陳雪娟，倪志宏

(甘肅中醫(yī)學(xué)院，甘肅 蘭州 730000)

更年期綜合征是婦女在絕經(jīng)前后由于雌激素水平波動(dòng)或下降所致的以植物神經(jīng)系統(tǒng)功能紊亂為主，伴有神經(jīng)心理癥狀的一組癥候群［1］。目前主要采用激素治療，但禁忌癥、副作用較多，長(zhǎng)期替代治療可引起子宮內(nèi)膜增殖，大大增加了癌變的危險(xiǎn)性。中醫(yī)學(xué)治療該病有較好療效。本研究小組在傳統(tǒng)驗(yàn)方的基礎(chǔ)上，結(jié)合我院多年臨床經(jīng)驗(yàn)研發(fā)了玫瑰保春膠囊。該藥主要由當(dāng)歸、紅芪、百合、紅玫瑰、地龍、公丁香等按一定的工藝制成。本研究以去勢(shì)更年期大鼠為模型，通過(guò)觀察玫瑰保春膠囊對(duì)大鼠血清中GSH-Px活力、T-AOC含量及子宮指數(shù)的影響，以期探討玫瑰保春膠囊對(duì)更年期大鼠體內(nèi)抗氧化作用的影響，及其對(duì)內(nèi)分泌、卵巢功能和下丘腦—垂體—性腺軸的調(diào)節(jié)作用。

1 材料與方法

1．1 動(dòng)物

健康Wistar雌性大鼠30只，11～12月齡，體質(zhì)量180～200 g，由甘肅中醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，質(zhì)量合格證號(hào)：scxk(甘)2011-0001。

1．2 藥品、試劑與儀器

玫瑰保春膠囊濃度為0．5g生藥/mL;大豆異黃酮，南寧富萊欣生物科技有限公司產(chǎn)品，批號(hào)DL03118。水合氯醛，青島宇龍海藻有限公司產(chǎn)品，批號(hào)2010052501;T-AOC(批號(hào)20111027)和 GSHPx(批號(hào)20111107)檢測(cè)試劑盒，南京建成生物工程研究所提供。CT14RD臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)，上海天美生化儀器設(shè)備工程有限公司產(chǎn)品;可見(jiàn)分光光度計(jì)(VIS-723N)，北京瑞利分析儀器公司產(chǎn)品;數(shù)顯恒溫水浴鍋，鄭州杜甫儀器廠產(chǎn)品。

1．3 模型的建立

采用切除雙側(cè)卵巢法建立更年期大鼠模型。用100 g/L水合氯醛按0．3 mg/g腹腔注射麻醉大鼠;將大鼠放在解剖板上，腹部向上，剪去腹部毛，用碘伏消毒后，依次剪開(kāi)腹部皮膚和肌肉;用眼科鑷沿子宮角找到卵巢，結(jié)扎子宮角后，摘除卵巢(假手術(shù)組只切除少量脂肪組織);依次縫合肌肉和皮膚，縫合結(jié)束后用碘伏消毒、750 g/L酒精脫碘;用16萬(wàn)單位/mL青霉素鈉清洗刀口，連續(xù)5 d。第6天開(kāi)始做陰道細(xì)胞涂片：將無(wú)菌棉簽用生理鹽水浸濕后，伸入大鼠陰道，順時(shí)針?lè)较蛐D(zhuǎn)1周;將棉簽上的分泌物涂在干凈的載玻片上，晾干，滴加美藍(lán)染液;染色15 min后，洗片，晾干后二甲苯樹(shù)脂封片;光學(xué)顯微鏡下觀察，隨機(jī)選擇5個(gè)視野，計(jì)算陰道脫落細(xì)胞角化細(xì)胞指數(shù)(CI)。以CI＜50%作為造模成功的標(biāo)準(zhǔn)。

1．4 動(dòng)物分組與藥物干預(yù)

將30只大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組、去勢(shì)空白組(去勢(shì)組)、去勢(shì)+大豆異黃酮組(大豆異黃酮組)、去勢(shì)+玫瑰保春膠囊小劑量組(玫瑰保春膠囊小劑量組)和去勢(shì)+玫瑰保春膠囊大劑量組(玫瑰保春膠囊大劑量組)5組，每組6只。假手術(shù)組和去勢(shì)組給予生理鹽水0．01 mL/g體質(zhì)量，大豆異黃酮組給予大豆異黃酮0．4 mg/g體質(zhì)量，玫瑰保春膠囊小、大劑量組依次給予2．5，7．5 mg生藥/g體質(zhì)量。每天灌胃1次，連續(xù)15 d。

1．5 檢測(cè)指標(biāo)

大鼠干預(yù)結(jié)束后，腹主動(dòng)脈取血，2 500 r/min、離心10 min取血清，-20℃保存?zhèn)溆?采用分光光度法、嚴(yán)格按試劑盒說(shuō)明書(shū)測(cè)定血清中T-AOC和GSH-Px水平。稱取子宮濕質(zhì)量并計(jì)算子宮指數(shù)，計(jì)算公式為：子宮指數(shù)=子宮濕質(zhì)量(g)/體質(zhì)量(g)×100%。

1．6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2．1 玫瑰保春膠囊對(duì)更年期大鼠子宮指數(shù)的影響

與假手術(shù)組對(duì)比，其余各組子宮指數(shù)明顯下降，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0．05)。與去勢(shì)組對(duì)比，各藥物干預(yù)組子宮指數(shù)增加，其中玫瑰保春膠囊大劑量組較之差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0．05)。與大豆異黃酮組對(duì)比，玫瑰保春膠囊大劑量組子宮指數(shù)增加，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0．01)。見(jiàn)表1。

