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松潘烏頭總堿的抗炎機(jī)制研究

2012-12-03 03:35李曉強(qiáng)焦海勝王建治蘭州大學(xué)第二醫(yī)院蘭州730030
中國藥房 2012年23期
關(guān)鍵詞:洗液抗炎低劑量

李 敏,李曉強(qiáng),焦海勝,王建治(蘭州大學(xué)第二醫(yī)院,蘭州 730030)

烏頭屬植物松潘烏頭(Aconitum sungpanense Hand.-Mazz.)分布在甘肅、四川、青海等廣大地區(qū),民間常用于治療跌打損傷、風(fēng)濕性和類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等疾病。其化學(xué)成分主要為多種生物堿,以二萜類生物堿為主[1]。藥理實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明,松潘烏頭總堿(TAS)有鎮(zhèn)痛、抗炎、解熱的作用[2,3]。筆者將主要研究TAS的抗炎機(jī)制,為其開發(fā)、利用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 儀器

751型分光光度計(jì)、UV/VIS-731型紫外分光光度計(jì)(上海分析儀器廠)。

1.2 試藥

TAS(蘭州大學(xué)藥學(xué)院藥物分析教研室提供,含量:1.14%);消炎痛(蘭州制藥廠,批號:20101106);角叉菜膠(Car,遼寧藥物研究所);丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)試劑盒均購自南京建成生物工程研究所。

1.3 動物

普通級昆明種小鼠,♀♂兼用,體重(22.0±2.0)g(動物生產(chǎn)合格證號:醫(yī)動字第14-005);普通級Wistar大鼠,♀♂兼用,體重(185.0±25.0)g(動物生產(chǎn)合格證號:醫(yī)動字第14-006),均由蘭州大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供。

2 方法

2.1 明膠致炎小鼠多形核白細(xì)胞游走實(shí)驗(yàn)[4]

♂小鼠40只隨機(jī)均分為4組,即對照(等容量生理鹽水,ig)、消炎痛(2.0 mg·kg-1,sc)和TAS高、低劑量(3.0、1.5 mg·kg-1,ig)組,每天給藥1次,連續(xù)3 d。于末次給藥1 h后ip 1%明膠0.8 mL,3 h后處死小鼠,取腹液1滴涂片,瑞氏染色,油鏡下計(jì)100個(gè)多形核白細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、組織細(xì)胞,從中計(jì)算出多形核白細(xì)胞的百分比。

2.2 小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性測試[5]

♀小鼠40只均分為4組,即對照(等容量生理鹽水,ig)、消炎痛(20 mg·kg-1,sc)和TAS高、低劑量(3.0、1.5 mg·kg-1,ig)組。給藥前禁食不禁水12 h。給藥30 min后,每鼠尾iv 0.5%伊文斯藍(lán)溶液5 mL·kg-1,5 min后ip 0.7%乙酸溶液10 mL·kg-1,30 min后處死小鼠,用蒸餾水反復(fù)沖洗腹腔內(nèi)伊文思藍(lán)溶液,將沖洗液稀釋至5 mL,加0.1 mol·L-1NaH 0.1 mL,于590 nm波長處測吸光度(A)值。

2.3 大鼠足跖炎癥組織PGE含量測定[6]

♂大鼠40只均分為4組,即對照(等容量生理鹽水,ig)、消炎痛(1.5 mg·kg-1,sc)和TAS高、低劑量(2.0、1.0 mg·kg-1,ig)組。給藥30 min后,每鼠左后足跖sc 1%Car 0.1 mL致炎,4 h后處死大鼠,將致炎足自踝關(guān)節(jié)上1 cm處剪下,稱重,浸泡于5 mL生理鹽水中45 min后,于50℃水浴異構(gòu)化20 min,加甲醇溶液5 mL,于278 nm波長處測定A值,計(jì)算前列腺素E(PGE)含量。

2.4 Car致炎大鼠氣囊灌洗液中MDA含量和血清SOD活性測定

分組與給藥同“2.3”項(xiàng)下方法。于Car致炎前給藥,每天1次,連續(xù)4 d;致炎后6 h再給藥1次。第4天給藥1 h后,于大鼠背部氣囊內(nèi)注射Car 25 mg·kg-1誘發(fā)炎癥,致炎后12 h處死大鼠,取血、離心、制備血清,待測SOD活性;氣囊內(nèi)注射4 mL Hank’s液進(jìn)行灌洗,收集灌洗液于試管內(nèi),于4℃離心,取上清液,待測MDA含量。SOD活性和MDA含量測定按試劑盒說明書進(jìn)行。

2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

3 結(jié)果

3.1 TAS對明膠致炎小鼠多形核白細(xì)胞游走的影響

對照、消炎痛和TAS高、低劑量組小鼠腹腔液中多形核白細(xì)胞百分比分別為(42.50±15.34)%、(21.87±16.92)%、(20.58±17.34)%、(23.16±12.09)%。與對照組比較,TAS高、低劑量組有顯著性差異(P<0.01),表明TAS能明顯抑制明膠誘發(fā)的多形核白細(xì)胞的游走,使其百分比降低。

