周群芳 冷金花

1.民航總醫(yī)院婦產(chǎn)科 (北京，100063);2.北京協(xié)和醫(yī)院婦產(chǎn)科

·臨床研究·

子宮內(nèi)膜異位癥患者血清骨橋蛋白抗體及轉(zhuǎn)鐵蛋白抗體水平分析

周群芳1冷金花2

1.民航總醫(yī)院婦產(chǎn)科 (北京，100063);2.北京協(xié)和醫(yī)院婦產(chǎn)科

目的:探討血清中骨橋蛋白抗體和轉(zhuǎn)鐵蛋白抗體與子宮內(nèi)膜異位癥的關(guān)系。方法:用酶聯(lián)免疫吸附試驗方法檢測108例子宮內(nèi)膜異位癥患者及88例健康婦女血清中骨橋蛋白抗體及轉(zhuǎn)鐵蛋白抗體水平。結(jié)果:子宮內(nèi)膜異位癥患者血清中骨橋蛋白抗體OD值為0.84±0.25，對照組為0.63±0.20;轉(zhuǎn)鐵蛋白抗體OD值為1.06±0.31，對照組為0.75±0.27，子宮內(nèi)膜異位癥組均明顯高于對照組(均P＜0.05)。子宮內(nèi)膜異位癥I、II期患者血清骨橋蛋白抗體OD值(1.04 ±0.30)明顯高于 III、IV期患者(0.68 ±0.20)及對照組婦女(0.63 ±0.20)(均P＜0.05)。子宮內(nèi)膜異位癥組轉(zhuǎn)鐵蛋白抗體陽性率為25.0%(27/108)，骨橋蛋白抗體陽性率為20.3%(22/108)，兩者均陽性占13.9%(15/108)，與對照組相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。相關(guān)分析發(fā)現(xiàn)子宮內(nèi)膜異位癥患者血清中轉(zhuǎn)鐵蛋白抗體水平與骨橋蛋白抗體水平呈正相關(guān)(r=0.875，P＜0.05)。結(jié)論:抗骨橋蛋白抗體可能與子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)展有關(guān)。

子宮內(nèi)膜異位癥 骨橋蛋白抗體 轉(zhuǎn)鐵蛋白抗體 酶聯(lián)免疫吸附試驗

子宮內(nèi)膜異位癥(簡稱內(nèi)異癥)的發(fā)病機制尚不明確，可能與多種原因有關(guān)。骨橋蛋白是近年來發(fā)現(xiàn)的一種分泌型磷酸化糖蛋白，在多種惡性腫瘤組織中高表達，與惡性腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移有關(guān)，且參與機體免疫反應(yīng)的調(diào)節(jié)。其在絨毛膜滋養(yǎng)層、絨毛外滋養(yǎng)細胞、孕早期細胞滋養(yǎng)層和整個胎盤中均有表達，廣泛參與生殖的全過程［1］。有研究表明，自身抗體也參與內(nèi)異癥的發(fā)病過程，如轉(zhuǎn)鐵蛋白抗體［2］。骨橋蛋白作為分泌期子宮內(nèi)膜腺上皮細胞表達明顯上調(diào)的蛋白之一，在孕卵的著床與發(fā)育等方面起重要作用［3～5］，在內(nèi)異癥患者的子宮內(nèi)膜中表達明顯增高。本研究檢測內(nèi)異癥患者血清骨橋蛋白抗體，并探討與轉(zhuǎn)鐵蛋白抗體的關(guān)系，從而為研究其發(fā)病機制及診斷價值提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 血液標(biāo)本

選取2007年6月～2008年12月在本院婦產(chǎn)科經(jīng)腹腔鏡證實為內(nèi)異癥患者共108例為觀察組，其中 I、II期34 例，III、IV 期 74 例，年齡 32.02 ±7.72(20～50)歲。對照組88例選取健康體檢婦女，年齡33.63 ±6.02(21 ～51)歲。術(shù)前采集靜脈血2ml，EDTA抗凝，3 000r離心2min，取血清保存于－70℃冰箱中。各組婦女肝腎功能正常，術(shù)前未接受激素及其他抗內(nèi)異癥的藥物。

