韓占友

（內(nèi)蒙古呼倫貝爾市食品藥品檢驗(yàn)所，內(nèi)蒙古 海拉爾 021008）

額力根烏日樂由熊膽粉、人工牛黃、紅花、黃連、木香等五味藥組成的丸劑。其中紅花具通經(jīng)散瘀，消腫止痛的功能。選擇紅花的主要成分羥基紅花黃色素A作為該藥品的含量控制指標(biāo)是可行的，本實(shí)驗(yàn)采用高效液相色譜法，參照《中國藥典》2005年版一部中“紅花”項(xiàng)下的含量測定方法，對(duì)處方中紅花所含的羥基紅花黃色素A進(jìn)行測定，通過試驗(yàn)分析，結(jié)果表明該方法重現(xiàn)性好，專屬性強(qiáng)，方中其它組分對(duì)羥基紅花黃色素A的測定無干擾，本方法可作為該藥品的質(zhì)控方法。

1 儀器與試藥

1.1 儀器：島津LC-2010A HT高效液相色譜儀 SCL-10ATvp型控制器，SPD-10Avp型檢測器，LCsolution色譜工作站。UA-1700型紫外－可見分光光度計(jì)。Sartorius Bp121S(0.1mg)Bp211D(0.01mg)電子天平。

1.2 試劑與試藥:羥基紅花黃色素A對(duì)照品（批號(hào)：111637-200503，供含量測定用）：由中國藥品生物制品檢定所提供；樣品：額力根烏日樂由呼倫貝爾市新巴爾虎左旗蒙醫(yī)院提供。甲醇為色譜純，乙腈為色譜純，水為高純水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件:十八烷基建和硅膠為填充劑；流動(dòng)相：甲醇-乙腈-0.7%磷酸（26:2:72）（用三乙胺調(diào) pH6.0±0.1）；柱溫：30℃；檢測波長：403nm；進(jìn)樣量：10μL。

2.2 提取條件的選擇:參照中國藥典2005版一部“紅花”項(xiàng)下對(duì)羥基紅花黃色素A的提取方法，以25%甲醇作為提取溶劑進(jìn)行超聲提取，為保證被測成分的完全提取，實(shí)驗(yàn)中考察了超聲20、30、40、50（min）不同提取時(shí)間對(duì)提取效率的影響，含量測定結(jié)果見表1。

表1 羥基紅花黃色素A提取效率考察結(jié)果

從表中數(shù)據(jù)可見，超聲40min后供試品中羥基紅花黃色素A的含量基本穩(wěn)定不變，故將提取時(shí)間定為超聲40min。

2.3 試驗(yàn)溶液的制備:

對(duì)照品溶液的制備:取羥基紅花黃色素A對(duì)照品適量，精密稱定，加25%甲醇制成每1mL含67.2μg的溶液，即得。

供試品溶液的制備:取本品約0.8g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入25%甲醇50mL，稱定重量，超聲40min，放冷，再稱定重量，用25%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

陰性對(duì)照品溶液的制備:精密稱取按處方比例并以相同工藝制備的缺紅花的樣品0.8g按供試品溶液制備法制得陰性對(duì)照溶液。在上述色譜條件下，分別精密吸取對(duì)照品溶液、陰性對(duì)照溶液、供試品溶液各10μL，分別注入液相色譜儀，測得結(jié)果為：陰性對(duì)照色譜圖中在與羥基紅花黃色素A對(duì)照品以及供試品色譜圖相應(yīng)的保留時(shí)間處無色譜峰出現(xiàn)，表明其他組分對(duì)羥基紅花黃色素A的測定無干擾。

羥基紅花黃色素A、陰性對(duì)照溶液、供試品溶液色譜圖見圖1。

2.4 線性關(guān)系試驗(yàn)：取羥基紅花黃色素A對(duì)照品（批號(hào)110715-200413）約8.4mg，精密稱定，置25mL量瓶中，加25%甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻（0.0336mg·mL-1)，精密吸取 1、2、3、4、5、6mL，分別置10mL量瓶中，加25%甲醇稀釋至刻度，搖勻，各取10μL進(jìn)樣，按上述色譜條件測定，以峰面積對(duì)對(duì)照品進(jìn)入的量進(jìn)行回歸分析，結(jié)果羥基紅花黃色素A在0.0336～0.2016μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。回歸方程為y=836940x+8785.9，r=0.9999。標(biāo)準(zhǔn)曲線數(shù)值見表 2。

2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)：取樣品含量測定項(xiàng)下制備的供試品溶液1份，分別于 0、2、4、6、8、12(h) 進(jìn)樣測定峰面積值，結(jié)果見表 3 。

2.6 精密度試驗(yàn)：取同一批號(hào)（20090802）供試品6份，各約0.8g，精密稱定，分別按樣品含量測定項(xiàng)下方法操作，測定每份供試品的含量，結(jié)果平均值為2.844mg·g-1，RSD%為0.16%。結(jié)果見表4。

表2 標(biāo)準(zhǔn)曲線測定結(jié)果

表3 不同時(shí)間測定樣品中羥基紅花黃色素A的峰面積積分值

從表中數(shù)據(jù)可以看出，羥基紅花黃色素A在12h內(nèi)的峰面積基本穩(wěn)定。

表4 精密度試驗(yàn)結(jié)果

2.7 加樣回收試驗(yàn)：取已知羥基紅花黃色素A含量（含量為2.844mg·g-1）供試品 6份，每份約 0.4g，精密稱定，分別置 6個(gè)具塞錐形瓶中，精密加入用25%甲醇配制的羥基紅花黃色素A對(duì)照品溶液（羥基紅花黃色素A濃度1.122mg·mL-1）1mL，再精密加入49mL25%甲醇制成供試品溶液，按樣品含量測定項(xiàng)下的方法操作，測定每份的含量，計(jì)算回收率，結(jié)果平均回收率為98.20%，RSD%為0.59%結(jié)果見表5。

2.8.樣品的含量測定：取本品3個(gè)批號(hào)共6份，各約0.8g，按供試品溶液的制備方法處理，分別精密吸取供試品溶液與對(duì)照溶液各10μL注入液相色譜儀，按外標(biāo)法計(jì)算含量。三批樣品的測定結(jié)果見表6。

3 討論

3.1 檢測波長的選擇：精密稱取羥基紅花黃色素A對(duì)照品適量，用25%的甲醇制成每1mL含15μg的溶液，于紫外－可見分光光度儀上，在190nm～600nm波長范圍掃描，結(jié)果羥基紅花黃色素A在波長403nm、223nm處有最大吸收。參照中國藥典2005版一部“紅花”含量測定項(xiàng)下羥基紅花黃色素A的測定方法，選擇403nm作為檢測波長。

表5 加樣回收試驗(yàn)結(jié)果

表6 樣品中羥基紅花黃色素A的含量測定結(jié)果

3.2 本實(shí)驗(yàn)精密度及回收率試驗(yàn)結(jié)果表明，該方法具有較好的準(zhǔn)確度和重現(xiàn)性，可作為該制劑的含量測定方法。

〔1〕國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典[M].北京；化學(xué)工業(yè)出版,社2005.