3.2 TAS對小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性的影響

對照、消炎痛和TAS高、低劑量組A值分別為(0.250±0.045)、(0.139±0.033)、(0.125±0.026)、(0.138±0.031)。與對照組比較,TAS高、低劑量組有顯著性差異(P<0.01),表明TAS能使伊文思藍(lán)滲出量明顯減少,即降低了乙酸所致毛細(xì)血管通透性增加。

3.3 TAS對Car誘發(fā)的大鼠足跖炎癥組織PGE含量的影響

對照、消炎痛和TAS高、低劑量組大鼠足跖炎癥組織PGE的含量分別為(232.71±39.62)、(103.68±27.25)、(109.42±28.15)、(118.24±31.52)mg·g-1。與對照組比較,TAS高、低劑量組有顯著性差異(P<0.01),表明TAS能使大鼠炎癥組織中PGE的含量明顯減少。

3.4 TAS對Car致炎大鼠氣囊灌洗液中MDA含量和血清SOD活性的影響

與對照組比較,TAS高、低劑量組MDA含量顯著減少,SOD活性顯著增強(qiáng)(P<0.01或P<0.05)。TAS對模型大鼠氣囊灌洗液中MDA含量與血清SOD活性的影響見表1。

4 討論

先前的藥理實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,TAS對二甲苯致小鼠耳腫,蛋清、Car、甲醛性大鼠足腫與大鼠瓊脂性肉芽增生均有明顯抑制作用,說明TAS具有顯著的抗急、慢性炎癥作用[3]。從本研究結(jié)果觀察到,TAS能降低乙酸致小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性增加;使明膠誘發(fā)的小鼠腹腔炎性滲出液中多形核白細(xì)胞百分比降低;使大鼠足跖炎癥組織PGE的含量明顯減少。提示TAS的抗炎作用機(jī)制可能與其降低毛細(xì)血管通透性、減少滲出,抑制白細(xì)胞游走,降低其向炎癥部位的聚集(趨化),以及抑制炎癥介質(zhì)PGE的釋放有關(guān)。

表1 TAS對模型大鼠氣囊灌洗液中MDA含量與血清SOD活性的影響(±s,n=10)Tab 1 Effects of TAS on MDA content and SOD activity in air sac irrigating solution of model rats(±s,n=10)

表1 TAS對模型大鼠氣囊灌洗液中MDA含量與血清SOD活性的影響(±s,n=10)Tab 1 Effects of TAS on MDA content and SOD activity in air sac irrigating solution of model rats(±s,n=10)

與對照組比較:*P<0.05,**P<0.01vs.control group:*P<0.05,**P<0.01

組別對照組消炎痛組TAS高劑量組TAS低劑量組劑量/mg·kg-1-1.52.01.0 MDA/nmol·mL-111.28±1.137.81±0.97**7.52±0.88**8.11±0.97**SOD/U·mL-198.26±27.02128.06±21.92**130.32±26.21**123.82±24.15*

氧自由基在疾病中所起的作用日益被人們所重視。據(jù)報(bào)道,類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者病灶中氧自由基明顯增多,可能是其病理機(jī)制之一;大鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎局部炎癥與脂質(zhì)過氧化程度密切相關(guān)[7]。本研究結(jié)果表明,Car致炎大鼠氣囊灌洗液中MDA水平明顯增高、血清SOD活力明顯降低,與上述報(bào)道相一致。而TAS使大鼠炎性灌洗液中MDA含量降低、血清SOD活性升高,提示抑制脂質(zhì)過氧化反應(yīng)、減少氧自由基的生成,可能是TAS抗炎作用的又一重要機(jī)制。

[1]李洪剛,李廣義.松潘烏頭二萜生物堿的研究[J].藥學(xué)學(xué)報(bào),1988,3(23):460.

[2]黨月蘭,胡兆勇,吳福祥.松潘烏頭總堿的鎮(zhèn)痛作用和身體依賴性的實(shí)驗(yàn)研究[J].中國藥物依賴性通報(bào),1993,3(2):242.

[3]楊軍英,黨月蘭.松潘烏頭總堿的抗炎解熱作用[J].中國臨床藥理學(xué)與治療學(xué),2003,8(4):441.

[4]黨月蘭,駱 勤,李淑玉.紅毛五加總甙的抗炎作用[J].中藥藥理與臨床,2000,16(1):14.

[5]馬建秀,高明堂,馬迎春.棉丹通肺化淤膠囊鎮(zhèn)痛抗炎的實(shí)驗(yàn)研究[J].中藥藥理與臨床,2005,21(3):49.

[6]李儀奎.中藥藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)[M].第1版.上海:上海科學(xué)技術(shù)出版社,1991:307.

[7]丁長海,陳敏珠,魏 偉,等.抗氧自由基藥物研究進(jìn)展[J].中國藥理學(xué)通報(bào),1992,8(5):332.

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