方 凱胡鳴韻黃 俊李 萍

（1.巨化集團公司制藥廠；2.巨化集團技術中心：浙江 衢州 324004）

頂空毛細管氣相色譜法測定二氟尼柳原料藥中的殘留溶劑

方 凱1胡鳴韻1黃 俊1李 萍2

（1.巨化集團公司制藥廠；2.巨化集團技術中心：浙江 衢州 324004）

采用 Agilent DB-624 毛細管色譜柱（25 m×0.53 mm×3.0 μm），F(xiàn)ID 檢測器，N,N-二甲基甲酰胺為溶劑，進行了頂空毛細管氣相色譜法同時測定二氟尼柳原料藥中二氯甲烷、苯及甲苯等3種殘留溶劑的分析方法試驗。結果表明，3種殘留溶劑在各自的含量范圍內呈良好的線性關系（相關系數(shù) 0.994 5～0.997 5），檢測限分別為 0.012 8、0.044 8、0.189 mg/L，平均添加回收率為90.6%～97.9%。所建方法簡單、靈敏、可靠，適用于二氟尼柳原料藥中殘留溶劑的分析檢測。

氣相色譜法；頂空采樣；殘留溶劑；二氟尼柳

二氟尼柳，白色結晶，難溶于水，為水楊酸衍生物，具有解熱、鎮(zhèn)痛、抗炎作用，主要用于輕、中度疼痛的鎮(zhèn)痛，如關節(jié)炎、腕、踝關節(jié)的扭傷、小手術、腫瘤等疼痛。與阿司匹林相比，二氟尼柳鎮(zhèn)痛消炎作用強且維持時間長，抗炎鎮(zhèn)痛作用為其10倍，解熱作用為1.5倍，胃腸道刺激反應少見，過量不會造成酸堿不平衡[1]。

該原料藥在制備過程中使用了二氯甲烷、苯及甲苯等有機溶劑，這些溶劑會對人體健康和環(huán)境造成危害，依據(jù)人用藥品注冊技術規(guī)范國際協(xié)調會（ICH）提出的殘留溶劑指導原則，這些溶劑均被列為藥品必須限制的第1、2類有機溶劑[2]。為保證藥品質量和用藥安全，控制其殘留量對保證藥品質量和用藥安全有重要意義，在ICH指導原則中分別規(guī)定苯、甲苯及二氯甲烷的溶劑殘留限量質量濃度分別為 2、890、600 mg/kg。

關于二氟尼柳殘留溶劑測定的研究鮮見文獻報道。作者根據(jù)ICH的指導原則和《中華人民共和國藥典》2010年版的相關規(guī)定，采用頂空進樣毛細管氣相色譜法對二氟尼柳原料藥中有機溶劑殘留量的檢測進行了研究，以期用于實際生產中的質量控制[3]。

1 試驗部分

1.1 儀器與材料

Aglient 6890N氣相色譜儀 （含F(xiàn)ID檢測器），METTLER GB204電子天平，DK-3001F頂空進樣器。

二氟尼柳， 工業(yè)品 （批號 100817、100818、100819、101007）；二氯甲烷，苯，甲苯，色譜試劑；N,N-二甲基甲酰胺（DMF），高效液相（HPLC）色譜試劑；實驗用水為超純水。

1.2 色譜條件

色譜柱：Agilent DB-624石英毛細管色譜柱（25 m×0.53 mm×3.0 μm），柱溫 85 ℃；檢測器：FID，溫度230℃；進樣器溫度200℃，進樣量：1 mL；分流進樣，體積比1:1；載氣：高純氮（質量分數(shù)99.99%）、空氣、H2的體積流量分別為 6.0、450、45 mL/min；尾吹體積流量40 mL/min。頂空進樣器：樣品、管路、閥箱溫度分別為 90、105、105 ℃；保溫時間 45 min，進樣壓力0.06 MPa。

1.3 溶液的制備

1)對照儲備液。分別準確稱取苯10 mg、甲苯222.5 mg、二氯甲烷150 mg，用DMF溶解定容，配制成質量濃度分別為0.05、22.25、15.0 g/L的對照儲備液。

