梁世艷，張支鳳，李華領(lǐng)，唐朝暉

（甘肅省紅十字血液中心，甘肅 蘭州 730046）

2002年國(guó)際輸血協(xié)會(huì)（ⅠSBT）血型命名委員會(huì)確認(rèn)紅細(xì)胞血型為29個(gè)系統(tǒng)，200多個(gè)抗原。ABO血型是臨床輸血中最重要的血型，Rh血型系統(tǒng)是最復(fù)雜的遺傳多態(tài)性血型系統(tǒng)之一，是人類(lèi)第二大血型系統(tǒng)，抗原性強(qiáng)度僅次于A及B抗原[1]。因此，Rh血型系統(tǒng)的臨床意義僅次于ABO血型系統(tǒng)。隨著臨床成分輸血的開(kāi)展，臨床用血對(duì)Rh（D）陰性血需求量日益增加，如何保障Rh血型系統(tǒng)患者醫(yī)療急救用血是一個(gè)十分迫切的問(wèn)題[2]。特別是事故搶救和產(chǎn)婦大出血，短時(shí)間內(nèi)需求的血量較多[3]。35天保存稀有血型血液明顯不能滿(mǎn)足臨床急救輸血。為了及時(shí)向臨床提供足量的Rh（D）陰性血液，本中心應(yīng)用深低溫冰凍保存紅細(xì)胞技術(shù)，于2010年開(kāi)展了冰凍保存紅細(xì)胞技術(shù)，建立了Rh（D）陰性冰凍紅細(xì)胞庫(kù)，目前已正式向臨床供應(yīng)冰凍解凍去甘油紅細(xì)胞制品?，F(xiàn)將Rh（D）陰性冰凍紅細(xì)胞庫(kù)的建立及臨床應(yīng)用情況報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

全自動(dòng)紅細(xì)胞處理儀（ACP-215型，美國(guó)血液技術(shù)公司）；一次性使用血液甘油化耗材（225型，美國(guó)血液技術(shù)公司）；一次性使用血液去甘油化耗材（235型，美國(guó)血液技術(shù)公司）；57.1%復(fù)方甘油溶液（北京伯德桑特輸采血器材科技開(kāi)發(fā)公司）、9%濃氯化鈉溶液（北京伯德桑特輸采血器材科技開(kāi)發(fā)公司）；0.9%氯化鈉溶液（四川南格爾生物醫(yī)學(xué)股份有限公司）、100+1000 ml子母袋（四川南格爾生物醫(yī)學(xué)股份有限公司）；無(wú)菌接管機(jī)（泰爾茂TSCDst-215A）；-80℃低溫冰箱（青島海爾特種電器有限公司BD-370CF）；離心機(jī)（德國(guó)6000i）；往復(fù)式恒溫?fù)u床（上海智誠(chéng)分析儀器廠(chǎng)ZHWY-110X5）；封管熱合機(jī)（韓國(guó)森通SE250）。

1.2 制備方法

1.2.1 甘油化紅細(xì)胞 將采集后保存6天以?xún)?nèi)的Rh（D）陰性血液在4℃、2500 G/min的條件下離心去除血漿、白細(xì)胞、血小板，制備成濃縮紅細(xì)胞。將濃縮紅細(xì)胞轉(zhuǎn)移至100+1000 ml的子母袋中。接通ACP-215全自動(dòng)紅細(xì)胞處理儀電源，機(jī)器自檢通過(guò)后，選擇甘油化程序。在ACP-215機(jī)器上安裝好225型甘油化耗材后，用無(wú)菌接管機(jī)將裝有濃縮紅細(xì)胞的子母袋與225型耗材連接。再將連接耗材后的裝有濃縮紅細(xì)胞的子母袋固定在配套的振蕩器上，將57%的復(fù)方甘油溶液與耗材穿刺接通。準(zhǔn)備就緒后，按照操作規(guī)程進(jìn)行濃縮紅細(xì)胞的甘油化處理。結(jié)束后，將甘油化的紅細(xì)胞在室溫下靜置30分鐘，再在4℃、1250G/min的條件下離心去除多余的甘油，裝盒、速凍后平放于-80℃低溫冰箱冰凍保存。