1.2 主要試劑

轉(zhuǎn)鐵蛋白(Sigma，美國)，骨橋蛋白(本實驗室通過重組質(zhì)粒表達及純化［6］)，HRP－山羊抗人IgG(北京中杉金橋生物技術(shù)公司)，其他試劑為國產(chǎn)分析純;酶標(biāo)儀(BIO－RAD 680，日本)。

1.3 實驗步驟

將轉(zhuǎn)鐵蛋白、骨橋蛋白抗原用包被液稀釋(濃度均為 1μg/ml)，加入凹孔板，每孔 100μl，4℃過夜，至少12h。PBS洗滌3次。加4%牛血清白蛋白PBS液，每孔 200μl，37℃溫箱孵育 2h。洗板，加待測血清(用PBS液 1:30稀釋)，每孔100μl，置37℃溫箱孵育2h。洗板，加二抗(用PBS按1:8 000稀釋)，每孔加HRP－山羊抗人IgG(1:8 000稀釋)100μl，37℃孵育 2h。洗板，加底物溶液(OPD)，每孔 100μl，避光反應(yīng) 10min，2M H2SO4每孔 50μl終止反應(yīng)，酶標(biāo)儀比色，波長490nm，測定吸光度A值。以P/N≥2.1(P為待測標(biāo)本A值，N為正常對照組平均A值)為陽性標(biāo)準(zhǔn)。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析

采用SPSS10.0軟件進行分析，組間率的比較用χ2檢驗，相關(guān)性采用Pearson相關(guān)分析，計量資料采用t檢驗分析。

2 結(jié)果

2.1 骨橋蛋白抗體、轉(zhuǎn)鐵蛋白抗體的檢測

2.1.1骨橋蛋白抗體觀察組血清中骨橋蛋白抗體OD 值為0.84 ±0.25，對照組為0.63 ±0.20，兩組存在統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.05)。

2.1.2轉(zhuǎn)鐵蛋白抗體觀察組轉(zhuǎn)鐵蛋白抗體OD值為1.06 ±0.31，對照組為 0.75 ±0.27，兩組存在統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.05)。

2.1.3不同臨床分期內(nèi)異癥患者兩種抗體內(nèi)異癥I、II期患者骨橋蛋白抗體 OD 值(1.04 ±0.30)明顯高于內(nèi)異癥III、IV 期患者(0.68±0.20)及對照組(0.63 ±0.20)，均P＜0.05。

2.1.4兩種抗體陽性情況以對照組OD值的均值+2SD為切點值，觀察組轉(zhuǎn)鐵蛋白抗體、骨橋蛋白抗體的陽性率見表1。

表1 兩組血清骨橋蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白抗體陽性情況比較［例(%)］

2.2 骨橋蛋白抗體、轉(zhuǎn)鐵蛋白抗體水平的相關(guān)性

采用Pearson相關(guān)分析方法，發(fā)現(xiàn)內(nèi)異癥患者血清中轉(zhuǎn)鐵蛋白抗體水平和骨橋蛋白抗體水平呈正相關(guān)(r=0.875，P＜0.05)。

3 討論

3.1 骨橋蛋白在內(nèi)異癥病理意義

骨橋蛋白是一種具有多種生物學(xué)活性的分泌型磷酸化糖蛋白，可介導(dǎo)細胞與細胞、細胞與細胞外基質(zhì)的相互作用;介導(dǎo)細胞的趨化、聚集、黏附、增殖和遷移;參與細胞免疫調(diào)節(jié)，而且與生殖有著密切的聯(lián)系［7～9］。在正常月經(jīng)周期中，骨橋蛋白主要表達于分泌中晚期的子宮內(nèi)膜，可能在胚胎植入過程中，受精卵與子宮內(nèi)膜相互作用時發(fā)揮直接效應(yīng)，參與子宮內(nèi)膜受容性的形成。研究表明，骨橋蛋白的表達與植入過程中胚胎滋養(yǎng)層侵入的深度相關(guān)，骨橋蛋白的表達減少與流產(chǎn)有關(guān)［10］。研究發(fā)現(xiàn):骨橋蛋白在內(nèi)異癥患者在位子宮內(nèi)膜分泌期的表達增強，異位子宮內(nèi)膜的表達失去周期性，提示骨橋蛋白在異位子宮內(nèi)膜黏附、種植中起重要的作用［11，12］。骨橋蛋白、歸巢受體CD44、整合素黏附分子以及降解細胞外基質(zhì)的蛋白酶等在子宮內(nèi)膜細胞中大量表達，從而介導(dǎo)細胞的侵襲和轉(zhuǎn)移。