2)混合對照儲備溶液。準確移取對照儲備液各10.0 mL置于100 mL容量瓶中，用DMF溶解并稀釋至刻度，配制成質量濃度分別為0.005 0、2.225、1.500 g/L的苯、甲苯及二氯甲烷混合對照儲備溶液。

3)系列標準溶液。分別準確移取混合對照儲備液 2.50、4.00、5.00、6.00、7.50 mL， 置于 50 mL 量瓶中，用DMF稀釋至刻度，搖勻。準確移取上述溶液2 mL置于20 mL頂空樣品瓶中，加入3 mL濃度1 mol/L的硫酸鉀溶液，加蓋密封，作為系列標準溶液（記為 C1～C5溶液）。

4)樣品溶液。分別準確稱取二氟尼柳樣品約500 mg（精確至 0.1 mg，下同），置于 20 mL 頂空樣品瓶中，定量加入DMF 2.0 mL溶解，加入3 mL濃度1 mol/L的硫酸鉀溶液，加蓋密封，作為樣品溶液。

2 結果與討論

2.1 系統(tǒng)適用性試驗

取標準溶液C3、樣品溶液及溶劑空白分別按1.2節(jié)的方法進行分析，色譜圖見圖1。

圖1表明，3種殘留溶劑分離良好，均達到基線分離，分離度均大于1.5，理論板數(shù)均不低于5 000，峰形、分離度均符合要求。

2.2 溶劑的選擇

對FID檢測器，水為最理想的溶劑。但由于二氟尼柳難溶于水，測定的殘留溶劑在水中溶解度也不好，而在DMF中樣品和殘留溶劑的溶解度都較好，對待測組分無干擾，因此選用DMF作為溶解樣品的溶劑。

2.3 頂空條件的選擇

2.3.1 溫度

頂空溫度應根據(jù)溶劑的特性及供試品中殘留溶劑的沸點選擇，升溫有利于揮發(fā)性物質的揮發(fā)，提高檢測靈敏度。通常以水為溶劑及測定低沸點殘留溶劑時，頂空溫度不宜超過85℃，測定沸點較高的殘留溶劑時，選擇較高的頂空溫度，但應兼顧供試品的熱分解特性，盡量避免供試品產生的揮發(fā)性熱分解產物干擾測定結果。試驗考察了不同的頂空溫度對樣品測定的影響，結果如表1所示。

表1 平衡溫度和峰面積的關系Tab 1 The relationship of the equilibrium temperature and the peak areas

由表1可看出，3種溶劑的峰面積隨著溫度的升高而增加，85℃后峰面積增加趨勢減緩，考慮樣品的穩(wěn)定性及檢測靈敏度，選擇90℃作為頂空溫度。

2.3.2 平衡時間

頂空平衡時間是要確保供試品溶液的氣-液兩相達到平衡，氣-液兩相平衡時間本質上取決于被測組分分子從樣品基質到氣相的擴散速度。頂空平衡時間不宜過長，過長可能引起頂空瓶的氣密性變差或供試品分解等，導致定量的準確性降低。試驗考察了不同的頂空平衡時間對樣品測定的影響，結果見表2。

表2 平衡時間和峰面積的關系Tab 2 The relationship of the equilibrium times and the peak areas

由表2可看出，3種溶劑的峰面積隨著平衡時間增加而增加，30 min后峰面積增加趨勢減緩，比較不同溫度下的精密度，45 min平衡時間的精密度最好（RSD較?。虼诉x擇45 min作為頂空平衡時間。

2.3.3 硫酸鉀用量

“鹽析效應”，即溶解的鹽離子對溶解于水溶液中物質的活度有影響。利用此效應添加鹽析劑可以增加活度系數(shù)，降低物質的溶解度，提高液面上被測揮發(fā)痕量組分的含量?？疾觳煌}析劑用量對測定的影響，結果表明，當不加入鹽析劑時，痕量苯難以檢測到，檢測靈敏度隨加入量增加而提高，當加入量大于3 mL時，樣品溶解性開始變差，因此選擇鹽析劑1 mol/L硫酸鉀溶液的加入量為3 mL。