1.2.2 去甘油、洗滌紅細(xì)胞 先將Rh（D）陰性冰凍紅細(xì)胞在37℃恒溫水浴箱內(nèi)進(jìn)行融化。同時(shí)，接通ACP-215全自動(dòng)紅細(xì)胞處理儀電源，機(jī)器自檢通過(guò)后，選擇去甘油化程序。按照操作規(guī)程在ACP-215機(jī)器上安裝235型去甘油耗材，先關(guān)閉耗材上的所有卡夾，再按照不同顏色標(biāo)識(shí)分別將9%的濃氯化鈉溶液和0.9%的氯化鈉溶液與耗材穿刺接通。準(zhǔn)備就緒后，將融化后的甘油化血液用無(wú)菌接管機(jī)連接235型耗材，疏通各條管路。再依據(jù)所準(zhǔn)備血液的規(guī)格設(shè)定技術(shù)參數(shù)，確定無(wú)誤后進(jìn)行去甘油洗滌。操作完成后按照相應(yīng)規(guī)格的標(biāo)示量收集去甘油洗滌紅細(xì)胞。

1.3 質(zhì)量檢測(cè)

將融化后洗滌前的甘油化紅細(xì)胞及去甘油洗滌紅細(xì)胞分別留樣送往質(zhì)量管理科進(jìn)行紅細(xì)胞回收率、殘留白細(xì)胞、殘留血小板、甘油含量、游離血紅蛋白檢測(cè)，體外溶血實(shí)驗(yàn)，6個(gè)項(xiàng)目的檢測(cè)。

2 結(jié)果（見(jiàn)表 1、表 2、表 3）

所有去甘油洗滌紅細(xì)胞的質(zhì)控送檢項(xiàng)目實(shí)驗(yàn)結(jié)果全部符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)[4]。

表1 試驗(yàn)階段冰凍解凍去甘油紅細(xì)胞質(zhì)控結(jié)果

表2 2007—2008年Rh（D）陰性血液的篩查及臨床使用情況

表3 2007—2008年陰性血液的臨床供血需求及保障情況[u（%）]

3 討論

隨著醫(yī)學(xué)科學(xué)的發(fā)展，相關(guān)輸血技術(shù)也在不斷發(fā)展提高。輸血在臨床上作為一種特殊的治療手段，拯救了無(wú)數(shù)患者，輸血量也以百分之十幾的速度在逐年增加。作為人類(lèi)第二大血型系統(tǒng)的Rh（D）陰性血型的血液需求量也在逐年增加。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，Rh（D）陰性在我國(guó)漢族人群中只占0.3%～0.5%[5]，較高的民族如維吾爾族、哈薩克族也不過(guò)5%。甘肅省是一個(gè)多民族地區(qū)，有55個(gè)少數(shù)民族，占全省總?cè)丝诘?.75%。2007年及2008年甘肅省血液中心篩查血液94506單位，篩查出Rh（D）陰性血液548.5單位，檢出率為0.46%，Rh（D）陰性發(fā)生率明顯高于漢族人群。由于受到液態(tài)血液保存期35天的限制，造成了稀有血型血液資源的嚴(yán)重浪費(fèi)和突出的供需矛盾。甘肅省血液中心2007年和2008年兩年共采集Rh（D）陰性血液548.5單位，臨床使用 Rh（D）陰性血液488.5單位，而作為Rh（D）陽(yáng)性使用的血液有60單位，占總采集量的11%。蘭州市自2011年建立了Rh（D）陰性冰凍紅細(xì)胞庫(kù)以來(lái)，2011年采集Rh（D）陰性血液477.5單位，作為Rh（D）陽(yáng)性使用的血液有15.5單位，占總采集量的3.25%，稀有血型血液資源的浪費(fèi)明顯減少，有效降低了蘭州市稀有血型血液資源的浪費(fèi)。

