥復(fù)方制劑，具有治療呼吸道感染、流感引起的頭痛、發(fā)熱、咳嗽、咽痛、多痰等的對癥治療，或化膿性扁桃體炎，急性涸炎，急性支氣管炎，單純性肺炎以及慢性上呼吸道炎癥等功效。梔子［2］含有多種環(huán)烯醚萜苷類化合物，包括梔子苷、羥異梔子、京尼平-1-B-龍膽雙糖苷、梔子苷酸和京尼平等。而梔子苷是主要的環(huán)烯醚苷類化合物，為梔子的主要有效成分，現(xiàn)采用高效液相色譜法測定熱毒平顆粒中的梔子苷的含量。

1 儀器與試藥

1.1 主要儀器：Waters515高效液相色譜儀(515泵、2487雙波長紫外檢測器);BP211D電子天平。

1.2 試藥 梔子苷對照品(由中國藥品生物制品檢定所提供);3批熱毒平顆粒樣品(市售);水(超純水)，乙腈(色譜純)，其他試劑(分析純)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)［1］色譜柱：用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，Diamonsil C18(250 mm×4.6 mm，5μm);流動相：乙腈-水(13∶87);流速：1.0 ml·min;檢測波長：238nm;進(jìn)樣量：20.0μl;柱溫：30℃。理論板數(shù)按梔子苷峰計算應(yīng)不低于4000。在此色譜條件下，梔子苷對照品及供試品溶液在相同的保留時間處有吸收峰，而陰性對照溶液無吸收峰，說明陰性對照對試驗(yàn)無干擾。色譜見圖1。

2.2 溶液的制備 對照品溶液：精密稱取梔子苷對照品，加甲醇制成每1 ml含0.1 mg的溶液，作為對照品溶液。

供試品溶液：取本品裝量差異項下的內(nèi)容物，研細(xì)，取約2 g，精密稱定，加水40 ml，振搖使溶解，用水飽和的正丁醇提取4次，每次30 ml，合并正丁醇液，蒸干，殘渣加甲醇適量使溶解，并轉(zhuǎn)移至25 m l量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，棄去初濾液，取續(xù)濾液，作為供試品溶液。

陰性對照溶液：取按處方及工藝制備的不含梔子藥材的樣品，同法制備陰性對照溶液。

圖1 高效液相色譜圖

2.3 線性關(guān)系與考察 取梔子苷對照品用甲醇分別制成每1 m l含 11.05μg、55.25μg、110.5μg、165.75μg、221.0μg 的溶液，精密吸取上述5種溶液各20μl，在上述色譜條件下，分別進(jìn)樣，每種溶液進(jìn)樣2次，記錄色譜圖，測定梔子苷峰面積，以濃度(X)為橫坐標(biāo)，梔子苷峰面積(Y)為縱坐標(biāo)，線性回歸方程為：Y=1364369.8 X+56688.1，相關(guān)系數(shù)：r=0.9994，結(jié)果表明梔子苷進(jìn)樣量在0.221μg～4.420μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.4 精密度、重現(xiàn)性和穩(wěn)定性考察 精密度考察：精密吸取“2.3”項下的梔子苷對照品溶液20μl，按上述色譜條件，連續(xù)進(jìn)樣6次，測定梔子苷峰面積值，結(jié)果峰面積的RSD為0.4%，表明測定方法的精密度良好。

重現(xiàn)性考察：取同一批號的樣品，照“2.3”項下供試品溶液的制備方法平行制備6份供試品溶液，按上述色譜條件，分別進(jìn)樣測定梔子苷峰面積值。結(jié)果含量的RSD為0.5%，表明測定方法的重復(fù)性良好。

穩(wěn)定性考察：取同一供試品溶液，分別于配制后第0、2、4、6和8小時按上述色譜條件，進(jìn)樣測定梔子苷峰面積值。結(jié)果梔子苷峰面積的RSD為0.6%。結(jié)果表明該溶液在8 h內(nèi)基本穩(wěn)定，可滿足實(shí)驗(yàn)的要求。

2.5 回收率試驗(yàn) 精密稱取已知含量的供試品約1 g，共6份，分別精密加入梔子苷對照品溶液5 ml(濃度為：221μg/ml)。照“2.3”項下供試品溶液的制備方法制得供試品液，按上述色譜條件，分別進(jìn)樣測定梔子苷峰面積值，并計算梔子苷的含量。結(jié)果方法的回收率為100.6%，RSD=0.6%，表明方法準(zhǔn)確度良好(表1)。

表1 回收率試驗(yàn)結(jié)果

3 討論

3.1 提取溶劑和提取方法的選擇［3］實(shí)驗(yàn)分別采用以50%甲醇為溶劑超聲處理30 min、以水溶劑溶解樣品后再用乙酸乙酯進(jìn)行提取及以水溶劑溶解樣品后再用水飽和正丁醇進(jìn)行提取。結(jié)果以水溶劑溶解樣品后再用水飽和正丁醇進(jìn)行提取，梔子苷的提取率最高。

3.2 流動相的選擇［2］實(shí)驗(yàn)分別采用乙腈-水(13∶87)、乙腈-0.2%磷酸溶液(13∶87)和甲醇-水-醋酸(80∶20∶0.1)為流動相，結(jié)果以乙腈-水(13∶87)為流動相，分離效果最好。

［1］國家藥典委員會.中國藥典.一部.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：231-232.

［2］王宇曉，李來生，任宇紅.梔子中梔子甙的高效液相色譜分析.江西師范大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版)，2001，25(4)：310-311.

［3］謝海青，陳斌，王彥，等.龍薈丸中梔子苷、龍膽苦苷、蘆薈苷和黃芩苷的多波長HPLC法測定.中國醫(yī)藥工業(yè)雜志，2011，42(1)：48-50.

341000 贛州市食品藥品檢驗(yàn)所

2.6 樣品測定 取3批樣品，分別按“2.3”項下供試品溶液的制備方法制得供試品液。按上述色譜條件，分別進(jìn)樣測定，進(jìn)樣量為20.0μl，測定樣品梔子苷的含量。結(jié)果3批樣品每袋含梔子苷的平均含量分別為6.4 mg、6.0 mg、5.8 mg(n=3)。