2.4 線性關系、檢出限及定量限

將配制好的5個系列含量的混合對照溶液（C1～C5）分別按1.2節(jié)給出的色譜條件進樣，以各溶劑平均峰面積A對其各自的質量濃度ρ作標準曲線，得到3種溶劑的線性方程及其相關系數(shù)。將對照溶液C1依次進行稀釋，并在給出的色譜條件下進行測定，以信噪比（S/N）為3時計算最低檢出限（LOD），以S/N為10時計算定量限（LOQ），結果見表3。

表3 3種溶劑的線性關系、檢出限（S/N=3）和定量限（S/N=10）Tab 3 Linear regression results ond the limits of detection(LOD)(S/N=3)and quantification(LOQ)(S/N=10)of the 3 solvents

表3結果表明，3種溶劑的含量與峰面積的線性關系良好，相關系數(shù)均在0.99以上。

2.5 精密度試驗

精密量取標準溶液C32 mL，共6份，密封，搖勻。按1.2節(jié)色譜條件進行分析，計算苯、甲苯、二氯甲烷的峰面積的RSD，結果見表4。

表4 方法精密度Tab 4 The precision of the method

由表4可見，苯、甲苯、二氯甲烷的峰面積的RSD分別為3.4%、3.5%、3.0%，表明方法精密度良好。

2.6 回收率

取已知各溶劑含量的樣品（批號100817）0.5 g，精密稱定，置20 mL頂空進樣瓶中，共9份，分別定量加入2.0 mL標準溶液C1、C3、C5，各3份，加入3 mL濃度1 mol/L的硫酸鉀溶液，加蓋密封。按1.2節(jié)色譜條件進行分析，按外標法計算，苯、甲苯、二氯甲烷的平均回收率分別為90.6%、97.9%、93.2%，RSD分別為2.4%、7.5%、1.1%。

2.7 實際樣品檢測

采用實驗所建立的方法對4個批次的供試樣品進行了檢測，每個樣品各分析6次，平均結果如表5所示。

表5 二氟尼柳原料藥殘留溶劑的分析結果Tab 5 Analytical results of residual solvents in raw material drug of Diflunisal

3 結論

研究結果表明，實驗所建立的殘留溶劑檢測方法對3種有機溶劑的分離性良好，操作簡便，苯、甲苯、二氯甲烷的含量與峰面積的線性關系良好，相關系數(shù)均在0.99以上，檢測限分別為 0.012 8、0.044 8、0.189 mg/L，平均回收率分別為90.6%、97.9%、93.2%，RSD分別為2.4%、7.5%、1.1%。方法精密度、檢測限、回收率等均符合要求，適用于二氟尼柳原料藥中殘留有機溶劑的檢測，同時也可為從事多組分殘留溶劑檢測的分析工作者提供參考。

[1]竺心影.藥理學[M].3版.北京:人民衛(wèi)生出版社,1995:124.

[2]周海鈞.藥品注冊的國際技術要求質量部分[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2001:343.

[3]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典:二部[M].北京:化學工業(yè)出版社,2010:附錄61-65.

Head-Space Sampling Capillary GC for Determing Residual Solvents in Raw Material Drug of Diflunisal

Fang Kai1,Hu Mingyun1,Huang Jun1,Li Ping2
(1.Juhua Group Corporation Pharmaceutical Factory;2.Juhua Group Technology Center:Quzhou,Zhejiang 324000)

A capillary GC method with head-space sampling was established for determing residual solvents such as dichloromethane,benzene and methylbenzene in raw material drug of Diflunisal.Agilent DB-624 capillary column(25 m×0.53 mm×3.0 μm)was used,FID as detector and DMF as the solvent．The result showed that linear responses were obtained for the 3 residual solvents in their respective concentration ranges(R=0.994 5～0.997 5,n=5).The average recoveries of three concentration levels were 90.6%～97.9%．The developed method simple,sensitive and accurate for the residual solvent analysis in raw material drug of Diflunisal．

gas chromatography(GC);head-space sampling;residual solvents;Diflunisal

TQ657.7+1

ADOI10.3969/j.issn.1006-6829.2012.02.003

2012-01-24；

2012-02-25