3.2 骨橋蛋白抗體、轉(zhuǎn)鐵蛋白抗體檢測在內(nèi)異癥中的意義

正常情況下，含有大量骨橋蛋白的月經(jīng)期子宮內(nèi)膜可以經(jīng)陰道完全排出體外，當(dāng)內(nèi)異癥時，異位在腹腔中的子宮內(nèi)膜不能經(jīng)陰道排出體外，引發(fā)慢性炎癥反應(yīng)，導(dǎo)致免疫細胞浸潤。研究證實，內(nèi)異癥患者B細胞功能活躍，產(chǎn)生自身抗體，這些自身抗體與相應(yīng)抗原結(jié)合引起體液免疫反應(yīng)，可以干擾孕卵種植，引起不孕和早期自然流產(chǎn)［13，14］。本文對內(nèi)異癥患者骨橋蛋白抗體的初步研究表明，部分內(nèi)異癥患者血清中存在骨橋蛋白抗體，且I、II期抗體水平明顯高于III、IV期患者，提示骨橋蛋白抗體可能與內(nèi)異癥的發(fā)展有關(guān)。此外，內(nèi)異癥患者骨橋蛋白抗體水平與轉(zhuǎn)鐵蛋白抗體水平呈正相關(guān)，這為研究內(nèi)異癥的發(fā)病機制及診斷和預(yù)后提供了新思路。而骨橋蛋白抗體在內(nèi)異癥發(fā)病過程中發(fā)揮何種作用，骨橋蛋白抗體的產(chǎn)生是內(nèi)異癥的原因還是結(jié)果，還有待進一步研究。

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Levels of anti－osteopontin and anti－transferrin antibodies in sera of patients with endometriosis

Zhou Qunfang1，Leng Jinhua2
1.Civil Aviation Hospital，Beijing100123;2.Peking Union Hospital

Objective:To explore the pathogenesis of endometriosis by evaluating levels of anti－osteopontin and anti－transferrin antibodies in sera.Methods:The enzyme－linked immunosorbent assay was used to detect levels of anti－osteopontin and anti－transferrin antibodies in sera of 108 women with endometriosis and 88 healthy women(the control).Results:The average OD values of anti－ osteopontin antibody in sera of women with endometriosis and the control were 0.84 ±0.25 and 0.63 ±0.20，respectively.The average OD values of anti－ transferrin antibody in sera of women with endometriosis and the control were 1.06 ±0.31 and 0.75 ±0.27，respectively.The level of anti－ osteopontin antibody in sera of women with stage I and stage II endometriosis(1.04 ±0.30)was significantly higher than those of women with stage III and stage IV endometriosis(0.68 ±0.20)and the control(0.63 ±0.20，Pall＜0.05).The positive rates of anti－ osteopontin，anti－ transferrin antibodies and both were 25.0%(27/108)，20.3%(22/108)and 13.9%(15/108)，significantly higher than that of the control(Pall＜0.05).The positive correlation between anti－osteopontin antibody level and anti－transferrin antibody level was found.Conclusion:Anti－ osteopontin antibody may be involved in the development of endometriosis.

Endometriosis;Anti－osteopontin antibody;Anti－transferring antibody;Enzyme－linked immunosorbent assay

10.3969/j.issn.1004 －8189.2012.08

2011－12－22

2012－04－05

［責(zé)任編輯:裴開顏］