牛曉靜，張文鑫，劉曉龍，聶淑慧

(河南中醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院藥學(xué)部，河南鄭州 450000)

人參為五加科植物人參 Panax ginseng C．A．Mey．的干燥根及根莖，是名貴的滋補(bǔ)強(qiáng)壯藥，主產(chǎn)地在吉林、遼寧、黑龍江等省。人參在中藥配伍中常作為君藥使用，具有大補(bǔ)元?dú)狻⒐堂撋颉采裰π?，能夠治療勞傷虛損、食少、倦怠、反胃吐食、大便滑泄、虛咳喘促、自汗暴脫、驚悸、健忘、眩暈頭痛等一切氣血津液不足之證。人參可調(diào)節(jié)中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能，促進(jìn)大腦對能量物質(zhì)的利用，增強(qiáng)機(jī)體的免疫功能，還有改善心臟功能、降低血糖、抗腫瘤等作用。現(xiàn)代藥學(xué)研究［1］表明，人參中所含的皂苷為其主要活性成分，是評價(jià)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的重要指標(biāo)之一。近幾年來，隨著人參需求量的增大，人參的種植實(shí)現(xiàn)了工業(yè)化，雖然此舉使人參在數(shù)量上滿足了人們的需求，但由于產(chǎn)地、栽培技術(shù)及炮制方法等的不同，人參有效成分的含量出現(xiàn)了比較大的差異，治療效果也差強(qiáng)人意。中藥材質(zhì)量優(yōu)劣對臨床藥效是否能正常發(fā)揮至關(guān)重要，因此，本文采用高效液相色譜法測定市售10批人參藥材中人參皂苷的含量，分析其質(zhì)量的優(yōu)劣。

1 藥品、試劑與儀器

人參藥材均購自安徽亳州藥材市場;人參皂苷對照品Rg1(批號110703-201027)、人參皂苷Re對照品(批號110754-200822)、人參皂苷Rb1對照品(批號110704-200921)，均由中國生物制品藥品鑒定所提供。乙腈，為色譜純，由北京迪馬科技有限公司，批號70115;氯仿、正丁醇、氨水、甲醇等試劑均為分析純;水為娃哈哈純凈水。Waters 2695 HPLC，美國Waters公司產(chǎn)品;2998 PDA檢測器Waters，美國Waters公司產(chǎn)品;Empower色譜工作站，產(chǎn)地美國;Agilent ZORBAX Eclispe XDB-C18色譜柱(4．6 mm ×150 mm，5 μm)及AEL-200型分析天平，日本島津公司產(chǎn)品;CF225D型賽多利斯天平，德國賽多利斯集團(tuán)產(chǎn)品;Hk250型科導(dǎo)臺(tái)式超聲波清洗器，功率250 W，頻率50 Hz，上海科導(dǎo)超聲儀器有限公司產(chǎn)品。

2 方法與結(jié)果

2．1 性狀鑒別

《中國藥典》［2］中規(guī)定人參的性狀為：枝大、皮細(xì)、色澤嫩黃或棕色;枝紋細(xì)密，枝體飽滿，無破損，新鮮人參以枝大、漿足、無疤痕、無破損者為上品。人參的等級劃分以顏色、色澤、長短、肉質(zhì)、破傷與否而定。一般說，參體大、側(cè)根多、根條細(xì)、須根完整的質(zhì)量好;在等級、枝數(shù)相同情況下，體重者為上。10批人參的性狀見表1。

表1 人參性狀統(tǒng)計(jì)表

2．2 色譜條件

以乙腈為流動(dòng)相A，以水為流動(dòng)相B，按照表2進(jìn)行梯度洗脫，柱溫30℃，體積流量1．0 mL/min，檢測波長203 nm，色譜柱為Agilent-ZORBAX Eclispe XDB-C18(4．6 mm ×150 mm，5μm)。

表2 液相色譜的條件

2．3 溶液的制備

2．3．1 對照品溶液的制備

精密稱取人參皂苷Rg1對照品、人參皂苷Re對照品及人參皂苷Rb1對照品，加甲醇制成含人參皂苷 Rg1 0．191 04 g/L，人參皂苷 Re 0．198 5 g/L，人參皂苷Rb1 0．195 6 g/L的混合溶液。

2．3．2 供試品溶液的制備

將藥材粉碎，取粉末(過4號篩)約1 g，精密稱定，置索氏提取器中，加三氯甲烷加熱回流3 h，棄去三氯甲烷液，將藥渣揮干，連同濾紙筒移入100 mL錐形瓶中精密加入水飽和的正丁醇50 mL，密塞，放置過夜，超聲處理(功率250 W，頻率50 Hz)30 min，濾過，棄去初濾液，精密量取續(xù)濾液25 mL，置蒸發(fā)皿中蒸干。殘?jiān)蛹状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至5 mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。