表1 各組大鼠子宮指數(shù)對(duì)比 ±s

表1 各組大鼠子宮指數(shù)對(duì)比 ±s

注：與假手術(shù)組對(duì)比，* P ＜0．05;與去勢(shì)組對(duì)比，#P ＜0．05;與大豆異黃酮組對(duì)比，△△ P＜0．01。

組 別 動(dòng)物數(shù) 子宮指數(shù)假手術(shù)組5 0．226 ±0．069去勢(shì)組 6 0．043 ±0．008*大豆異黃酮組 6 0．046 ±0．003*玫瑰保春膠囊小劑量組 5 0．051 ±0．005*玫瑰保春膠囊大劑量組 6 0．059 ±0．005*#△△

2．2 玫瑰保春膠囊對(duì)更年期大鼠血清 T-AOC、GSH-Px的影響

與假手術(shù)組對(duì)比，其余各組血清T-AOC含量降低，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0．01);與去勢(shì)組對(duì)比，各藥物干預(yù)組血清T-AOC含量增加，其中玫瑰保春膠囊大劑量組較之差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0．01);與大豆異黃酮組對(duì)比，玫瑰保春膠囊大劑量組TAOC含量高，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0．01)。

與假手術(shù)組對(duì)比，其余各組血清GSH-Px活力下降，其中去勢(shì)組、大豆異黃酮組和玫瑰保春膠囊小劑量組差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0．05或P＜0．01);與去勢(shì)組對(duì)比，各藥物干預(yù)組血清中GSH-Px活力增加，但差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;與大豆異黃酮組對(duì)比，玫瑰保春膠囊大劑量組GSH-Px高，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＜0．01)。見(jiàn)表2。

表2 各組大鼠血清T-AOC及SH-Px對(duì)比U·mL-1，±s

表2 各組大鼠血清T-AOC及SH-Px對(duì)比U·mL-1，±s

注：與假手術(shù)組對(duì)比，*P ＜0．05，＊＊ P ＜0．01;與去勢(shì)組對(duì)比，##P ＜0．01;與大豆異黃酮組對(duì)比，△△ P＜0．01。

組 別 動(dòng)物數(shù)T-AOC GSH-Px假手術(shù)組5 10．422 ±0．830 1 607．619 ±50．238去勢(shì)組 6 6．907±0．685＊＊ 1 280．714±163．86*大豆異黃酮組 6 7．297±0．766＊＊ 1 380．952±26．255＊＊玫瑰保春膠囊小劑量組 5 7．104±0．650＊＊ 1 374．286±31．515＊＊玫瑰保春膠囊大劑量組 6 8．757±0．614＊＊##△△ 1 553．175±22．420△△

3 討論

玫瑰保春膠囊主要由當(dāng)歸、紅芪、百合等組方而成。方中當(dāng)歸，主要成分為多種有機(jī)酸、脂類、糖和多種氨基酸［2］，具有補(bǔ)血活血、調(diào)經(jīng)止痛、養(yǎng)血滋補(bǔ)和抗氧化等功能［3-5］;紅芪主要活性成分為紅芪多糖，具有增強(qiáng)機(jī)體免疫力、抗衰老、抗氧化和清除自由基等作用［6-8］;百合主要活性成分為百合多糖，可增強(qiáng)機(jī)體免疫調(diào)節(jié)作用、抗腫瘤和抗氧化活性等［9-11］。

更年期的最早變化是卵巢功能衰退，然后才表現(xiàn)為下丘腦和垂體功能退化。內(nèi)分泌和臨床方面的變化均源于卵巢的衰老。體內(nèi)自由基的含量與組織器官衰老有密切關(guān)系，體內(nèi)氧自由基含量增多，組織抗氧化酶活性下降，導(dǎo)致卵巢組織衰老，雌激素分泌下降是一個(gè)重要因素［12-13］。自由基與體內(nèi)物質(zhì)(如核酸、蛋白質(zhì)和脂質(zhì)等)發(fā)生反應(yīng)，生成氧化物或過(guò)氧化物，對(duì)機(jī)體造成損害，導(dǎo)致生物體衰老死亡。T-AOC從總體上反映機(jī)體防御系統(tǒng)抗氧化能力的水平;GSH-Px可阻斷線粒體在呼吸鏈電子傳遞過(guò)程中產(chǎn)生各種自由基的鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，使細(xì)胞免受過(guò)氧化物的損傷［14-15］。

本研究結(jié)果顯示，去勢(shì)更年期大鼠子宮指數(shù)、血清中GSH-Px活力和T-AOC含量明顯減少，機(jī)體抗氧化能力顯著降低，其機(jī)制有待于進(jìn)一步探討;去勢(shì)組給予大豆異黃酮和玫瑰保春膠囊后，血清中GSHPx活力和T-AOC含量得到一定程度提高，且玫瑰保春膠囊大劑量組效果較為顯著。綜上可知，玫瑰保春膠囊具有較強(qiáng)的抗氧化和清除自由基作用，可增強(qiáng)更年期大鼠抗氧化能力，從而在一定程度上延緩和改善了卵巢功能衰退。

［1］衛(wèi)生部繼續(xù)教育委員會(huì)．女性生殖內(nèi)分泌性激素補(bǔ)充療法［M］．北京：中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué)出版社，1999．

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