目前臨床上緊急提供Rh（D）陰性血液的途徑有兩個(gè)：（1）從Rh（D）陰性血型獻(xiàn)血者檔案中選擇血型適合的人，并聯(lián)系其前來(lái)獻(xiàn)血；（2）從其他地區(qū)調(diào)血。如果本地一時(shí)找不到合適的獻(xiàn)血者，必須從外地調(diào)血，手續(xù)繁瑣，耗時(shí)長(zhǎng)，不能適應(yīng)臨床急救用血的需要。建立Rh（D）陰性冰凍紅細(xì)胞庫(kù)，可以在保證平時(shí)一定的液態(tài)血液庫(kù)存前提下，將多余的各種血型的Rh（D）陰性血液冰凍保存，積累一定比例，以備急救時(shí)的臨床用血需要[6]。本中心于2010年開(kāi)展了冰凍保存紅細(xì)胞技術(shù)，應(yīng)用ACP-215全自動(dòng)紅細(xì)胞處理儀處理冰凍紅細(xì)胞，其回收率及輸注后存活率均十分理想[7]。建立Rh（D）陰性冰凍紅細(xì)胞庫(kù)以來(lái)，共制備Rh（D）陰性冰凍紅細(xì)胞178.5單位,冰凍解凍去甘油紅細(xì)胞38.5單位。2007—2008年陰性血液的臨床供血需求716.5單位，正常供血488.5單位，占臨床需求的68.2%；未滿(mǎn)足67單位，占臨床需求的9.4%。2011年建立Rh（D）陰性冰凍紅細(xì)胞庫(kù)后，未出現(xiàn)Rh（D）陰性血液不能滿(mǎn)足臨床供應(yīng)問(wèn)題。而且在Rh（D）陰性液態(tài)血液不能滿(mǎn)足急救需要時(shí)，已有3次為臨床提供“冰凍解凍去甘油紅細(xì)胞”制品而挽救患者生命的成功事例。以上事例均證實(shí)，建立Rh（D）陰性冰凍紅細(xì)胞庫(kù)能解決稀有血型的臨床急救用血，具有重要的臨床意義。蘭州市Rh（D）陰性冰凍紅細(xì)胞庫(kù)的建立和運(yùn)行是帶動(dòng)提高我省血液儲(chǔ)備和應(yīng)對(duì)公共衛(wèi)生突發(fā)事件血液供應(yīng)能力的有力措施。將未開(kāi)展該技術(shù)的蘭州市周邊地市的稀有血型收集保存，對(duì)保障蘭州市及周邊地市的稀有血型急救用血及時(shí)供給具有積極的社會(huì)意義。因此，Rh（D）陰性冰凍紅細(xì)胞庫(kù)的建立，將平時(shí)采集到的Rh（D）陰性血液深低溫保存，能使紅細(xì)胞保存期延長(zhǎng)，有效解決了Rh（D）陰性血液不能長(zhǎng)期保存，臨床急需時(shí)不能及時(shí)滿(mǎn)足需求的難題[2]。

[1]高峰.臨床輸血與檢驗(yàn)[M].2版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2003.

[2]陳均.深低溫保存Rh（D）陰性血冷凍血庫(kù)的建立及其臨床應(yīng)用[J].臨床血液學(xué)雜志：輸血與檢驗(yàn)版，2007，4（2）：66.-68

[3]唐秋民.稀有血型血液冷凍血庫(kù)的建立及臨床意義[J].廣西醫(yī)學(xué)，2008，30（9）：1400-1401.

[4]中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部.血站基本標(biāo)準(zhǔn)[S].2000.

[5]于琦.Rh（D）陰性血液冰凍血庫(kù)的建立及意義[J].中國(guó)輸血雜志,2001,1（14）：30-30.

[6]許德義，趙寧江，杜勇，等.紅細(xì)胞的低溫冷凍保存及臨床意義[J].臨床輸血與檢驗(yàn)，2004，6（3）：182-184.

[7]Valeri CR,Ragno G,P ivacek L,et al.In vivo surval of apheresis RBC,frozen with 40 percent（Wt/Vol）glycerol deglycerolized in the ACP215,and stored at 4 degrees C in AS-3 for up to 21 days[J].Tranfusion,2001,41(7):928-932.■