2．4 含量測定

按照上述色譜條件，進(jìn)樣前用微孔濾膜(0．45 μm)濾過，供試品、對照品溶液進(jìn)樣量均為10 μL，并記錄不同批次人參色譜圖及其峰面積(見圖1)。2010版《中國藥典》規(guī)定：人參按干燥品計(jì)算，含人參皂苷 Rg1(C42H72O14)和人參皂苷 Re(C48H82O18)的總量不得少于0．30%，人參皂苷Rb1(C54H92O23)不得少于0．20%。10批人參藥材含量測定結(jié)果見表3。由表3計(jì)算可得，10批人參藥材的人參皂苷Rg1的平均含量為0．23%、Re的平均含量為0．15%和Rb1的平均含量為0．18%，均低于藥典標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的含量，其中藥材不合格率為40%。

表3 10批人參藥材含量測定結(jié)果

圖1 人參皂苷混合對照品及供試品溶液色譜圖

3 討論

3．1 色譜條件的摸索

2010版《中國藥典》規(guī)定［2］，梯度洗脫時(shí)間為0～35 min時(shí)，流動(dòng)相 A%為19，流動(dòng)相 B%為81，但筆者在試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)人參皂苷Rg1的色譜峰與人參皂苷Re的重疊，不能完全分開，而且該方法梯度洗脫時(shí)間較長，需100 min，耗時(shí)、耗力。查閱文獻(xiàn)［3-4］，有以乙腈—5 g/L磷酸作為流動(dòng)相的。筆者經(jīng)過多次試驗(yàn)，采用本實(shí)驗(yàn)中的洗脫方法(梯度洗脫時(shí)間為0～35 min時(shí)，流動(dòng)相A%為18．5，流動(dòng)相B%為81．5)后，色譜峰人參皂苷Rg1的色譜峰與人參皂苷Re的色譜峰能較好分離，人參皂苷Rb1在43 min左右即可達(dá)到良好分離，峰形尖銳，洗脫時(shí)間大大縮短，重復(fù)性良好。

3．2 人參的質(zhì)量與性狀

在實(shí)驗(yàn)過程中發(fā)現(xiàn)，有些外觀品質(zhì)較好的人參(如批號為101106和110210)，人參皂苷含量也較高，但僅憑性狀特征無法確定質(zhì)量的優(yōu)劣，只能通過含量測定來確定其有效成分的含量。

3．3 人參藥材的質(zhì)量分析

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，目前市售人參的質(zhì)量不容樂觀。筆者認(rèn)為造成產(chǎn)品不合格的原因主要有2方面：一是人參生長年限不夠。一般來說，園參需要生長5 a以上才能進(jìn)行收獲，生長期只有3～4 a、通過化肥催生的人參所含總皂苷含量一般難以達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)要求。本實(shí)驗(yàn)中批次為100927的人參在粉碎時(shí)被發(fā)現(xiàn)質(zhì)地非常疏松，有許多空洞，這可能與參的生長年限不夠有關(guān)。二是人參的加工過程中，若存在質(zhì)量管理落后或加工工藝不科學(xué)(如硫磺熏、溫度過高、霉變等)，便會(huì)導(dǎo)致人參總皂苷的破壞與流失，而人參總皂苷含量過低的產(chǎn)品已基本上不具備人參特有的臨床應(yīng)用價(jià)值。因此，要提高人參藥材的質(zhì)量，需要從選育種植、科學(xué)施肥、蟲害防治到采收加工等方面進(jìn)一步加強(qiáng)對市場中藥材的質(zhì)量監(jiān)督管理，以此推動(dòng)中藥材的品種標(biāo)準(zhǔn)化、產(chǎn)地基地化、采收加工規(guī)范化、產(chǎn)品無公害化等目標(biāo)實(shí)現(xiàn)，以進(jìn)一步提高中藥材質(zhì)量。

［1］吳立軍．天然藥物化學(xué)［M］．5版．北京：人民衛(wèi)生出版社，2007：266-270．

［2］國家藥典委員會(huì)．中華人民共和國藥典：一部［M］．北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010．

［3］胡曉斌，李穎，吳蘇澄，等．生脈膠囊中人參皂苷Rg1、Re的HPLC測定［J］．中藥新藥與臨床藥理，2003，14(1)：49-51．

［4］林世和，余南才，易艷東，等．HPLC法測定人參蘆中人參皂苷 Rb1、Rg1、Re的含量［J］．中國藥師，2010，13(4)：531-533．